本文關鍵詞：非小細胞肺癌患者尿蛋白質組的差異表達分析

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【摘要】：目的:肺癌在發(fā)達國家已成為癌癥死亡的主要原因[1],而其中非小細胞肺癌(non small cell lung cancer NSCLC)約占肺癌總數(shù)的80%。盡管不斷改善肺癌的各種診斷和治療方法,但60%非小細胞肺癌患者在接受治療時已處于晚期[2]。其5年生存率不超過10%,然而Ⅰ期非小細胞肺癌的5年生存率卻高達70%[3]。故早期診斷是非小細胞肺癌治療成功的一個關鍵因素,只有通過早期診斷后選擇優(yōu)化的治療方案,才能增加NSCLC患者的治愈成功率。因此,尋找早期非小細胞肺癌臨床篩查方法和手段尤為重要。尿液是除血漿之外另一種尋找潛在疾病生物標志物的重要生物材料。雖然尿液蛋白質的表現(xiàn)主要反映在泌尿生殖系統(tǒng)疾病,多數(shù)研究也局限于腎臟和泌尿道病變。但最近數(shù)據(jù)表明,尿液蛋白質組學分析也可高度信息化的表達在其他非泌尿系統(tǒng)疾病中,并將有可能應用于這些疾病的臨床。又因臨床上能夠簡便、無創(chuàng)傷的獲得大量尿液標本,因此尿液蛋白質組學研究日益受到重視[4]。鑒于尿液蛋白質組成成分和功能研究可能對某些疾病,特別是腫瘤性疾病的發(fā)生、診斷、預防和治療有很大意義,所以本研究分析比較了健康人、肺部良性病變與非小細胞肺癌患者的尿液蛋白質組表達,以尋找差異表達蛋白質,從而發(fā)現(xiàn)可用于非小細胞肺癌早期篩查、監(jiān)測預后和治療評估的生物標記物。最后,期望能達到針對非小細胞肺癌患者尋找一個強有力的早期篩查方法,以提高早期非小細胞肺癌確診率的目的。方法:本研究以200000×g超高速離心沉淀法進行非腫瘤組和非小細胞肺癌患者組的尿液樣本分離,提取其尿液蛋白質,并運用0.9%1D SDS-PAGE對部分尿液蛋白質進行再分離后分組。對凝膠條帶脫色、還原及烷基化、選取目標膠帶,應用乙腈、胰蛋白酶進行蛋白質凝膠內(nèi)消化和萃取。消化后的蛋白質及肽段混合物進一步使用MS-Thermo-Orbitrap-Velos分析儀對蛋白質及肽段逐一予以鑒定識別,所得質譜數(shù)據(jù)應用MASCO軟件通過NCBI-Human數(shù)據(jù)庫進行數(shù)據(jù)分析,鑒定提取出尿液中所包含的所有蛋白質。同時,通過數(shù)據(jù)搜索和分析得到相關差異表達蛋白質,初步確定出非小細胞肺癌早期篩查的候選生物學標記物。最后,選取臨床病理證實的10例NSCLC患者和10例非腫瘤人群的尿液樣本進行實驗驗證,以明確所選非小細胞肺癌候選生物標記物的敏感性和特異性。從而最終確定出與臨床NSCLC相關的生物學標志物以及進行臨床篩查和診斷的優(yōu)化模式。結果:非小細胞肺癌患者組和非腫瘤組尿液蛋白質在0.9%1D SDS-PAGE中差異性表達主要集中表現(xiàn)于90k Da、60k Da和20k Da-30k Da凝膠條帶中。非小細胞肺癌組鑒定出蛋白質數(shù)1194-2813,平均值2001±363.1;對照組鑒定出蛋白質數(shù)1313-2740,平均值1967±505.0。其中在NSCLC患者尿液蛋白質中確定出4種差異表達蛋白質,包括上調(diào)蛋白LRG1、CA1和下調(diào)蛋白VPS4B、YWHAZ。而這四種差異表達蛋白在作為非小細胞肺癌獨立生物標記物篩查模式時,其敏感性較低,但采用這4種差異蛋白質組合篩查模式對NSCLC進行篩查和診斷,其敏感性得到明顯提高。