本文關(guān)鍵詞：FAT10在肝癌和結(jié)腸癌患者血漿中的表達(dá)及診斷價(jià)值分析

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【摘要】：背景和目的肝癌和結(jié)腸癌均是世界范圍內(nèi)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,在亞太地區(qū)惡性腫瘤死亡率中分別位列第3和第5位。且近年來(lái),結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率明顯上升。早期肝癌缺乏典型臨床癥狀,癥狀顯著者大多已進(jìn)入中晚期。當(dāng)前,手術(shù)切除是治療肝癌最好的方法。中晚期肝癌的治療方案還包括肝動(dòng)脈栓塞術(shù)(TACE),無(wú)水酒精注射(PEI)和射頻消融術(shù)。盡管存在這些治療方法,但是肝癌的早期診斷仍然是改善患者預(yù)后的重要途徑。甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)作為肝癌早期診斷的主要血清學(xué)診斷指標(biāo),因其具有非侵入性的優(yōu)勢(shì)被廣泛應(yīng)用。臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn),AFP在早期肝癌和小肝癌診斷中的敏感性和特異性不夠令人滿意。早期肝癌中40%的AFP是陰性的。2010年,美國(guó)肝病研究協(xié)會(huì)(AASLD)在其公布的肝癌診斷指南中,不再使用AFP作為肝癌的篩查指標(biāo)。另外,多數(shù)肝癌疑似患者并不容易接受肝臟穿刺活檢,因?yàn)樗鼘儆谟袆?chuàng)性檢查,組織學(xué)診斷這一金標(biāo)準(zhǔn)在臨床應(yīng)用中受到限制。因此,探索新的血清學(xué)標(biāo)記物應(yīng)用于肝癌和結(jié)腸癌的早期診斷有一定的必要性。FAT10 mRNA(人類白白細(xì)胞抗原信使RNA,human leukocyte antigen-F adjacent transcript 10 mRNA)位于人類6號(hào)染色體上,I型主要組織相容性復(fù)合物(major histocompatibility complex,MHC)編碼區(qū)域的末端,緊挨人類白細(xì)胞抗原的F區(qū),由此而得名。FAT10蛋白包含165個(gè)氨基酸殘基,最初因?yàn)槠銫端和N端與泛素蛋白高度相似而被命名為雙泛素蛋白。FAT10蛋白隸屬于類泛素蛋白家族,并且可以通過(guò)蛋白酶體系統(tǒng)參與蛋白質(zhì)的降解過(guò)程。fat10mrna定位于真核生物細(xì)胞核,通過(guò)結(jié)合人類紡錘體檢查位點(diǎn)mad2參與細(xì)胞周期循環(huán)管理,mad2的異常調(diào)節(jié)和染色體不穩(wěn)定性有關(guān)。最近發(fā)現(xiàn),fat10mrna可參與管理細(xì)胞周期循環(huán)、誘導(dǎo)染色體不穩(wěn)定性,參與修飾腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α,tnf-α)等,而染色體不穩(wěn)定性可以導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)中,應(yīng)用含有19378個(gè)已知基因的核苷酸芯片篩選出肝癌、肝硬化和病毒性肝炎差異基因表達(dá)圖譜,結(jié)果表明fat10基因在肝癌中顯著高表達(dá)。有研究證明,炎性環(huán)境下fat10基因在肝癌和結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)。但是,血漿中fat10mrna及蛋白表達(dá)水平,可否作為肝癌和結(jié)腸癌的一種血清學(xué)診斷標(biāo)志目前還未有研究。在本實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量pcr(real-timepcr)技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)方法(elisa)測(cè)定fat10mrna和蛋白在肝癌、結(jié)腸癌、肝硬化及健康志愿者血漿中的表達(dá)水平,通過(guò)分析fat10蛋白在肝癌和結(jié)腸癌診斷中的靈敏度和特異度,評(píng)估其臨床診斷價(jià)值。材料和方法1.材料:臨床研究資料:70例肝癌血漿樣本取自2014年6月-2015年4月河南省人民醫(yī)院肝膽外科和消化內(nèi)科住院患者,另選同期住院60例肝硬化、64例結(jié)腸癌患者,64例健康志愿者選自體檢中心。70例肝癌中男51例、女19例,年齡54.03歲±8.93歲。所有肝癌患者均進(jìn)行tnm分期,并使用child-pugh方法評(píng)估肝臟功能分級(jí)。結(jié)腸癌患者中男38例,女26例,年齡53.55歲±6.56歲,使用duke's方法進(jìn)行分期。肝癌和結(jié)腸癌患者血樣本收集前均未行放療或化療,依靠超聲、ct,mri等方法診斷,且經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。