本文關(guān)鍵詞：Genistein抑制裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤生長的研究

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【摘要】：背景:卵巢惡性腫瘤致死率居婦科惡性腫瘤首位。其中卵巢上皮性腫瘤占85%~90%。約63%的上皮性卵巢癌患者在發(fā)現(xiàn)時已有廣泛轉(zhuǎn)移,其五年生存率約27%[1]。在理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)基礎(chǔ)上,影響卵巢癌患者生存率的重要因素是化療后腫瘤復(fù)發(fā)或?qū)熕幬锏墨@得性耐藥。因此,探尋新型有效的抗癌制劑成為而今卵巢癌治療研究的重要課題。Genistein(稱為金雀異黃素)是抗癌活性最強(qiáng)的天然的異黃酮類化合物。它作為酪氨酸蛋白激酶抑制劑,具有多種生物學(xué)活性,包括弱雌激素樣作用、抗氧化作用、抑制血管生成作用、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期作用等。研究表明genistein有預(yù)防腫瘤、抗腫瘤作用,并且能增強(qiáng)多種耐藥腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性[2,3]。因此,天然藥物genistein以低毒高效的優(yōu)勢受到廣泛關(guān)注。然而genistein水溶性差,生物利用度低[4]。在大多數(shù)的體內(nèi)外實驗中,通常用二甲基亞砜(DMSO)作為實驗藥物的溶劑,但是DMSO對細(xì)胞的毒副作用不可忽視,它不僅影響實驗效果,而且也限制了藥物的臨床應(yīng)用[5]。本實驗采用羥丙基-β-環(huán)糊精作為藥物的輔料,經(jīng)其包合后,藥物溶解度、穩(wěn)定性及生物利用度均得到了提高[6]。多項研究表明,micro RNAs可調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡,并調(diào)節(jié)癌癥相關(guān)信號通路,在腫瘤的形成發(fā)展中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。近年來,發(fā)現(xiàn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT,epithelial-mesenchymal-transition)與腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。micro RNAs可通過相關(guān)信號通路調(diào)節(jié)EMT,進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目的:本課題以人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤為研究對象,給予genistein不同劑量單獨應(yīng)用及genistein低劑量與順鉑聯(lián)合應(yīng)用,通過觀察移植瘤體積、抑瘤率及E-cadherin m RNA、mi R-200a和E-cadherin蛋白的表達(dá)情況,探討Genistein對人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,為Genistein在上皮性卵巢癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:1細(xì)胞培養(yǎng):在RPMI-1640培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)中培養(yǎng)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞系。將培養(yǎng)瓶放在37℃、含5%CO2的培養(yǎng)箱中。2建立裸鼠移植瘤模型、進(jìn)行實驗分組:選取BALB/C/nu/nu無胸腺裸小鼠,雌性,4~6周齡,體重16-18g,在SPF級環(huán)境下飼養(yǎng)。常規(guī)無菌培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞,將對數(shù)生長期細(xì)胞配制成2.5×107個/ml單細(xì)胞懸液,在無菌條件下接種于裸鼠皮下,每只裸鼠接種0.2ml(約5×106個細(xì)胞)單細(xì)胞懸液。觀察移植瘤生長情況,于接種第7天選出移植瘤直徑在4~7mm的裸鼠進(jìn)行試驗,將選出的模型隨機(jī)分成:對照組(輔料組)Genistein低、中、高劑量組,順鉑組,順鉑+Genistein低劑量組。每組6只裸鼠。3制備實驗藥物:實驗藥物均用0.9%氯化鈉注射液配制成所需濃度,立即使用。4給藥方法:Genistein低、中、高劑量分別按含genistein 50mg/kg、150mg/kg、450mg/kg腹腔注射,每天一次,連續(xù)21天;對照組按Genistein高劑量組所含羥丙基β-環(huán)糊精量進(jìn)行腹腔注射,每天一次,連續(xù)21天;順鉑組以3mg/kg進(jìn)行腹腔注射,每天一次,連用7天,21天后處死;Genistein低劑量+順鉑組用藥方法同兩藥單獨給藥方法。5測量裸鼠重量及移植瘤體積和重量:自接種后開始每天觀察裸鼠精神、飲食、大便、活動及生長等情況。用藥前及用藥后每周測裸鼠體重,移植瘤的最長徑(a)和最短徑(b),計算移植瘤體積V(mm3)=πab2/6。處死裸鼠剝?nèi)×鼋M織后稱重,計算抑瘤率IR(%)=(1-治療組移植瘤平均瘤重/對照組移植瘤平均瘤重)×100%。6 RT-q PCR檢測瘤組織中E-cadherin m RNA、mi R-200a的表達(dá)。7免疫組化檢測瘤組織中E-cadherin蛋白的表達(dá)情況。8統(tǒng)計學(xué)方法:采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。以P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1給藥過程順利。(1)隨用藥時間的延長,各組裸鼠體重均有增長。