結論:1、尿液是一種攜帶有多種蛋白質、多肽和氨基酸的生物流體,并且因尿液蛋白質檢測具有取材容易、無損傷、靈敏、特異等優(yōu)點。因此,檢測尿液蛋白質組成,對腫瘤性疾病的早期診斷、疾病進程及預后判斷具有重要價值。2、在非小細胞肺癌患者尿液蛋白質分析中LRG1、CA1蛋白質的表達與NSCLC發(fā)生、發(fā)展呈正相關,而VPS4B、YWHAZ蛋白質的表達與NSCLC發(fā)生、發(fā)展呈負相關。但均提示有可能成為用于NSCLC早期篩查、監(jiān)測預后和治療評估的生物標記物。3、LRG1、CA1、VPS4B和YWHAZ蛋白質作為單一生物標記物應用于NSCLC的篩查和診斷其敏感性較低。而采用生物標記物蛋白質組合模式篩查和診斷,其敏感性明顯優(yōu)于各自單一模式對NSCLC的篩查和診斷,故生物標記蛋白質組合模式在臨床診療中將更具有良好的前景和實用價值。
【關鍵詞】：尿蛋白質組學 非小細胞肺癌 十二烷基硫酸鈉 聚丙烯酰胺凝膠電泳 高效液相色譜 蛋白質芯片 質譜/質譜 膠內(nèi)酶解
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-14
• 研究現(xiàn)狀、成果12
• 研究目的、方法12-14
• 一、樣本收集、處理和尿蛋白質定量測定14-21
• 1.1 材料14-15
• 1.1.1 樣本來源14-15
• 1.1.2 試劑與來源15
• 1.1.3 設備與來源15
• 1.1.4 所用軟件15
• 1.2 方法15-18
• 1.2.1 溶液配制15-16
• 1.2.2 樣本收集16-17
• 1.2.3 樣本處理17
• 1.2.4 蛋白質提取17-18
• 1.2.5 蛋白質濃度測定18
• 1.3 結果18-19
• 1.3.1 尿液收集、處理和蛋白質分離18
• 1.3.2 尿液蛋白質定量測定18-19
• 1.4 討論19-20
• 1.5 小結20-21
• 二、非小細胞肺癌患者尿蛋白質組的差異表達分析21-36
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 樣本來源22
• 2.1.2 試劑與來源22
• 2.1.3 設備與來源22
• 2.1.4 所用軟件22-23
• 2.2 方法23-25
• 2.2.1 溶液配制23
• 2.2.2 0.9% 1D SDS-PAG凝膠電泳蛋白質分離23-24
• 2.2.3 蛋白質膠內(nèi)酶解24-25
• 2.2.4 差異表達蛋白質鑒定25
• 2.2.5 差異表達蛋白質敏感性和特異性分析25
• 2.2.6 差異表達蛋白質的驗證實驗25
• 2.3 結果分析25-32
• 2.3.1 0.9% 1D SDS-PAGE凝膠電泳與圖像分析25-26
• 2.3.2 蛋白質質譜數(shù)據(jù)采集與分析26-28
• 2.3.3 差異蛋白質確定28-30
• 2.3.4 差異蛋白質敏感性、特異性結果分析30-32
• 2.3.5 驗證實驗結果分析32
• 2.4 討論32-34
• 2.5 小結34-36
• 結論36-37
• 參考文獻37-43
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明43-44
• 綜述 非小細胞肺癌早期分子生物學標記篩查現(xiàn)狀44-66
• 綜述參考文獻54-66
• 致謝66