正常對(duì)照組選取同時(shí)期體檢健康志愿者,所有參加研究患者均簽署知情同意書(shū),本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。2.方法:2.1pcr:分別提取肝癌、結(jié)腸癌、肝硬化和健康對(duì)照組血漿中總rna,應(yīng)用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)a260/a280吸光度比值,若a260/a280在1.8-2.0之間說(shuō)明所提取的rna純度良好,可進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cdna,隨后嚴(yán)格按照購(gòu)自日本takara公司的rt-pcr試劑盒檢測(cè)不同組別中血漿fat10mrna陽(yáng)性表達(dá)率,pcr反應(yīng)結(jié)束后出現(xiàn)熔解曲線和擴(kuò)增曲線,將ct值在18-35之間定義為表達(dá)陽(yáng)性,利用所得ct值計(jì)算產(chǎn)物相對(duì)表達(dá)量。2.2.elisa檢測(cè)隨機(jī)選取部分血漿進(jìn)一步進(jìn)行elisa實(shí)驗(yàn),本實(shí)驗(yàn)選取肝癌血漿70例,肝硬化血漿40例,結(jié)腸癌患者、正常人血漿各32例,實(shí)驗(yàn)前規(guī)劃空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔,嚴(yán)格按照f(shuō)at10-elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,利用96孔酶標(biāo)儀測(cè)出每孔相應(yīng)的od值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,或者得出四參數(shù)分析公式,通過(guò)已知標(biāo)準(zhǔn)品濃度值計(jì)算樣品濃度值。3.統(tǒng)計(jì)分析fat10mrna相對(duì)表達(dá)量和蛋白計(jì)量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(mean士sd)表示。多組之間比較采用方差分析、kruskal-wallis秩和檢驗(yàn),兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)、mann-whitneyu檢驗(yàn)。fat10和afp與臨床特征之間相關(guān)檢驗(yàn)運(yùn)用mann-whitneyu檢驗(yàn)或者kruskal-wallis檢驗(yàn)。受試者工作特征曲線(roccurve)被用于分析fat10蛋白和afp蛋白的診斷價(jià)值。應(yīng)用spss22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析肝癌、肝硬化及健康組之間fat10mrna和蛋白表達(dá)頻率差異。制圖工具選用graphpad6.0版((graphpadsoftware,lajolla,ca,usa)。雙側(cè)檢驗(yàn)p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.fat10mrna在各組中的表達(dá)水平肝癌、肝硬化、健康組血漿fat10mrna的陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.85%(51/70),28.3%(17/60)和12.5%(8/64),三者之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);肝癌組fat10陽(yáng)性表達(dá)率明顯高與肝硬化組(p0.01)和正常志愿者(p0.01)。肝硬化組與健康志愿者比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。三組中fat10mrna的相對(duì)表達(dá)量分別為6.83士3.37,2.14士0.70,1.08士0.46,三組之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。肝硬化和健康志愿者之間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。肝癌患者血漿fat10mrna表達(dá)水平與肝癌tnm分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn),結(jié)腸癌組中fat10mrna相對(duì)表達(dá)量為4.04士3.33,陽(yáng)性表達(dá)率為59.4%(38/64),與健康組比較差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),且fat10mrna上調(diào)表達(dá)與結(jié)腸癌duke’s分期(p0.05)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)(p0.05)。fat10mrna在afp陰性肝癌中的敏感度為68.8%,當(dāng)比較小肝癌和非肝癌組(肝硬化和健康志愿者)時(shí),發(fā)現(xiàn)其敏感度為68.8%,特異度為79.8%。