本文關(guān)鍵詞：IGF-1R抑制劑PPP對人骨肉瘤細胞U-2OS的影響及其機制的研究

  更多相關(guān)文章： PPP 人骨肉瘤細胞U-2OS EMT 轉(zhuǎn)移

【摘要】：[目的]:觀察IGF-1R特異性抑制劑PPP對人骨肉瘤細胞U-2OS的影響,并初步探討其抗骨肉瘤轉(zhuǎn)移可能的機制。[方法]:1.應(yīng)用MTT方法檢測不同藥物濃度、不同干預(yù)時間對人骨肉瘤細胞U-2OS生長增殖的影響,并在鏡下觀察細胞形態(tài)學變化、照相;2.PPP處理細胞24h后,流式細胞術(shù)檢測骨肉瘤U-2OS細胞的周期變化;3.劃痕愈合實驗和Transwell方法測定PPP對骨肉瘤細胞U-2OS遷移和侵襲能力的影響;4.使用Western blot方法觀察PPP對腫瘤細胞EMT標志物E-cadherin、Vimentin表達水平的改變。[結(jié)果]:1.在倒置相差顯微鏡下觀察IGF-1R抑制劑PPP處理后的細胞,顯示隨著藥物濃度的升高或作用時間的延長,骨肉瘤細胞U-2OS生長緩慢,細胞數(shù)量銳減,分布松散,細胞體積大小不一,形態(tài)不規(guī)則,失去原有特點,胞體皺縮,細胞間隙增大,部分細胞失去貼壁能力而浮起,折光性降低,細胞活力差。2.MTT方法檢測PPP對骨肉瘤細胞U-2OS增殖的影響,PPP濃度設(shè)為0.5μM、1.0μM、2.0μM、4.0μM、8.0μM,并分別處理24h、48h、72h。結(jié)果顯示,PPP可顯著地抑制骨肉瘤U-2OS細胞的增殖,且隨著藥物濃度的升高和作用時間的延長,骨肉瘤細胞U-2OS的增殖抑制率隨之明顯增加(P0.05)。藥物相同作用時間條件下,0.5μM、1.0μM、2.0μM、4.0μM、8.0μM各組兩兩間的比較表明,F24h=208.580、F48h=395.674、F72h=412.220,P24h、48h、72h=0.000;相同藥物濃度下,24h、48h和72h各組間的比較表明,F0.5=40.825、F1.0=22.038、F2.0=91.701、F4.0=69.781、F8.0=22.999,P值均0.01;同時藥物濃度與作用時間之間有交互作用,F=13.471,P=0.000。總之,我們的實驗結(jié)果表明,PPP能明顯抑制人骨肉瘤細胞U-2OS的體外增殖,呈時間和濃度依賴性。3.流式細胞術(shù)分析:0.5μM、1.0μM、2.0μM、4.0μM、6.0μM的PPP處理骨肉瘤U-2OS細胞24h,細胞周期發(fā)生顯著變化,G2/M期細胞數(shù)量明顯增加,S期細胞減少,且周期阻滯作用呈明顯的濃度依賴性(P0.01)。這一結(jié)果說明,PPP阻滯了人骨肉瘤U-2OS細胞S期、G2→M期的過渡,即在PPP作用下,說明同時存在DNA合成、復制和有絲分裂障礙,通過影響細胞周期從而達到抑制細胞增殖的目的。4.為了明確PPP到底能否抑制骨肉瘤的轉(zhuǎn)移,我們運用細胞劃痕及Transwell實驗評價PPP對骨肉瘤細胞遷移和侵襲能力的影響。結(jié)果示,(1)劃痕:Control、0.5μM、1.0μM、2.0μM各組作用U-2OS細胞24h的遷移距離分別為179.71±16.91、191.86±16.31、218.14±10.10、266.14±19.54,48h的遷移距離分別為102.71±16.22、154.28±22.71、216.85±18.82、282.03±52.61。方差分析:時間因素:F=154.66 P=0.00;濃度因素:F=81.46 P=0.00;時間因素與處理因素的交互作用:F=21.27 P=0.00。(2)Transwell:Control、0.5μM、1.0μM、2.0μM各組穿過微孔膜細胞數(shù)分別是(67.66±1.52)、(54.66±2.08)、(38.00±2.00)、(23.66±2.51),各個濃度與對照組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),各處理組間兩兩比較細胞侵襲能力有明顯差異(F=260.54,P0.001),說明PPP抑制骨肉瘤細胞的浸潤侵襲能力呈明顯的濃度依賴性,與劃痕愈合實驗結(jié)果一致。因此得出結(jié)論:PPP能夠抑制人骨肉瘤細胞U-2OS的遷移和侵襲,并且PPP抑制骨肉瘤細胞遷移和侵襲的能力呈濃度依賴性。這與PPP在其它腫瘤中的報道相一致。5.Western blot方法檢測骨肉瘤U-2OS細胞中E-cadherin、Vimentin蛋白的表達變化。結(jié)果顯示,隨著PPP濃度的增加,E-cadherin表達顯著上調(diào)(p0.05),Vimentin表達水平逐漸下降(p0.05),說明PPP可能通過抑制人骨肉瘤U-2OS細胞EMT的發(fā)生,抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。[結(jié)論]:1.PPP呈時間與劑量依賴性地抑制人骨肉瘤U-2OS細胞的體外增殖,其機制可能與細胞周期S期、G2/M期阻滯有關(guān)。2.PPP能夠誘導骨肉瘤細胞S期、G2/M期阻滯,且其周期阻滯作用具有劑量依賴性。3.PPP呈時間與劑量依賴性地抑制人骨肉瘤U-2OS細胞的遷移。4.PPP可以抑制人骨肉瘤細胞U-2OS的侵襲,呈藥物濃度依賴性。5.PPP可能通過抑制人骨肉瘤U-2OS細胞EMT的發(fā)生來抑制骨肉瘤細胞的轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：PPP 人骨肉瘤細胞U-2OS EMT 轉(zhuǎn)移
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R738
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-22
• 參考文獻16-22
• 第一部分IGF-1R抑制劑PPP對人骨肉瘤細胞U-2OS的影響22-42
• 1.實驗材料22-23
• 2 實驗方法23-27
• 3 結(jié)果27-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-42
• 第二部分PPP抗人骨肉瘤細胞U-2OS轉(zhuǎn)移的機制研究42-52
• 1 實驗材料42-46
• 2 實驗方法46-48
• 3 實驗結(jié)果48-49
• 討論49-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-52
• 中英文縮略詞對照表52-53
• 在校期間撰寫和發(fā)表的論文53-54
• 致謝54

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本文編號：803075