本文關(guān)鍵詞：HBV相關(guān)HCC的循環(huán)microRNA差異表達譜研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞肝癌 miRNAPCRArray microRNA HBV miR-222

【摘要】：肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是原發(fā)性肝癌的主要類型,近年來發(fā)病率和死亡率都呈增高趨勢。目前,臨床上尚無很好的肝癌早期診斷指標(biāo),大部分患者確診時已是中晚期。由于錯過了有效的治療時機,導(dǎo)致預(yù)后差、生存率低。因此,尋找一種敏感而特異的HCC早期診斷指標(biāo)仍是有必要的。許多研究發(fā)現(xiàn)miRNA在HCC患者的血清或血漿中表達失調(diào),可能對HCC有早期診斷價值。然而,目前還沒有肝癌特異性循環(huán)mi RNA在乙肝病毒(HBV)相關(guān)小HCC與HBV相關(guān)良性肝病的差異表達譜的相關(guān)研究報道。通過比較以發(fā)現(xiàn)在HBV相關(guān)小HCC中差異表達的miRNAs有助于HBV相關(guān)HCC的早期診斷。目的:本研究擬通過對人類乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)的小肝細(xì)胞癌(HCC)、肝硬化、肝炎病人和正常人循環(huán)microRNA(miRNA)表達譜比較,篩選出循環(huán)中差異表達的miRNA。方法:選取HBV相關(guān)小HCC(23例)、乙肝肝硬化(20例)、乙肝肝炎(20例)及健康對照(16例)血漿/血清標(biāo)本,利用miScript miRNA PCR Array檢測84個人類相關(guān)miRNA在以上標(biāo)本中的表達,以倍數(shù)變化≥2表示有差異,篩選出各組較正常組差異表達的循環(huán)miRNA。進一步選取肝癌(30例)、肝硬化(30例)、肝炎(30例)和健康人(30例)血清標(biāo)本,分別提取各自的總RNA,采用quantitative real-time reverse-transcription polymerase chain reaction(qRT-PCR)法檢測血清miR-222在各組的表達量,并對篩選結(jié)果進行驗證。結(jié)果:在血漿PCR array兩次實驗中,健康對照、慢乙肝與肝硬化三組43個miRNAs擴增曲線和溶解曲線均良好,但內(nèi)參變化倍數(shù)超過2;肝癌組84個miRNAs均未擴增。綜合分析血清兩次實驗結(jié)果,質(zhì)控達標(biāo),59個miRNAs的擴增曲線和溶解曲線均良好。慢乙肝、肝硬化和小HCC三組血清中相對于健康對照共有18個差異表達的miRNAs,分別為9個(miR-17、miR-195、miR-19a、miR-19b、miR-20a、miR-25、miR-92a、miR-15b、miR-16)、3個(miR-195、miR-25、miR-16)、11個(miR-100、miR-17、miR-18a、mi R-195、mi R-19a、miR-20a、miR-223、miR-25、miR-145、miR-15b、miR-16)miRNAs上調(diào),1個(miR-205)、3個(miR-125b、miR-205、miR-26b)、3個(miR-200a、mi R-205、miR-222)miRNAs下調(diào);在三組中均上調(diào)的有miR-195、miR-25、mi R-16,均下調(diào)的有miR-205;其中僅在小HCC中上調(diào)的為miR-18a、miR-100、mi R-145、miR-223四個基因,變化倍數(shù)分別為3.48、2.95、2.12、3.91,下調(diào)的為miR-200a、miR-222,變化倍數(shù)分別為0.39、0.50。進一步以表達下調(diào)的miR-222進行驗證,健康對照組、肝炎組、肝硬化組及肝癌組血清miR-222的相對表達量分別為1.799±1.898、2.210±2.340、2.167±2.173及1.056±1.024,表明miR-222表達在肝癌組較正常組低表達。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)慢乙肝、肝硬化和小HCC三組血清中相對于健康對照共有18個差異表達的miRNAs,其中有6個miRNAs在HBV相關(guān)的小HCC血清中較其它良性肝病差異表達,為選擇HBV-HCC早期診斷有關(guān)的miRNA和大樣本驗證奠定了基礎(chǔ)。血清miR-222的表達在肝癌組較正常組降低,提示miR-222可能與HCC的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞肝癌 miRNAPCRArray microRNA HBV miR-222
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、HBV相關(guān)HCC的循環(huán)microRNA差異表達譜研究15-40
• 1.1 對象和方法15-27
• 1.1.1 實驗對象15
• 1.1.2 臨床病例資料采集15-17
• 1.1.3 主要實驗儀器17
• 1.1.4 主要實驗試劑17-18
• 1.1.5 主要實驗步驟18-27
• 1.2 結(jié)果27-37
• 1.2.1 血漿標(biāo)本mirScripts miRNA PCR Array結(jié)果27
• 1.2.2 血清標(biāo)本mirScripts miRNA PCR Array結(jié)果27-37
• 1.3 討論37-39
• 1.4 小結(jié)39-40
• 二、血清miR-222在HCC中差異表達分析40-47
• 2.1 對象和方法40-43
• 2.1.1 實驗對象40
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備40
• 2.1.3 主要實驗試劑40-41
• 2.1.4 主要實驗步驟41-43
• 2.2 結(jié)果43-44
• 2.3 討論44-46
• 2.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 綜述 microRNA在肝癌中的研究進展56-70
• 綜述參考文獻64-70
• 致謝70-71

