本文關(guān)鍵詞：TLR5和NLRC4通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和部分免疫細(xì)胞的影響

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【摘要】：目的:通過(guò)重組鞭毛素蛋白探究TLR5和NLRC4通路在抑制人乳腺癌細(xì)胞增殖中的作用及其對(duì)小鼠中性粒、NK細(xì)胞、DC和Treg細(xì)胞的影響。方法:試驗(yàn)中用到四種重組鞭毛素蛋白:FliC(激活TLR5和NLRC4),FliCΔ90-97(激活NLRC4),FliC-L3A(激活TLR5),FliCΔ90-97:L3A(不激活TLR5和NLRC4)。1.IPTG誘導(dǎo)表達(dá)和鎳離子親和層析法純化重組沙門氏菌鞭毛素蛋白,通過(guò)檢測(cè)IL-8和IL-1β檢驗(yàn)重組鞭毛素蛋白激活TLR5和NLRC4的生物學(xué)活性。2.qRT-PCR法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中TLR5和NLRC4的表達(dá);采用CCK8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)重組鞭毛素蛋白對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響,Western-blot檢測(cè)NF-κB(TLR5)和P10(NLRC4)通路激活情況。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠中性粒細(xì)胞,NK細(xì)胞,DC和Treg的比例及表面分子。結(jié)果:1.重組鞭毛素蛋白的純度95%,內(nèi)毒素殘留0.01EU/mg蛋白,重組鞭毛素蛋白具有生物學(xué)活性。2.重組鞭毛素蛋白對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞有抑制作用,在0.1μg/ml時(shí),MCF-7細(xì)胞各組抑制率20%。Western-blot結(jié)果顯示,在MCF-7細(xì)胞FliC和FliC-L3A組胞核蛋白中NF-κB高于對(duì)照組,FliC和FliCΔ90-97組檢測(cè)到caspase1 P10片段。3.流式結(jié)果顯示FliC、FliCΔ90-97和FliC-L3A使腹腔中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞比例增加,分別為(8.41±0.04)%和(9.9±2.6)%;(9.1±2.1)%和(10.3±0.3)%;(8.0±0.3)%和(11.0±2.6)%,PBS組為(2.6±1.3)%和(3.2±0.2)%。FliC和FliC-L3A組DC細(xì)胞上CD80和CD86表達(dá)上調(diào)與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。FliC-L3A組調(diào)節(jié)性T細(xì)胞高于其他組。結(jié)論:1.重組鞭毛素蛋白對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制不完全依賴TLR5或NLRC4,可能存在其他機(jī)制。2.TLR5和NLRC4通路在對(duì)中性粒和NK細(xì)胞的趨化中起重要作用。3.重組鞭毛素蛋白主要通過(guò)TLR5通路上調(diào)DCs表面CD80和CD86。
【關(guān)鍵詞】：重組鞭毛素蛋白 TLR5 NLRC4 免疫細(xì)胞 樹(shù)突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 英文略縮詞表8-9
• 引言9-10
• 材料與方法10-26
• 結(jié)果26-37
• 討論37-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述45-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 作者簡(jiǎn)歷53-54
• 致謝54-55
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集55

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本文編號(hào)：794632