本文關(guān)鍵詞：miR-328對K562細胞增殖的影響及作用機制

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【摘要】：目的:構(gòu)建miR-328過表達及下調(diào)表達的真核表達載體,探討miR-328對慢性粒細胞白血病(CML)急變期細胞株K562細胞增殖的影響及作用機制。方法:構(gòu)建miR-328過表達及下調(diào)表達的真核表達載體hsa-mi R-328及hsa-miR-328-inhibition,核苷酸測序鑒定重組質(zhì)粒,利用脂質(zhì)體lipofectamineTM2000介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至K562細胞;通過熒光顯微鏡觀察各組K562細胞的轉(zhuǎn)染情況;通過實時熒光定量PCR檢測各組K562細胞中miR-328、C/EBP mRNA的表達水平;CCK-8檢測各組K562細胞增殖的情況;Western-Blot方法檢測各組K562細胞中C/EBPα蛋白表達的情況。結(jié)果:1.成功構(gòu)建重組真核表達載體:hsa-mi R-328、hsa-miR-328-inhibition;2.將載體轉(zhuǎn)染K562細胞,24h后在熒光顯微鏡下可見熒光細胞,表明重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)入K562細胞,48h、72h后可見熒光細胞數(shù)逐漸增多;3.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示與空白對照組、Lip2000組、空載體組,hsa-miR-328-inhibition組相比,hsa-mi R-328組的miR-328呈現(xiàn)明顯表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);4.CCK-8方法檢測結(jié)果顯示與空白對照組、Lip2000組、空載體組,hsa-miR-328-inhibition組相比,has-miR-328組的K562細胞的增殖明顯受抑制,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);5.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示與空白對照組、Lip2000組、空載體組,hsa-miR-328-inhibition組相比,has-mi R-328組的K562細胞中C/EBPαmRNA表達無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);6.Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)has-miR-328組的K562細胞中C/EBPα蛋白表達,其他組細胞C/EBPα蛋白均不表達或極低表達。結(jié)論:miR-328可以抑制K562細胞增殖,其作用機制可能通過上調(diào)C/EBPα的表達。
【關(guān)鍵詞】：miR-328 C/EBPα K562細胞 細胞增殖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.72
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-14
• 第2章 實驗材料14-17
• 第3章 實驗方法17-24
• 第4章 結(jié)果24-31
• 第5章 討論31-33
• 第6章 結(jié)論33-34
• 參考文獻34-38
• 附錄 綜述38-44
• 參考文獻42-44
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果44-45
• 致謝45

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本文編號：792706