本文關鍵詞：放射治療聯(lián)合常山酮對荷瘤小鼠腫瘤相關巨噬細胞的影響

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【摘要】：目的:研究放射治療聯(lián)合常山酮對荷瘤小鼠腫瘤微環(huán)境內的腫瘤相關巨噬細胞及脾臟的腫瘤相關巨噬細胞的影響,并以此為基礎探究放射治療對荷瘤小鼠免疫功能的影響。方法:建立肺癌移植瘤動物模型,計數(shù)狀態(tài)良好的Lewis肺癌細胞2×10^6個/只接種于SPF條件下飼養(yǎng)的健康雌性C57BL/6J小鼠右后肢脛腓骨處皮下,待移植瘤直徑達到5mm時(約在接種6天后)進行局部放射治療及用藥處理;荷瘤小鼠的處理,挑選25只腫瘤負荷相近的荷瘤小鼠隨機分組,分別為空白對照組(NC)、單純常山酮組(HF)、單純放射治療組(RT)、放療聯(lián)合常山酮組(RT+HF)、放療聯(lián)合TGF-beta抑制劑SB431542組(RT+SB)等五組,每組5只小鼠。對照組不做治療,單純常山酮組及放療聯(lián)合常山酮組于接種后第6天至2周予以2ug/0.1ml/d常山酮腹腔注射給藥,放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組于相同時間予以腹腔注射終濃度為1uM的SB,劑量為0.1ml/d/只,兩個聯(lián)合組與單純放療組的放射治療處理為給藥后兩天均給予移植瘤局部10Gy×2的6MV-X線放療,并于給藥2周后處死小鼠;實驗檢測,制備小鼠移植瘤及脾臟的單細胞懸液進行流式細胞術檢測移植瘤局部及脾臟的腫瘤相關巨噬細胞的亞型表達情況及比例,冰凍切片進行免疫熒光法檢測移植瘤局部及脾臟腫瘤相關巨噬細胞各個亞型的功能表達情況。結果:在小鼠移植瘤中,腫瘤相關巨噬細胞各亞型表型的表達情況為,NC組M1型巨噬細胞比例較常山酮組顯著減少,M2型巨噬細胞比例無顯著變化,NC組M1/M2比例顯著低于常山酮組;空白對照組的M1、M2及M1/M2比例較RT組無顯著變化,但放射治療組M1比例有下降趨勢,M2比例有升高趨勢;RT+HF組較NC組及HF組M1、M2及M1/M2比例均無顯著變化,但與RT組相比,RT+HF組M1比例有升高趨勢、M2比例有下降趨勢,M1/M2比例呈升高趨勢;HF組M1及M1/M2均比例顯著高于NC及RT組,M2比例無顯著差異;RT+SB M2比例較RT及RT+HF組有增加的趨勢,M1/M2比例顯著低于HF組(p=0.01)。以上結果表明,在荷瘤小鼠的腫瘤局部微環(huán)境內,應用HF可以顯著改變腫瘤相關巨噬細胞的極化方向,使之朝向抗腫瘤的M1型方向分化,單純RT則有使M1/M2下降的趨勢,即朝向免疫抑制的M2方向分化的趨勢,RT聯(lián)合HF相對于單純應用HF會使腫瘤相關巨噬細胞向免疫抑制方向分化的趨勢,但相對于RT,仍有向抑制腫瘤的M2型分化的趨勢。而RT聯(lián)合SB時,相對于HF組則顯著使腫瘤相關巨噬細胞向促腫瘤方向的M2分化。免疫熒光結果顯示在移植瘤局部,腫瘤相關巨噬細胞的功能表達情況為,RT組較NC組,M1型巨噬細胞的功能標志物iNOS減少,M2型巨噬細胞的功能標志物Arg-1增加,提示M1/M2下降的趨勢;RT+HF組較RT、HF組,iNOS升高,Arg-1減少,提示腫瘤相關巨噬細胞向抗腫瘤的M1方向分化。在荷瘤小鼠脾臟中,腫瘤相關巨噬細胞各亞型表型的表達情況為,M1、M2比例在各組均無顯著差別,HF組M1/M2比例顯著高于RT+SB組。