發(fā)布時(shí)間：2017-09-05 01:19

  本文關(guān)鍵詞：PD-Ll分子在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)肺癌免疫逃逸中的作用

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【摘要】：近年來腫瘤免疫治療研究突飛猛進(jìn):機(jī)體免疫系統(tǒng)具有免疫監(jiān)視清除腫瘤細(xì)胞的作用,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中扮演極其重要的角色。而腫瘤的免疫治療與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān),腫瘤微環(huán)境由腫瘤細(xì)胞本身、間質(zhì)細(xì)胞、微血管以及腫瘤浸潤(rùn)細(xì)胞,如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等共同構(gòu)成。作為腫瘤免疫發(fā)生的場(chǎng)所,腫瘤微環(huán)境中存在眾多與腫瘤免疫相關(guān)的因素,包括細(xì)胞因子的負(fù)性調(diào)節(jié)作用,抑制性免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞Treg、抑制性配體受體反應(yīng)以及腫瘤微環(huán)境T細(xì)胞代謝活性的負(fù)調(diào)節(jié)等。研究顯示,負(fù)性協(xié)同刺激分子PD-L1是近年來備受關(guān)注的免疫分子,PD-1/PD-L1信號(hào)通路激活可抑制腫瘤局部微環(huán)境CD4+T、CD8+T細(xì)胞的增殖和活化,免疫效應(yīng)降低,從而介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸,促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。本文著重分析了PD-L1分子在腫瘤微環(huán)境中相關(guān)免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞上的表達(dá),探討其調(diào)節(jié)機(jī)制和生物學(xué)意義,為研究其介導(dǎo)肺癌免疫逃逸的機(jī)制提供新的證據(jù)。一、PD-L1分子在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上的表達(dá)【目的】探討惡性胸水中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上PD-L1的表達(dá)及其臨床意義�！痉椒ā渴占K州大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸科2013年10月到2014年10月期間收治的76例胸水患者臨床資料。肺癌組52例,其中腺癌32例,鱗癌20例,另取結(jié)核性胸膜炎組24例作為研究對(duì)照組。收集胸水,采用ficoll密度梯度離心法獲取胸水單個(gè)核細(xì)胞(PEMC),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PEMC細(xì)胞表面腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上PD-L1、B7-H4的表達(dá)。【結(jié)果】肺癌惡性胸水與結(jié)核性胸水相比,PEMC細(xì)胞表面CD68+PD-L1+(30.16±16.64%vs 14.09±11.89,P0.01)、CD68+B7-H4+(16.97±10.32%vs 7.17±5.52%,P0.01)細(xì)胞及CD68+B7-H4+PD-L1+比例較高(11.05±9.51%vs 3.99±5.03%,P0.01)。在肺鱗癌和腺癌中,PEMC細(xì)胞中上述三種細(xì)胞群體CD68+PD-L1+(28.73±15.03%vs 32.44±19.13,P=0.440)、CD68+B7-H4+(17.83±10.73%vs16.58±12.35%,P=0.701)及CD68+B7-H4+PD-L1+(10.06±7.43%vs12.63±12.17%,P=0.348)比例未見差異(P值均大于0.05)�！拘〗Y(jié)】肺癌惡性胸水PEMC細(xì)胞中CD68+PD-L1+、CD68+B7-H4+、CD68+B7-H4+PD-L1+細(xì)胞比例均明顯高于結(jié)核性胸膜炎組,對(duì)鑒別肺癌惡性胸水及結(jié)核性胸水具有一定的應(yīng)用價(jià)值。二、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞上PD-L1分子表達(dá)的調(diào)節(jié)及其生物學(xué)意義【目的】研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞膜表面PD-L1分子表達(dá)的調(diào)節(jié)作用,并探討其生物學(xué)意義。【方法】(1)采用惡性胸水及胸水中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清(TAMs上清)培養(yǎng)肺癌細(xì)胞(A549細(xì)胞),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)A549細(xì)胞膜表面PD-L1表達(dá),Transwell小室檢測(cè)A549細(xì)胞侵襲能力的改變。