本文關(guān)鍵詞：人參皂苷Rh2對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移能力的影響及其作用機(jī)制的初步研究

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【摘要】：研究背景及目的結(jié)腸癌是一種常見的發(fā)生于結(jié)腸部位的惡性消化道腫瘤,隨著近年來人們生活水平的提高,飲食結(jié)構(gòu)、放射損傷、肥胖、吸煙、遺傳等等諸多因素的影響,我國結(jié)腸癌的發(fā)病率處于逐漸上升階段,目前在我國大多數(shù)地區(qū)已經(jīng)成為發(fā)病率上升最快的惡性腫瘤之一。結(jié)腸癌一旦發(fā)生就面臨做手術(shù)、化療,甚至發(fā)生癌變轉(zhuǎn)移、且復(fù)發(fā)率較高、術(shù)后生存期較短,針對這一現(xiàn)狀,如何在結(jié)腸癌發(fā)生早期就積極治療并預(yù)防發(fā)生癌變轉(zhuǎn)移,提高結(jié)腸癌病人的術(shù)后生存率,延長生存期也成為目前的熱門研究課題之一。人參是已在我國臨床應(yīng)用超過兩千多年的傳統(tǒng)的中醫(yī)補(bǔ)氣類藥材,是五加科植物人參(Panax ginseng C. A. Mey.)的根,藥性甘、微苦,微溫,歸肺、脾、心經(jīng)；有大補(bǔ)元?dú)?補(bǔ)脾益肺,生津,安神益智,補(bǔ)諸臟氣,抗疲勞,緩解腦神經(jīng)疲憊之功效。人參皂苷(Ginsenoside)作為人參中主要的活性成分,對癌細(xì)胞具有明顯的抗侵襲轉(zhuǎn)移作用,可配合手術(shù)后服用,增強(qiáng)手術(shù)后傷口愈合及體力恢復(fù)的速度。人參皂苷Rh2是人參的主要有效成分,能抑制腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、轉(zhuǎn)移,誘導(dǎo)其凋亡的同時(shí)還能將異常分化的腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)。人參皂苷Rh2同時(shí)與化療藥物聯(lián)用還可以提高治療效果、降低副作用。本研究旨在從細(xì)胞水平和分子水平方面探討探討人參皂苷Rh2對人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移能力的影響,一方面為闡明人參皂苷Rh2對人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞活性、增殖、凋亡、遷移和轉(zhuǎn)移能力等的方面作用的影響及其相關(guān)的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)；另一方面為人參皂苷Rh2治療人結(jié)腸癌并預(yù)防其癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供實(shí)驗(yàn)藥理依據(jù)。方法：采用MTT比色法對人參皂苷Rh2進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測。用不同濃度的人參皂苷Rh2處理人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞,采用MTT比色法檢測Rh2對LoVo細(xì)胞毒性的影響,根據(jù)結(jié)果確定最終用于研究抑制LoVo細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移能力作用的影響的Rh2濃度。根據(jù)抑制作用適中的藥物劑量和藥物作用時(shí)間,分別設(shè)置空白對照組及實(shí)驗(yàn)組(5、10、20、 40、60μmol/L),通過劃痕試驗(yàn),對LoVo細(xì)胞劃痕加藥處理24h后觀察不同藥物濃度對細(xì)胞遷移的影響；用Transwell法觀察不同藥物濃度的人參皂苷Rh2對細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響；用Western blot法檢測不同藥物濃度的Rh2對CD44、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin以上有表達(dá)差異的基因進(jìn)行蛋白表達(dá)水平變化的檢測。結(jié)果：1.本研究中MTT結(jié)果顯示,與空白對照組比較,濃度為5、10、20、40μmol/L的Rh2處理LoVo細(xì)胞24h后,處理組細(xì)胞生長無明顯抑制,細(xì)胞生存率均無明顯差異(P0.05)。當(dāng)Rh2濃度≥60μ mol/L處理24h、濃度≥40 μ mol/L處理48h、濃度≥20 μ mol/L處理72h時(shí),LoVo細(xì)胞生長明顯受到抑制,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),提示人參皂苷Rh2對LoVo細(xì)胞活力的影響有時(shí)間和濃度依賴性。即Rh2濃度在0至40 μ mol/L范圍內(nèi)處理LoVo細(xì)胞24h對LoVo細(xì)胞既無細(xì)胞毒性作用也不促增殖作用。但隨Rh2作用時(shí)間的延長和濃度增加,Rh2對LoVo細(xì)胞抑制作用增強(qiáng)。所以在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中,把Rh2作用濃度控制在40 μ mol/L以內(nèi),作用時(shí)間為24h進(jìn)行研究。2.劃痕試驗(yàn)和Transwell結(jié)果表明,隨著人參皂苷Rh2藥物濃度增加,其對LoVo細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移能力的抑制作用增強(qiáng),20 μ mol/L以上濃度的Rh2處理LoVo細(xì)胞24h與對照組相比具有明顯抑制作用(P0.05)。3. Westernblot結(jié)果表明,隨著Rh2藥物濃度的升高,CD44、MMP-2蛋白表達(dá)水平下降,TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin蛋白表達(dá)水平上升。結(jié)論：1.人參皂苷Rh2能抑制LoVo細(xì)胞活力及增值,其作用具有時(shí)間和濃度的依賴性。2.人參皂苷Rh2對LoVo細(xì)胞遷移和轉(zhuǎn)移能力有抑制作用,作用具有時(shí)間和濃度依賴性。3.人參皂苷Rh2能下調(diào)CD44、MMP-2蛋白的表達(dá)水平,上調(diào)TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin蛋白的表達(dá)水平。
【關(guān)鍵詞】：人參皂苷Rh2 LoVo細(xì)胞 細(xì)胞遷移 細(xì)胞轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 第一章 文獻(xiàn)研究11-19
• 1.1 人參皂苷Rh2的相關(guān)功能研究進(jìn)展11-15
• 1.2 結(jié)腸癌的研究進(jìn)展15-19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)研究19-45
• 2.1 人參皂苷Rh2對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞活性的影響19-26
• 2.1.1 主要儀器與設(shè)備19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2.1.3 主要溶液及配制20
• 2.1.4 方法20-23
• 2.1.5 結(jié)果23-24
• 2.1.6 討論24-26
• 2.2 人參皂苷Rh2對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞遷移能力的影響26-31
• 2.2.1 主要儀器與設(shè)備26
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)材料26
• 2.2.3 主要溶液及配制26-27
• 2.2.4 方法27
• 2.2.5 結(jié)果27-29
• 2.2.6 討論29-31
• 2.3 人參皂苷Rh2對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞轉(zhuǎn)移功能的影響31-36
• 2.3.1 主要儀器與設(shè)備31
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)材料31
• 2.3.3 主要溶液及配制31-32
• 2.3.4 方法32
• 2.3.5 結(jié)果32-34
• 2.3.6 討論34-36
• 2.4 人參皂苷Rh2對CD44、MMP-2、TIMP-2、E-Cadherin和β-catenin蛋白表達(dá)的影響36-45
• 2.4.1 主要儀器與設(shè)備36
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 2.4.3 主要溶液及配制37-39
• 2.4.4 方法39-41
• 2.4.5 結(jié)果41-43
• 2.4.6 討論43-45
• 結(jié)語45-47
• 研究總結(jié)45
• 存在不足45
• 展望45-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 附錄51-53
• 附錄1 英文縮略語51-53
• 在校期間發(fā)表論文情況53-54
• 致謝54-55
• 統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明55

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本文編號：793547