本文關(guān)鍵詞：逆基因NANOGP8的表達(dá)與人胃癌SGC-7901細(xì)胞生物學(xué)特性相關(guān)

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【摘要】：目的：構(gòu)建pEGEP-N1-NANOGP8真核表達(dá)載體及針對人NANOGP8基因的干擾質(zhì)粒pshRNA-NANOGP8;探討重組質(zhì)粒pEGFP-N1-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8對人胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖、凋亡、周期、遷移、侵襲的影響,為更深入研究逆基因NANOGP8在胃癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制奠定基礎(chǔ)。方法：(1)從人卵巢癌細(xì)胞SKOV-3中提取總RNA,通過RT-PCR獲得NANOGP8基因,將其克隆到pEGFP-N1質(zhì)粒上,構(gòu)建pEGFP-NI-NANOGP8真核表達(dá)載體,將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切及測序鑒定；(2)構(gòu)建針對人NANOGP8基因的干擾質(zhì)粒pshRNA-NANOGP8及陰性對照質(zhì)粒pshRNA-negative,將構(gòu)建好的兩個重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切、測序鑒定；(3)將測序正確的重組質(zhì)粒在脂質(zhì)體2000的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染入人胃癌SGC-7901細(xì)胞,通過熒光顯微鏡、逆轉(zhuǎn)錄PCR及Western blot法檢測其表達(dá)情況；通過CCK-8方法檢測SGC-7901胃癌細(xì)胞增殖情況；利用流式細(xì)胞儀分析胃癌細(xì)胞周期變化及凋亡情況；TranswellTM實驗驗證SGC-7901細(xì)胞遷移以及侵襲能力的改變情況。結(jié)果：(1)通過RT-PCR成功獲得NANOGP8基因片段,經(jīng)酶切、測序驗證成功構(gòu)建出PEGEP-N1-NANOGP8重組質(zhì)粒； (2)經(jīng)酶切、測序驗證成功構(gòu)建出pshRNA-NANOGP8及pshRNA-negative重組質(zhì)粒；(3)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48小時后的胃癌SGC-7901細(xì)胞能夠通過熒光顯微鏡觀察到熒光蛋白的表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄PCR及Western blot結(jié)果顯示PEGEP-N1-NANOGP8轉(zhuǎn)染組高表達(dá)NANOGP8,并能檢測到NANOGP8-GFP融合蛋白的表達(dá),而pshRNA-NANOGP8轉(zhuǎn)染組NANOGP8低表達(dá)；NANOGP8高表達(dá)組能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,促使細(xì)胞進(jìn)入S期,遷移侵襲能力明顯增強。而低表達(dá)組細(xì)胞增殖受到明顯抑制,細(xì)胞大量停留在G0/G1期,細(xì)胞的侵襲、遷移能力也同樣受到抑制。結(jié)論：逆基因NANOGP8的轉(zhuǎn)錄表達(dá),與胃癌的增殖、細(xì)胞周期、凋亡、遷移、侵襲有密切的關(guān)系。
【關(guān)鍵詞】：逆基因 NANOGP8 胃癌 增殖 凋亡 侵襲
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 第一部分 pEGFP-N1-NANOGP8真核表達(dá)載體的構(gòu)建11-22
• 1 材料和方法11-19
• 2 實驗結(jié)果19-21
• 3 討論21-22
• 第二部分 NANOGP8短發(fā)夾RNA的構(gòu)建22-28
• 1 材料和方法22-25
• 2 結(jié)果25-27
• 3 討論27-28
• 第三部分 重組質(zhì)粒pEGFP-NI-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8在胃癌細(xì)胞SGC-7901中的表達(dá)及其對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響28-42
• 1 材料和方法28-35
• 2 實驗結(jié)果35-41
• 3 討論41-42
• 全文總結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 文獻(xiàn)綜述45-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 致謝53-54
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文54

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本文編號：800209