本文關(guān)鍵詞：NM23-H2通過誘導(dǎo)自噬抑制胃癌細(xì)胞EMT的發(fā)生

  更多相關(guān)文章： NM23-H2 胃癌細(xì)胞 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 自噬 侵襲 遷移

【摘要】：目的探討NM23-H2高表達(dá)抑制胃癌BGC-823細(xì)胞侵襲和遷移的相關(guān)機(jī)制。方法1.復(fù)蘇胃癌BGC-NM23H2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組細(xì)胞及BGC-MOCK穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體組細(xì)胞,免疫印跡實(shí)驗(yàn)法鑒定。2.光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)改變。3.免疫印跡法檢測EMT相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin和vimentin表達(dá)。4.免疫印跡法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ表達(dá)水平。5.透射電鏡觀察細(xì)胞自噬體形成及超微結(jié)構(gòu)。6.MDC染色免疫熒光觀察自噬泡形成。7.氯喹抑制自噬,免疫印跡法檢測EMT相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin和vimentin的表達(dá)水平。8. Trans well小室觀察NM23-H2高表達(dá)后,BGC-823細(xì)胞侵襲和遷移能力的改變。結(jié)果1.復(fù)蘇胃癌BGC-NM23H2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染組細(xì)胞及BGC-MOCK穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體組細(xì)胞,免疫印跡法鑒定,BGC-NM23H2細(xì)胞NM23-H2表達(dá)高于BGC-823細(xì)胞組與BGC-MOCK空載體組細(xì)胞(P0.01)。2. TGF-β1誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT, BGC-NM23H2+TGF-β1處理組E-cadherin水平上升,vimentin水平明顯下降(P0.001)。3. BGC-NM23H2細(xì)胞與BGC-823細(xì)胞組和BGC-MOCK空載體組細(xì)胞相比,LC3Ⅱ的表達(dá)水平明顯升高(P0.01),電鏡和MDC染色免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明自噬發(fā)生。4.使用氯喹抑制自噬后,觀察到BGC-NM23H2細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)記物E-cadherin水平下降,vimentin水平升高(P0.01)。5.BGC-823高表達(dá)NM23-H2,其侵襲力和遷移力明顯被抑制(P0.01),當(dāng)自噬被抑制后,BGC-NM23H2細(xì)胞的侵襲和遷移力明顯增強(qiáng)(P0.01)。結(jié)論1.NM23-H2抑制BGC-823細(xì)胞發(fā)生EMT。2.NM23-H2促進(jìn)BGC-823細(xì)胞發(fā)生自噬。3.抑制自噬后NM23-H2抑制BGC-823細(xì)胞發(fā)生EMT的作用有所減弱。4.NM23-H2抑制BGC-823細(xì)胞的侵襲和遷移能力,作用機(jī)制可能與誘導(dǎo)自噬發(fā)生從而抑制EMT有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：NM23-H2 胃癌細(xì)胞 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 自噬 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 前言11-15
• 材料與方法15-26
• 1. 實(shí)驗(yàn)相關(guān)細(xì)胞株15
• 2. 主要試劑15-16
• 3. 主要儀器16-17
• 4. 主要試劑的配制方法17-21
• 4.1 DMEM高糖培養(yǎng)液的配制17
• 4.2 細(xì)胞凍存液的配制17
• 4.3 胎牛血清處理17
• 4.4 磷酸鹽緩沖液(PBS)(0.01M,pH值7.2-7.4)的配制17
• 4.5 0.25%胰酶的配制17-18
• 4.6 檸檬酸鹽緩沖液(0.01M,pH值3.0)的配制18
• 4.7 4%多聚甲醛配制18
• 4.8 5mg/ml的MTT溶液配制方法18
• 4.9 氯喹(CQ)的配制18
• 4.10 3%濃度的戊二醛配制18
• 4.11 0.1mg/ml(1%)BSA封閉液18
• 4.12 TGF-β1抗體的配制18
• 4.13 0.1%甲基紫溶液的配制18-19
• 4.14 次強(qiáng)酸的配制19
• 4.15 MDC溶液的配制19
• 4.16 Ⅳ型膠原的配制19
• 4.17 Western blot免疫印跡主要試劑配制19-21
• 5. 主要實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 5.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組21-22
• 5.2 細(xì)胞形態(tài)觀察22
• 5.3 自噬體形態(tài)觀察22
• 5.4 MDC染色免疫熒光觀察細(xì)胞自噬泡形成22
• 5.5 MTT法測氯喹濃度對細(xì)胞存活率影響22-23
• 5.6 Transwell小室實(shí)驗(yàn)23
• 5.7 Western Blot(免疫印跡)分析23-25
• 6. 統(tǒng)計學(xué)分析25-26
• 結(jié)果26-29
• 1. 鑒定胃癌BGC-823細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NM23-H2基因26
• 2. NM23-H2抑制胃癌BGC-823細(xì)胞發(fā)生EMT26
• 2.1 檢測BGC-NM23H2細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)志物的改變26
• 2.2 觀察BGC-823細(xì)胞高表達(dá)NM23-H2細(xì)胞形態(tài)的改變26
• 3. NM23-H2誘導(dǎo)胃癌BGC-823細(xì)胞發(fā)生自噬26-27
• 3.1 檢測BGC-NM23H2細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ的表達(dá)水平26
• 3.2 觀察BGC-NM23H2細(xì)胞自噬囊泡的形成26-27
• 3.3 觀察BGC-NM23H2細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)27
• 4. 抑制自噬后BGC-NM23H2細(xì)胞EMT的改變27-28
• 4.1 篩選最適氯喹濃度27
• 4.2 氯喹作用細(xì)胞后自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ表達(dá)水平27
• 4.3 氯喹作用細(xì)胞后自噬囊泡的形成27
• 4.4 抑制自噬后BGC-NM23H2細(xì)胞EMT的改變27-28
• 5. 抑制自噬后胃癌BGC-823細(xì)胞侵襲及遷移力的改變28-29
• 5.1 抑制自噬后胃癌BGC-823細(xì)胞侵襲力的改變28
• 5.2 抑制自噬后胃癌BGC-823細(xì)胞遷移力的改變28-29
• 討論29-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 附圖38-49
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文49-50
• 致謝50

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本文編號：784801