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳勇;劉巍;;microRNA影響抗腫瘤藥物敏感性相關(guān)研究進展[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2009年09期

2 牛曉曉;王秦秦;;microRNA與肺癌[J];中國肺癌雜志;2010年04期

3 劉靜;王小中;;慢性粒細(xì)胞白血病相關(guān)microRNA的研究進展[J];分子診斷與治療雜志;2010年04期

4 LEE Younghee;LUSSIER Yves A;;Identification of common microRNA-mRNA regulatory biomodules in human epithelial cancer[J];Chinese Science Bulletin;2010年31期

5 唐志強;;The effect of microRNA-21-siRNA-lentivirus on biological behaviors in human hepatic cancer cell line hepG2[J];China Medical Abstracts(Surgery);2012年01期

6 ;PTEN and PDCD4 are Bona Fide Targets of microRNA-21 in Human Cholangiocarcinoma[J];Chinese Medical Sciences Journal;2012年02期

7 林建宇;朱雨捷;王晶;湯溢飛;徐中華;;急性冠狀動脈綜合征相關(guān)microRNA靶向通路及其功能分析[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年04期

8 崔洪亮;張陽德;;microRNA的協(xié)同調(diào)控網(wǎng)的構(gòu)建與研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2012年33期

9 張明杰;徐卓明;朱麗敏;龔霄雷;黃蕊;;先天性心臟病重度肺動脈高壓血漿 microRNA 的分析與驗證[J];上海醫(yī)學(xué);2013年12期

10 孟勝喜;胡義揚;馮琴;;microRNA在中醫(yī)藥防治非酒精性脂肪性肝病中的應(yīng)用[J];中華中醫(yī)藥雜志;2014年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 荊清;袁文俊;秦永文;;microRNA的基因調(diào)控新功能[A];中國生理學(xué)會第五屆全國心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2005年

2 靳新;駱志剛;王金華;管乃洋;;microRNA靶標(biāo)研究進展[A];中國遺傳學(xué)會功能基因組學(xué)研討會論文集[C];2006年

3 ;Comparasion of Inhibitory Effects on Survivin Gene Expression in Prostate Cancer by Vector-based microRNA and siRNA[A];2008年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要[C];2008年

4 朱丹霞;徐衛(wèi);繆扣榮;方成;朱華淵;董華潔;王冬梅;范磊;喬純;李建勇;;慢性淋巴細(xì)胞白血病microRNA異常表達研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

