本文關鍵詞：MiR-138、miR-145對人結腸癌Caco-2細胞生物學行為的影響

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【摘要】：背景結腸癌在惡性腫瘤發(fā)病率中居第三位,在腫瘤相關死亡原因中居第四位。盡管近年來手術、化療、放療和靶向治療等治療方法有了較大進步,但結腸癌的高轉移率和高病死率仍是重大的難題,因此進一步闡明結腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,成為結腸癌研究的熱點。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一類大小長約20~25個核苷酸的單鏈非編碼RNA,通過與靶mRNA的3'-UTR區(qū)不完全或完全互補結合的方式調控基因表達,影響細胞生長、增殖、分化和凋亡等多種生物學過程。目的探討miRNA(miR-138、miR-145)對人結腸癌Caco-2細胞遷移、增殖及細胞周期等生物學行為的影響及對增殖相關蛋白c-myc表達水平的影響。以期為后續(xù)進一步研究miR-138、miR-145在結腸癌中的生物學功能和具體調控機制,從而為結腸癌早期診斷及治療提供實驗依據。方法構建miR-138、miR-145及陰性對照(Negative control,NC)質粒,并培養(yǎng)結腸癌Caco-2細胞,將實驗分為3組進行:miR-138組、miR-145組及NC組。采用脂質體轉染法將miR-138、miR-145及NC質粒轉入Caco-2細胞,并于不同時間點在倒置熒光顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)及轉染效率。采用細胞劃痕實驗檢測miR-138、miR-145轉染結腸癌Caco-2細胞后對細胞遷移的影響;以噻唑藍(MTT)增殖試驗檢測miR-138、miR-145轉染結腸癌Caco-2細胞后對細胞增殖的影響;用流式細胞術檢測miR-138、miR-145轉染結腸癌Caco-2細胞后對細胞周期的影響。分別提取miR-138、miR-145轉染組及NC組細胞總蛋白,用免疫印跡法檢測miR-138、miR-145轉染結腸癌Caco-2細胞后對增殖相關蛋白c-myc表達水平的影響。結果Caco-2細胞轉染miR-138、miR-145及NC質粒后,miR-138組、miR-145組細胞劃痕愈合速度較NC組細胞劃痕愈合速度較慢,差異有統計學意義(p0.05)。MiR-138組、miR-145組細胞增殖活力與NC組相比明顯受到抑制,差異有統計學意義(p0.05)。同時miR-138組、miR-145組細胞與NC組細胞相比,G1期百分比增高,差異有統計學意義(p0.05),S期、G2期百分比則無明顯變化(p0.05)。免疫印跡法檢測發(fā)現miR-138組、miR-145組的Caco-2細胞中c-myc蛋白表達水平較NC組降低。結論MiR-138、miR-145在結腸癌Caco-2細胞中過表達,可以抑制細胞的遷移和增殖能力,并可使細胞發(fā)生G_1期阻滯,減慢細胞周期進程。同時miR-138、miR-145可降低增殖相關蛋白c-myc的表達水平,從而抑制細胞的增殖。
【關鍵詞】：細胞遷移 細胞增殖 細胞周期 結腸癌 微小核糖核酸
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-26
• 結果26-29
• 討論29-31
• 小結31-32
• 附圖32-34
• 參考文獻34-37
• 綜述：MicroRNAs作為潛在的腫瘤標志物:機遇與挑戰(zhàn)37-51
• 參考文獻44-51
• 附錄51-52
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況52-53
• 致謝53-54
• 個人簡歷54

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本文編號：782048