放療組與NC及HF組相比,M2有下降趨勢。放療聯(lián)合常山酮組、放療聯(lián)合抑制劑組與放療組和常山酮組相比,M1/M2比例均有升高趨勢,提示放療聯(lián)合HF或SB431542可使腫瘤相關巨噬細胞向抑腫瘤的M1亞型分化。腫瘤相關巨噬細胞各亞型的功能在脾臟情況為,RT、RT+HF、RT+SB三組的M1型巨噬細胞標志物iNOS表達較NC、HF兩組增加,M2巨噬細胞功能標記物Arg-1在RT+HF、RT+SB兩組呈下降趨勢。以上表明在放療聯(lián)合用藥后,腫瘤相關巨噬細胞的功能表達呈向M1型抗腫瘤方向分化。結論:放療會顯著抑制腫瘤局部的腫瘤相關巨噬細胞向抗腫瘤的M1型巨噬細胞分化,腫瘤相關巨噬細胞使局部腫瘤微環(huán)境的呈免疫抑制狀態(tài)。放療聯(lián)合常山酮后可抑制放療導致的促腫瘤形成的M2型巨噬細胞的表達及功能。放療聯(lián)合TGF-β抑制劑SB并未改善局部腫瘤相關巨噬細胞的免疫抑制狀態(tài)。放療對脾臟腫瘤相關巨噬細胞影響較小,但在聯(lián)合HF或SB后,可以促進腫瘤相關巨噬細胞向抗腫瘤的M1型表達。
【關鍵詞】：放射治療 腫瘤相關巨噬細胞 常山酮 免疫微環(huán)境 轉化生長因子β
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 對象和方法17-24
• 1.1 實驗材料17-18
• 1.1.1 實驗動物與細胞17
• 1.1.2 試劑17
• 1.1.3 耗材17-18
• 1.1.4 儀器設備18
• 1.2 實驗方法18-24
• 1.2.1 實驗試劑配制18-19
• 1.2.2 細胞培養(yǎng)19-20
• 1.2.3 建立肺癌移植瘤模型20-21
• 1.2.4 實驗分組及處理21
• 1.2.5 移植瘤微環(huán)境及脾臟單個細胞的制備21-22
• 1.2.6 移植瘤微環(huán)境及脾臟腫瘤相關巨噬細胞表型鑒定22
• 1.2.7 移植瘤微環(huán)境及脾臟腫瘤相關巨噬細胞功能鑒定22-23
• 1.2.8 統(tǒng)計學分析23-24
• 結果24-32
• 2.1 流式細胞術檢測小鼠移植瘤組織中TAMs亞型表達24-26
• 2.2 流式細胞術檢測小鼠脾臟中TAMs亞型表達26-27
• 2.3 冰凍切片免疫熒光檢測小鼠移植瘤組織中TAMs功能表達27-29
• 2.4 冰凍切片免疫熒光檢測小鼠脾臟組織中TAMs功能表達29-32
• 討論32-38
• 3.1 放射治療對免疫功能的積極調節(jié)作用32-33
• 3.2 放射治療與腫瘤的復發(fā)、侵襲與轉移33-34
• 3.3 腫瘤相關巨噬細胞與腫瘤的發(fā)生發(fā)展34-35
• 3.4 放射治療與腫瘤相關巨噬細胞35-36
• 3.5 常山酮與腫瘤的發(fā)生發(fā)展36-38
• 結論38-39
• 參考文獻39-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述 放射治療與腫瘤相關巨噬細胞在腫瘤治療中的研究進展51-68
• 綜述參考文獻58-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

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