本文關(guān)鍵詞：力達(dá)霉素—胰島素樣生長因子1融合蛋白的構(gòu)建及其抗非小細(xì)胞肺癌活性研究

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【摘要】：背景胰島素樣生長因子受體1(IGF-1R)在人非小細(xì)胞肺癌中異常高表達(dá),是非小細(xì)胞肺癌治療的理想靶點;力達(dá)霉素(LDM)是一種強(qiáng)效的抗腫瘤抗生素,它由輔基蛋白(LDP)與發(fā)色團(tuán)(AE)兩部分組成,LDM與抗體或配體的偶聯(lián)物顯示了良好的抗腫瘤療效。目的制備一種由胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力達(dá)霉素(lidamycin,LDM)構(gòu)成的融合蛋白,并對其抗非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性進(jìn)行檢測。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并將其插入到p ET30a載體中,再將獲得的重組表達(dá)載體p ET30-ldp-igf轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),得到融合蛋白LDP-IGF。采用細(xì)胞免疫熒光實驗和基于流式細(xì)胞術(shù)的親和實驗檢測LDP-IGF蛋白與NSCLC細(xì)胞的結(jié)合能力;在體外將LDP-IGF蛋白與LDM的發(fā)色團(tuán)(AE)分子進(jìn)行組裝,獲得烯二炔強(qiáng)化融合蛋白LDP-IGF-AE。MTT實驗檢測LDP-IGF-AE對不同NSCLC細(xì)胞的體外殺傷活性,PI染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測LDP-IGF-AE對細(xì)胞周期的影響,LDP-IGF-AE對NSCLC細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用采用Annexin V-FITC/PI雙染實驗進(jìn)行檢測。結(jié)果經(jīng)過誘導(dǎo)LDP-IGF蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式表達(dá)。采用Ni2+親和層析技術(shù)對包涵體蛋白進(jìn)行分離純化,經(jīng)過變性和分步透析復(fù)性后獲得了高純度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。親和實驗結(jié)果顯示LDP-IGF蛋白與NSCLC細(xì)胞具有高度的親和力。與AE分子進(jìn)行組裝后獲得的強(qiáng)化融合蛋白LDP-IGF-AE對不同的NSCLC細(xì)胞系均有非常強(qiáng)烈的殺傷活性,且其殺傷活性顯著高于LDM。細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡實驗結(jié)果顯示極低濃度的LDP-IGF-AE處理可使NSCLC細(xì)胞阻滯于G2/M期,并可顯著地誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。結(jié)論融合蛋白LDP-IGF-AE對NSCLC細(xì)胞有強(qiáng)大的體外抗腫瘤活性,具有發(fā)展成為NSCLC靶向治療劑的潛能。
【關(guān)鍵詞】：胰島素樣生長因子1 力達(dá)霉素 融合蛋白 非小細(xì)胞肺癌
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 實驗材料11-13
• 實驗方法13-24
• 實驗結(jié)果24-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-43
• 文獻(xiàn)綜述43-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 附錄51-52
• 個人簡歷52-53
• 致謝53

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本文編號：796352