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1 許運龍,郭昭揚,張云興,許賢榮;血管內(nèi)皮生長因子在人非小細胞肺癌中表達的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

2 王繼營,高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細胞肺癌37例[J];中國肺癌雜志;2000年02期

3 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細胞肺癌的化療:一種新趨勢[J];中國肺癌雜志;2000年05期

4 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細胞肺癌[J];中國肺癌雜志;2000年05期

5 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細胞肺癌病人的一項預后因素[J];國外醫(yī)學(內(nèi)科學分冊);2000年11期

6 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J];泰山醫(yī)學院學報;2000年04期

7 朱建英;預計2009年非小細胞肺癌藥物市場將達20億美元[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);2001年02期

8 張利偉,劉樹秋,陳海英,萬錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學;2001年05期

9 王肇炎;晚期非小細胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

10 朱堯武,楊宇飛;非小細胞肺癌的術后輔助治療[J];中國臨床醫(yī)生;2001年12期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強;;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其意義[A];中華醫(yī)學會病理學分會2006年學術年會論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國腫瘤核醫(yī)學新技術研討會論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛;邊海蓉;盧振國;楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復發(fā)非小細胞肺癌[A];2007第六屆全國放射腫瘤學學術年會論文集[C];2007年

4 馮耘;萬歡英;高蓓莉;項軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉換酶二在非小細胞肺癌腫瘤生長和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學會第五屆全國胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學術會議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細胞肺癌術后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會肺癌專業(yè)委員會2011年學術年會論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細胞肺癌患者多因素預后分析[A];第13屆全國肺癌學術大會論文匯編[C];2013年

7 張華;;術前中性粒細胞和淋巴細胞比值對非小細胞肺癌患者預后的影響[A];第13屆全國肺癌學術大會論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細胞肺癌治療思考[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細胞肺癌個體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對中國非小細胞肺癌患者效果佳[N];科技日報;2007年

2 曉白;非小細胞肺癌研究獲重大進展[N];人民日報;2008年

3 記者 張文天;非小細胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進展順利[N];科技日報;2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細胞肺癌的治療進展[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

6 上海長海醫(yī)院呼吸科 夏陽 整理 邱志濤;非小細胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報;2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細胞肺癌發(fā)生機制[N];健康報;2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日報;2014年

9 白京麗;非小細胞肺癌最佳治療方案[N];中國醫(yī)藥報;2000年

10 ;表皮生長因子受體抑制劑在治療非小細胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測用于非小細胞肺癌轉移及預后評估的研究[D];復旦大學;2013年

2 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達影響非小細胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機制[D];復旦大學;2012年

3 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細胞肺癌的實驗研究[D];南京大學;2014年

4 張沛;ILT4在非小細胞肺癌中的作用及分子機制研究[D];山東大學;2015年

5 王世坤;RBP2誘導非小細胞肺癌和食管鱗癌表皮間質化[D];山東大學;2015年

6 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細胞肺癌預后評估中的應用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 邱晨;影響非小細胞肺癌手術后遠期生存的相關因素分析[D];山東大學;2015年

8 姜遠矚;術前血液學指標與淋巴結轉移陰性非小細胞肺癌患者預后關系的研究[D];山東大學;2015年

9 朱良明;STAT3及其靶基因對非小細胞肺癌生物學行為調(diào)控機制的初步實驗研究[D];山東大學;2015年

10 周菊;HPV-16感染對非小細胞肺癌和A549細胞的影響及miRNAs表達改變的研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王勇;誘導型一氧化氮合酶在非小細胞肺癌中表達的臨床意義[D];中國醫(yī)科大學;2006年

2 陳婷;非小細胞肺癌調(diào)強放射治療預后因素分析[D];福建醫(yī)科大學;2015年

3 王波;單向式全胸腔鏡下解剖性肺葉切除術治療早期非小細胞肺癌的學習曲線[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 施桂清;血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合放化療治療非小細胞肺癌的療效及安全性研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 王靜;Eg5、Ki-67在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2015年

6 覃建穎;IL-21和Tc1細胞在非小細胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學;2015年

7 張瑞;ⅢA-N2期非小細胞肺癌手術治療和放射治療的療效對比及相關預后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學;2015年

8 石姣姣;基于多肽構建抗腫瘤靶向藥物的應用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

9 胡世霖;非小細胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達的相關性研究[D];福建中醫(yī)藥大學;2015年

10 王婷婷;細胞因子活化殺傷細胞治療非小細胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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本文編號：789346