(2)收集惡性胸水,采用ficoll密度梯度離心法獲取胸水PEMC,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PEMC細(xì)胞群中TAMs細(xì)胞內(nèi)IL-6、IL-10、TNF-α以及INF-γ的表達(dá)。(3)采用IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ刺激A549細(xì)胞后,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)A549細(xì)胞膜表面PD-L1表達(dá)。(4)應(yīng)用Western blot法檢測(cè)IFN-γ刺激A549細(xì)胞后p-ERK、p-AKT以及p-Stat3的表達(dá)變化。(5)抑制ERK、AKT、Stat3信號(hào)途徑,予IFN-γ刺激72h,檢測(cè)A549細(xì)胞膜表面PD-L1的表達(dá)水平變化。(6)加入PD-1融合蛋白與IFN-γ誘導(dǎo)的A549細(xì)胞膜膜表面PD-L1分子發(fā)生配基化,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的改變以及Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的變化。(7)應(yīng)用RNAi干擾技術(shù),沉默A549細(xì)胞PD-L1分子表達(dá)后,采用CCK-8法檢測(cè)A549細(xì)胞的增殖、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的改變以及Transwell小室檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的變化�！窘Y(jié)果】(1)惡性胸水及胸水中TAMs上清刺激A549細(xì)胞后,其表面PD-L1表達(dá)均有升高,細(xì)胞的侵襲能力明顯增強(qiáng)。(2)惡性胸水PEMC中TAMs內(nèi)IL-10低表達(dá),為2.76%,而IL-6、TNF-α以及INF-γ的表達(dá)均有較高表達(dá),分別為:30.1%、40.2%、12.5%。(3)加入INF-γ刺激A549細(xì)胞后,其細(xì)胞膜表面PD-L1明顯上調(diào),而加入IL-6、IL-10、TNF-α后細(xì)胞膜表面PD-L1沒有明顯改變。(4)IFN-γ刺激A549細(xì)胞后p-AKT以及p-Stat3的表達(dá)增加,而p-ERK的表達(dá)未有明顯改變。(5)分別抑制ERK、AKT、Stat3信號(hào)途徑后,再給予IFN-γ刺激,A549細(xì)胞上PD-L1的表達(dá)水平分別為93.6%、43.8%和25.9%,表明抑制AKT、Stat3信號(hào)途徑可阻斷IFN-γ誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞表面PD-L1表達(dá)。(6)PD-1融合蛋白與A549細(xì)胞膜上誘導(dǎo)表達(dá)的PD-L1分子發(fā)生配基化后,隨著PD-1融合蛋白濃度升高,細(xì)胞的增殖逐漸增加,凋亡逐漸減少,侵襲能力增強(qiáng)。(7)應(yīng)用RNAi干擾技術(shù),干擾PD-L1分子表達(dá)后,細(xì)胞增殖減少,凋亡增加,侵襲能力減弱�！拘〗Y(jié)】胸水中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過分泌IFN-γ上調(diào)A549細(xì)胞膜上PD-L1的表達(dá),該過程需要PI3K/AKT、JAK/Stat3信號(hào)通路的參與。肺癌細(xì)胞膜上PD-L1分子的誘導(dǎo)性高表達(dá),具有抗凋亡、促增殖的作用,細(xì)胞漿PD-L1分子在維系肺癌細(xì)胞的侵襲特性方面具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：肺癌 腫瘤微環(huán)境 腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 細(xì)胞因子 PD-L1 信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-17
• 參考文獻(xiàn)14-17
• 第一部分：PD-L1 分子在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞上的表達(dá)17-26
• 一、材料和方法17-19
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-20
• 三、討論20-22
• 參考文獻(xiàn)22-26
• 第二部分：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞上PD-L1 分子表達(dá)的調(diào)節(jié)及其生物學(xué)意義26-57
• 一、材料和方法26-37
• 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-49
• 三、討論49-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 本課題研究結(jié)論57-58
• 展望58-59
• 綜述59-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 縮略詞表及注釋66-68
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表論文68-69
• 本課題獲得基金資助69-70
• 致謝70-71

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本文編號(hào)：794969