本文關(guān)鍵詞：PLK1 shRNA干擾對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲的影響

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【摘要】：[目的]Polo樣激酶1(polo-like kinase1,PLK1)是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,因在細(xì)胞周期中起重要作用而受到廣泛關(guān)注。我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中PLK1表達(dá)上調(diào)。大量研究表明PLK1在人類多數(shù)腫瘤中高表達(dá),下調(diào)PLK1的表達(dá)可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),研究PLK1表達(dá)下調(diào)后對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生長(zhǎng)及侵襲等生物學(xué)行為的影響,闡明PLK1在腫瘤發(fā)生中的作用,為鼻咽癌(NPC)的靶向治療提供理論依據(jù)。[方法]構(gòu)建針對(duì)PLK1基因的干擾質(zhì)粒p GPU6/GFP/Neo-sh PLK1及空質(zhì)粒p GPU6/GFP/Neo-sh NC,通過(guò)lipo fectamine TM 2000脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞系(CNE2),G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)綠色熒光表達(dá)情況,q RT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后PLK1基因的m RNA及蛋白在各組細(xì)胞中的表達(dá)情況。采用CCK-8、細(xì)胞劃痕、流式細(xì)胞術(shù)分析、平板克隆形成及細(xì)胞遷移侵襲等實(shí)驗(yàn),觀察PLK1表達(dá)改變對(duì)CNE2細(xì)胞增殖和侵襲等生物學(xué)行為的影響。[結(jié)果]1.成功建立PLK1穩(wěn)定低表達(dá)的CNE2細(xì)胞系。熒光顯微鏡觀察顯示轉(zhuǎn)染組攜帶綠色熒光的細(xì)胞數(shù)達(dá)到90%;測(cè)序結(jié)果經(jīng)Pub Med在線BLAST比對(duì)顯示,目的基因的干擾質(zhì)粒p GPU6/GFP/Neo-sh PLK1吻合率達(dá)100%,證明載體構(gòu)建成功;q RT-PCR、Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染p GPU6/GFP/Neo-sh PLK1質(zhì)粒的細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組)較轉(zhuǎn)染p GPU6/GFP/Neo-sh NC(陰性對(duì)照組)和普通CNE2細(xì)胞(空白組)相比,PLK1基因的m RNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平均明顯降低,表明成功建立PLK1穩(wěn)定低表達(dá)的CNE2細(xì)胞系。2.沉默PLK1表達(dá)可抑制CNE2細(xì)胞的增殖及侵襲能力。CCK8及平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組CNE2/sh PLK1較陰性對(duì)照組CNE2/sh NC及空白組CNE2相比,生長(zhǎng)速度及克隆形成率均降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明PLK1表達(dá)下調(diào)能抑制CNE2細(xì)胞的增殖。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示:轉(zhuǎn)染PLK1低表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞CNE2/sh PLK1較陰性對(duì)照組CNE2/sh NC及空白組CNE2相比,G2期細(xì)胞百分比明顯升高,S期細(xì)胞百分比明顯降低,且凋亡細(xì)胞百分比升高,表明PLK1表達(dá)下調(diào)能導(dǎo)致CNE2細(xì)胞發(fā)生G2期阻滯,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染PLK1低表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞CNE2/sh PLK1較陰性對(duì)照組CNE2/sh NC及空白組CNE2相比,遷移及侵襲能力均降低,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明PLK1表達(dá)下調(diào)能降低CNE2細(xì)胞的侵襲能力。[結(jié)論]PLK1表達(dá)下調(diào)可抑制CNE2細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖及侵襲能力。
【關(guān)鍵詞】：PLK1 鼻咽癌 CNE2 表達(dá)下調(diào) 靶向治療
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 緒論12-16
• 第2章 材料與方法16-30
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 2.1.3 質(zhì)粒和細(xì)胞株18
• 2.1.4 其他18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-30
• 2.2.1 CNE2細(xì)胞培養(yǎng)18-19
• 2.2.2 載體構(gòu)建19-21
• 2.2.3 CNE2穩(wěn)定干擾細(xì)胞系的建立21
• 2.2.4 Western blot檢測(cè)21-23
• 2.2.5 qRT-PCR檢測(cè)23-26
• 2.2.6 CCK-8 實(shí)驗(yàn)(Cell Counting Kit-8)26
• 2.2.7 平板克隆實(shí)驗(yàn)26-27
• 2.2.8 遷移實(shí)驗(yàn)27
• 2.2.9 侵襲實(shí)驗(yàn)27
• 2.2.10 劃痕實(shí)驗(yàn)27-28
• 2.2.11 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)28
• 2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析28-30
• 第3章 結(jié)果30-40
• 3.1 陽(yáng)性克隆的測(cè)序鑒定30
• 3.2 成功構(gòu)建PLK1穩(wěn)定低表達(dá)的CNE2細(xì)胞系30-34
• 3.2.1 熒光顯微鏡觀察結(jié)果30-31
• 3.2.2 Western Blot檢測(cè)PLK1蛋白水平31-32
• 3.2.3 q RT-PCR檢測(cè)PLK1 mRNA水平32-34
• 3.3 PLK1低表達(dá)對(duì)CNE2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響34-40
• 3.3.1 繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線34-35
• 3.3.2 平板克隆實(shí)驗(yàn)35-36
• 3.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)36
• 3.3.4 遷移實(shí)驗(yàn)36-37
• 3.3.5 侵襲實(shí)驗(yàn)37-38
• 3.3.6 劃痕實(shí)驗(yàn)38-40
• 第4章 討論40-46
• 第5章 結(jié)論46-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 文獻(xiàn)綜述52-66
• 參考文獻(xiàn)61-66
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果66-68
• 本研究課題資助項(xiàng)目68-70
• 致謝70-71

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周燕;PLK1 shRNA干擾對(duì)鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲的影響[D];南華大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：796665