本文關(guān)鍵詞：HBV相關(guān)HCC的循環(huán)microRNA差異表達(dá)譜研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞肝癌 miRNAPCRArray microRNA HBV miR-222

【摘要】：肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是原發(fā)性肝癌的主要類型,近年來發(fā)病率和死亡率都呈增高趨勢(shì)。目前,臨床上尚無很好的肝癌早期診斷指標(biāo),大部分患者確診時(shí)已是中晚期。由于錯(cuò)過了有效的治療時(shí)機(jī),導(dǎo)致預(yù)后差、生存率低。因此,尋找一種敏感而特異的HCC早期診斷指標(biāo)仍是有必要的。許多研究發(fā)現(xiàn)miRNA在HCC患者的血清或血漿中表達(dá)失調(diào),可能對(duì)HCC有早期診斷價(jià)值。然而,目前還沒有肝癌特異性循環(huán)mi RNA在乙肝病毒(HBV)相關(guān)小HCC與HBV相關(guān)良性肝病的差異表達(dá)譜的相關(guān)研究報(bào)道。通過比較以發(fā)現(xiàn)在HBV相關(guān)小HCC中差異表達(dá)的miRNAs有助于HBV相關(guān)HCC的早期診斷。目的:本研究擬通過對(duì)人類乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)的小肝細(xì)胞癌(HCC)、肝硬化、肝炎病人和正常人循環(huán)microRNA(miRNA)表達(dá)譜比較,篩選出循環(huán)中差異表達(dá)的miRNA。方法:選取HBV相關(guān)小HCC(23例)、乙肝肝硬化(20例)、乙肝肝炎(20例)及健康對(duì)照(16例)血漿/血清標(biāo)本,利用miScript miRNA PCR Array檢測(cè)84個(gè)人類相關(guān)miRNA在以上標(biāo)本中的表達(dá),以倍數(shù)變化≥2表示有差異,篩選出各組較正常組差異表達(dá)的循環(huán)miRNA。進(jìn)一步選取肝癌(30例)、肝硬化(30例)、肝炎(30例)和健康人(30例)血清標(biāo)本,分別提取各自的總RNA,采用quantitative real-time reverse-transcription polymerase chain reaction(qRT-PCR)法檢測(cè)血清miR-222在各組的表達(dá)量,并對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:在血漿PCR array兩次實(shí)驗(yàn)中,健康對(duì)照、慢乙肝與肝硬化三組43個(gè)miRNAs擴(kuò)增曲線和溶解曲線均良好,但內(nèi)參變化倍數(shù)超過2;肝癌組84個(gè)miRNAs均未擴(kuò)增。綜合分析血清兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果,質(zhì)控達(dá)標(biāo),59個(gè)miRNAs的擴(kuò)增曲線和溶解曲線均良好。慢乙肝、肝硬化和小HCC三組血清中相對(duì)于健康對(duì)照共有18個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,分別為9個(gè)(miR-17、miR-195、miR-19a、miR-19b、miR-20a、miR-25、miR-92a、miR-15b、miR-16)、3個(gè)(miR-195、miR-25、miR-16)、11個(gè)(miR-100、miR-17、miR-18a、mi R-195、mi R-19a、miR-20a、miR-223、miR-25、miR-145、miR-15b、miR-16)miRNAs上調(diào),1個(gè)(miR-205)、3個(gè)(miR-125b、miR-205、miR-26b)、3個(gè)(miR-200a、mi R-205、miR-222)miRNAs下調(diào);在三組中均上調(diào)的有miR-195、miR-25、mi R-16,均下調(diào)的有miR-205;其中僅在小HCC中上調(diào)的為miR-18a、miR-100、mi R-145、miR-223四個(gè)基因,變化倍數(shù)分別為3.48、2.95、2.12、3.91,下調(diào)的為miR-200a、miR-222,變化倍數(shù)分別為0.39、0.50。進(jìn)一步以表達(dá)下調(diào)的miR-222進(jìn)行驗(yàn)證,健康對(duì)照組、肝炎組、肝硬化組及肝癌組血清miR-222的相對(duì)表達(dá)量分別為1.799±1.898、2.210±2.340、2.167±2.173及1.056±1.024,表明miR-222表達(dá)在肝癌組較正常組低表達(dá)。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)慢乙肝、肝硬化和小HCC三組血清中相對(duì)于健康對(duì)照共有18個(gè)差異表達(dá)的miRNAs,其中有6個(gè)miRNAs在HBV相關(guān)的小HCC血清中較其它良性肝病差異表達(dá),為選擇HBV-HCC早期診斷有關(guān)的miRNA和大樣本驗(yàn)證奠定了基礎(chǔ)。血清miR-222的表達(dá)在肝癌組較正常組降低,提示miR-222可能與HCC的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞肝癌 miRNAPCRArray microRNA HBV miR-222
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、HBV相關(guān)HCC的循環(huán)microRNA差異表達(dá)譜研究15-40
• 1.1 對(duì)象和方法15-27
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象15
• 1.1.2 臨床病例資料采集15-17
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器17
• 1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑17-18
• 1.1.5 主要實(shí)驗(yàn)步驟18-27
• 1.2 結(jié)果27-37
• 1.2.1 血漿標(biāo)本mirScripts miRNA PCR Array結(jié)果27
• 1.2.2 血清標(biāo)本mirScripts miRNA PCR Array結(jié)果27-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 小結(jié)39-40
• 二、血清miR-222在HCC中差異表達(dá)分析40-47
• 2.1 對(duì)象和方法40-43
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象40
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備40
• 2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑40-41
• 2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)步驟41-43
• 2.2 結(jié)果43-44
• 2.3 討論44-46
• 2.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 綜述 microRNA在肝癌中的研究進(jìn)展56-70
• 綜述參考文獻(xiàn)64-70
• 致謝70-71

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本文編號(hào)：790352