順鉑組和聯(lián)合用藥組裸鼠體重增長緩慢,與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Genistein不同劑量組和對照組裸鼠體重增長明顯,組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(2)在精神狀態(tài)、飲食、活動性方面,順鉑組和聯(lián)合用藥組裸鼠表現(xiàn)差;Genistein不同劑量組和對照組裸鼠表現(xiàn)好。順鉑組對裸鼠精神狀態(tài)、飲食、活動性的影響,比聯(lián)合用藥組嚴(yán)重。Genistein不同劑量組與對照組對其影響無明顯差別,且均比順鉑組和聯(lián)合用藥組好。(3)隨時間延長各組瘤體積均逐漸增大,治療組移植瘤平均體積均小于對照組。比較各組抑瘤率為:聯(lián)合用藥組順鉑組Genistein包合物高劑量組中劑量組低劑量組。2移植瘤組織中E-cadherin m RNA和mi R-200a表達(dá)情況:各組均有E-cadherin m RNA和mi R-200a表達(dá)。順鉑組和對照組E-cadherin m RNA和mi R-200a呈低表達(dá);在Genistein不同劑量組呈高表達(dá),且隨Genistein劑量增加,表達(dá)增強(qiáng)。順鉑組E-cadherin m RNA的表達(dá)與對照組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;Genistein低劑量組E-cadherin m RNA的表達(dá)與順鉑組和對照組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;分析Genistein不同劑量組和對照組,除Genistein中劑量組和高劑量組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義外,其余兩兩比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義。順鉑組、聯(lián)合用藥組、Geinstein低劑量組與對照組相比,mi RNA200a的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義;除Genistein高劑量組分別與對照組、Genistein低劑量組比較對mi RNA200a表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義外,其余組兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。3移植瘤組織中E-cadherin蛋白表達(dá)情況:所有分組均有E-cadherin蛋白的表達(dá)。在對照組、順鉑組、聯(lián)合用藥組和Genistein低劑量組呈低表達(dá);在Genistein中、高劑量組呈高表達(dá),隨Genistein劑量增加,表達(dá)增強(qiáng)。順鉑組、聯(lián)合用藥組與對照組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。分析Genistein不同劑量組和對照組,除Genistein高、中劑量組與對照組比較,E-cadherin蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義外,其他各組兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1 Geinstein在抑制腫瘤生長同時,不會影響裸鼠的生存狀態(tài)。并且可減輕化療藥物的毒副作用。2 Genistein與順鉑均具有抑制腫瘤生長的作用,呈劑量依賴性;聯(lián)合用藥比單獨用藥對腫瘤生長的抑制作用更強(qiáng),但統(tǒng)計學(xué)分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義,可能與樣本量小有關(guān)。3 Genistein可增加E-cadherin m RNA及mi RNA200a的表達(dá),且呈劑量依賴性。Genistein也可增強(qiáng)E-cadherin蛋白的表達(dá),也呈劑量依賴性。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 SKOV3 Genistein miR-200a E-cadherin
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-29
• 附表29-34
• 討論34-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述 與EMT相關(guān)的機(jī)制研究進(jìn)展44-54
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 高振芹;胡永斌;周建華;;MAPK信號通路與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)型[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2009年04期

2 袁鵬;黃艷紅;辛?xí)匝?宋暉;田爽;于月成;王德堂;;Genistein對耐藥卵巢癌細(xì)胞SKOV-3增殖、凋亡和順鉑敏感性的影響[J];腫瘤防治研究;2006年03期

3 唐勇;王輝;陳偉娟;李文通;李洪利;趙修世;;EMT經(jīng)p38-MAPK調(diào)節(jié)乳腺癌MCF-7細(xì)胞P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥[J];中國腫瘤生物治療雜志;2010年02期

4 Ferenc Sipos;Orsolya Galamb;;Epithelial-to-mesenchymal and mesenchymal-to-epithelial transitions in the colon[J];World Journal of Gastroenterology;2012年07期

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本文編號：783635