2.fat10蛋白表達(dá)水平血漿fat10蛋白在肝癌、肝硬化、健康志愿者中平均表達(dá)濃度依次是293.855±127.61pg/ml、169.30±58.659pg/ml、142.87±70.08pg/ml。三組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=53.34,p0.01)。肝癌組分別與肝硬化、健康組比較均具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。肝硬化和健康組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.086),盡管fat10蛋白在肝硬化中也有輕度上調(diào)表達(dá)。肝癌血漿中fat10蛋白濃度高表達(dá)與tnm分期(p=0.034,0.05)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)((p=0.032,0.05)。fat10蛋白在afp陰性肝癌,小肝癌的平均表達(dá)濃度依次是271.57±128.68pg/ml、299.71±110.02pg/ml。分別與健康志愿者比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。血漿fat10蛋白在結(jié)腸癌的平均表達(dá)濃度是192.806±61.69pg/ml。結(jié)腸癌組和健康組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),并且fat10蛋白在結(jié)腸癌中的濃度與結(jié)腸癌患者duck’s分期和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。3.roc曲線分析結(jié)果利用roc分析血漿fat10蛋白濃度結(jié)果,綜合靈敏度和特異度分析診斷方法的準(zhǔn)確度。當(dāng)肝癌與非肝癌組相比較時(shí),根據(jù)國(guó)際推薦標(biāo)準(zhǔn),以20ng/ml為afp臨界值,得出afp蛋白敏感度和特異度分別為78.6%和81.9%。運(yùn)用roc曲線,得出fat10蛋白質(zhì)最佳臨界值為194.14pg/ml,肝癌與健康組相鑒別auc值為0.874(95%置信區(qū)間:0.800-0.949),敏感度78.6%,特異度87.5%。肝癌與肝硬化相鑒別auc值為0.826(95%置信區(qū)間:0.749-0.903),敏感度為78.6%,特異度77.5%。小肝癌與非肝癌相鑒別auc值為0.865(95%置信區(qū)間:0.717-0.955)。當(dāng)小肝癌組與肝硬化相鑒別時(shí)敏感度和特異度分別為75.0%和77.5%、與健康志愿者組相鑒別時(shí)fat10的敏感度和特異度分別為75.0%和84.4%。聯(lián)合fat10蛋白和afp蛋白,診斷敏感度可以上升到81.3%。roc曲線分析發(fā)現(xiàn)當(dāng)afp陰性肝癌與非肝癌組比較時(shí),auc值是0.836(95%置信區(qū)間:0.724-0.947),進(jìn)一步分析當(dāng)afp陰性肝癌分別與肝硬化、健康組相鑒別均具有較好的診斷意義,auc值分別為0.797(95%置信區(qū)間:0.660-0.934)、0.884(95%置信區(qū)間:0.785-0.982);特異度分別為77.5%、87.5%。結(jié)論1.肝癌組血漿中FAT10 mRNA和蛋白水平較對(duì)照組均明顯增高。FAT10mRNA與肝癌TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。FAT10蛋白與肝癌的TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。血漿FAT10 mRNA和蛋白在結(jié)腸癌患者中的表達(dá)水平較健康志愿者明顯升高,并且與腫瘤Duke’s分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。這些提示FAT10可能參與肝癌和結(jié)腸癌的發(fā)生和進(jìn)展。2.ROC曲線表明FAT10蛋白作為肝癌無(wú)創(chuàng)性診斷標(biāo)志物具有較高的準(zhǔn)確度,且FAT10有可能成為肝癌和結(jié)腸癌診斷中的一個(gè)新的血清學(xué)指標(biāo),另外,它還可以應(yīng)用于AFP陰性肝癌和早期肝癌的輔助診斷,聯(lián)合FAT10和AFP蛋白可以提高肝癌的正確診斷率。
【關(guān)鍵詞】：肝癌 結(jié)腸癌 FAT10 mRNA AFP 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 實(shí)時(shí)熒光定量
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-16
• 中英文縮略對(duì)照表16-17
• 引言17-19
• 材料與方法19-25
• 結(jié)果25-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 綜述 類泛素蛋白家族在腫瘤中的研究和進(jìn)展41-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)介及發(fā)表文章53-54
• 致謝54