5 Yangchao Chen;;Small molecule modulators of microRNA-34a with anti-cancer activities[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

6 金希;厲有名;;單純性脂變與非酒精性脂肪性肝炎間差異microRNA表達譜研究[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

7 賈新正;盧肖男;聶慶華;張細(xì)權(quán);;雞部分microRNA的同源預(yù)測與克隆驗證[A];中國動物遺傳育種研究進展——第十五次全國動物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2009年

8 李炯;段德民;鄭克孝;;新型非標(biāo)記高通量microRNA芯片技術(shù)[A];第一屆全國生物物理化學(xué)會議暨生物物理化學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略研討會論文摘要集[C];2010年

9 徐小濤;陸曉;孫婧;束永前;;肺癌側(cè)群細(xì)胞microRNA表達譜檢測及初步分析[A];2010’全國腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

10 王俊峰;李巍;吳小江;阮康成;;大鼠附睪microRNA表達譜的研究[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 陳英云 喬蕤琳;哈醫(yī)大成功研發(fā)國內(nèi)首例microRNA轉(zhuǎn)基因及敲減小鼠模型[N];黑龍江經(jīng)濟報;2010年

2 記者 陳青;2厘米以下肝癌檢出率88%[N];文匯報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 崔洪亮;microRNA的腫瘤表達研究及協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析[D];中南大學(xué);2014年

2 馬建華;高粱低磷低氮形態(tài)生理特征及低氮響應(yīng)的microRNA研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 李虔楨;microRNA相關(guān)基因遺傳多態(tài)性與冠心病臨床關(guān)聯(lián)及預(yù)后研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王耀輝;血清microRNA作為乳腺癌診斷標(biāo)志物的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 周霽子;環(huán)境因素對心臟畸形胎兒影響的表觀遣傳學(xué)機制[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

6 張麗;microRNA通過調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞炎性反應(yīng)參與血管性認(rèn)知障礙發(fā)生發(fā)展[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 查若鵬;肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)microRNA的鑒定及其分子機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

8 方硯田;結(jié)腸癌干細(xì)胞分選、差異microRNA表達譜檢測以及miR-449b-CCND1、E2F3通路在結(jié)腸癌干細(xì)胞自我更新的機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

9 辛成齊;椰棗microRNA鑒定及其在果實發(fā)育過程中的表達譜研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

10 李棟;先天性心臟病血漿microRNA表達譜及與GATA4靶序列單核苷酸多態(tài)性的關(guān)聯(lián)研究[D];山東大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 高智紅;應(yīng)用多樣性增量方法識別人類基因組microRNA前體序列[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2010年

2 王娜娜;microRNA進化關(guān)系及編碼特性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2007年

3 王玫;小麥microRNA的鑒定與分析[D];南昌大學(xué);2007年

4 秦保東;原發(fā)性膽汁性肝硬化microRNA表達譜的檢測及其功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 吳曉妍;基于納米復(fù)合材料及生物放大技術(shù)構(gòu)建的電化學(xué)microRNA傳感器的研究[D];西南大學(xué);2015年

6 周景輝;2型糖尿病microRNA表達譜及其信號通路研究[D];華南理工大學(xué);2015年

7 姜溪;血漿microRNA-486、microRNA-499在肺癌中的表達及臨床價值的研究[D];河北大學(xué);2015年

8 林杉;營養(yǎng)誘導(dǎo)舍飼綿羊非繁殖季節(jié)發(fā)情相關(guān)microRNA篩選及其靶基因功能驗證[D];石河子大學(xué);2015年

9 林妹妹;microRNA-192 和 microRNA-21 在 IBD 患者中的表達情況[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

10 徐嬌陽;循環(huán)microRNA用于低氧性肺動脈高壓早期診斷的實驗研究[D];石河子大學(xué);2015年

，

本文編號：790352