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1 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進(jìn)展[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2006年02期

2 張志敏;;肝癌會(huì)遺傳嗎?[J];肝博士;2006年03期

3 徐連根;周晶;雷偉;沈志祥;;瘦素及其受體在肝癌組織中的表達(dá)及意義[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2006年05期

4 魏麗珍;李勝棉;張楠;溫登瑰;周燁;王士杰;;688例肝癌患者發(fā)病特點(diǎn)及診療狀況分析[J];肝臟;2010年02期

5 ;我國(guó)科研人員發(fā)現(xiàn)促進(jìn)肝癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因[J];臨床薈萃;2010年10期

6 吳生;;盤(pán)點(diǎn)誘發(fā)肝癌的7大元兇[J];肝博士;2012年01期

7 鄧慶華;一家四例肝癌報(bào)道[J];中國(guó)廠礦醫(yī)學(xué);1995年06期

8 王定珠;;觥籌交錯(cuò) 過(guò)度疲勞 肝癌乘機(jī)而入[J];健康博覽;2005年11期

9 笑山,吳蓉蓉;喝咖啡可以減少肝癌發(fā)生率[J];健康之路;2005年04期

10 ;遠(yuǎn)離肝癌 預(yù)防在先[J];農(nóng)民文摘;2006年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 俞順章;穆麗娜;;飲水中藻類毒素與肝癌關(guān)系和控制的研究(摘要)[A];全國(guó)腫瘤流行病學(xué)和腫瘤病因?qū)W學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

2 楊秉輝;;肝癌預(yù)防的新話題-非酒精性脂肪性肝病與肝癌[A];第十二屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 丁光偉;楊玉秀;徐秋霞;徐存拴;;肝癌多基因表達(dá)異常初步研究[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

4 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進(jìn)展[A];第三屆全國(guó)重型肝病及人工肝血液凈化學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2007年

5 劉耕陶;孫華北;方亞南;;肝癌發(fā)生的化學(xué)預(yù)防[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

6 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學(xué)分析[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學(xué)分析[A];第五屆全國(guó)肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 呂巖;韓學(xué)鋒;;肝癌患者需求的評(píng)估[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)工程學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)年會(huì)暨《醫(yī)療設(shè)備信息》創(chuàng)刊20周年慶祝會(huì)論文集[C];2006年

9 孫華;魏懷玲;劉耕陶;;雙環(huán)醇對(duì)化學(xué)毒物促發(fā)肝癌的防治作用及作用機(jī)制研究[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

10 謝靜媛;戴煒;涂愛(ài)民;趙文高;符花;胡應(yīng)龍;;深圳地區(qū)53例肝癌發(fā)生的相關(guān)因素探討[A];全國(guó)第2屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨國(guó)家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會(huì)議論文匯編[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 湖北宜昌 胡獻(xiàn)國(guó);吸煙與肝癌[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

2 四川成都 孫清廉;遠(yuǎn)離肝癌 謹(jǐn)防四大危險(xiǎn)因素[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

3 特約撰稿 北京朝陽(yáng)醫(yī)院京西院區(qū)肝膽外科主任 孫文兵;警惕肝癌的過(guò)度治療[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2007年

4 健康時(shí)報(bào)特約記者 孫理;三招不得肝癌[N];健康時(shí)報(bào);2008年

5 葉建平;專家提醒肝癌患者保護(hù)生命 重在“三早”防治[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2008年

6 通訊員 韋夏 本報(bào)記者 鄧宏鷹 鐘少鴻;不良飲食習(xí)慣易誘發(fā)肝癌[N];中國(guó)食品報(bào);2009年

7 記者 顧泳;我國(guó)肝癌患者占全球55%[N];解放日?qǐng)?bào);2010年

8 解放軍302醫(yī)院 劉士敬;四成肝癌酒精泡出來(lái)的[N];健康時(shí)報(bào);2010年

9 記者 顏維琦 曹繼軍;我科學(xué)家揭示肝癌發(fā)生早期分子機(jī)制[N];光明日?qǐng)?bào);2012年

10 記者 胡德榮;肝癌發(fā)生早期階段分子機(jī)制被揭示[N];健康報(bào);2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳放;TOPK蛋白和肝癌發(fā)生以及相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 張怡安;中樞神經(jīng)特異性RNA結(jié)合蛋白NOVA1在肝癌中的表達(dá)及其促進(jìn)腫瘤發(fā)展的潛在分子機(jī)制探究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 殷杰;E3泛素連接酶Prp19對(duì)肝癌侵襲的影響及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 周宇紅;分化抑制因子ID1在調(diào)控化療誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞“干性”改變中的作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 王盛;FOXA1基因變異和調(diào)控異常促，

本文編號(hào)：783532