本文關(guān)鍵詞：MiR-138、miR-145對(duì)人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：背景結(jié)腸癌在惡性腫瘤發(fā)病率中居第三位,在腫瘤相關(guān)死亡原因中居第四位。盡管近年來手術(shù)、化療、放療和靶向治療等治療方法有了較大進(jìn)步,但結(jié)腸癌的高轉(zhuǎn)移率和高病死率仍是重大的難題,因此進(jìn)一步闡明結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,成為結(jié)腸癌研究的熱點(diǎn)。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一類大小長(zhǎng)約20~25個(gè)核苷酸的單鏈非編碼RNA,通過與靶mRNA的3'-UTR區(qū)不完全或完全互補(bǔ)結(jié)合的方式調(diào)控基因表達(dá),影響細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和凋亡等多種生物學(xué)過程。目的探討miRNA(miR-138、miR-145)對(duì)人結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞遷移、增殖及細(xì)胞周期等生物學(xué)行為的影響及對(duì)增殖相關(guān)蛋白c-myc表達(dá)水平的影響。以期為后續(xù)進(jìn)一步研究miR-138、miR-145在結(jié)腸癌中的生物學(xué)功能和具體調(diào)控機(jī)制,從而為結(jié)腸癌早期診斷及治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法構(gòu)建miR-138、miR-145及陰性對(duì)照(Negative control,NC)質(zhì)粒,并培養(yǎng)結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞,將實(shí)驗(yàn)分為3組進(jìn)行:miR-138組、miR-145組及NC組。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將miR-138、miR-145及NC質(zhì)粒轉(zhuǎn)入Caco-2細(xì)胞,并于不同時(shí)間點(diǎn)在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及轉(zhuǎn)染效率。采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-138、miR-145轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞遷移的影響;以噻唑藍(lán)(MTT)增殖試驗(yàn)檢測(cè)miR-138、miR-145轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞增殖的影響;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)miR-138、miR-145轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞周期的影響。分別提取miR-138、miR-145轉(zhuǎn)染組及NC組細(xì)胞總蛋白,用免疫印跡法檢測(cè)miR-138、miR-145轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞后對(duì)增殖相關(guān)蛋白c-myc表達(dá)水平的影響。結(jié)果Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-138、miR-145及NC質(zhì)粒后,miR-138組、miR-145組細(xì)胞劃痕愈合速度較NC組細(xì)胞劃痕愈合速度較慢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。MiR-138組、miR-145組細(xì)胞增殖活力與NC組相比明顯受到抑制,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。同時(shí)miR-138組、miR-145組細(xì)胞與NC組細(xì)胞相比,G1期百分比增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),S期、G2期百分比則無明顯變化(p0.05)。免疫印跡法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)miR-138組、miR-145組的Caco-2細(xì)胞中c-myc蛋白表達(dá)水平較NC組降低。結(jié)論MiR-138、miR-145在結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞中過表達(dá),可以抑制細(xì)胞的遷移和增殖能力,并可使細(xì)胞發(fā)生G_1期阻滯,減慢細(xì)胞周期進(jìn)程。同時(shí)miR-138、miR-145可降低增殖相關(guān)蛋白c-myc的表達(dá)水平,從而抑制細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞遷移 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期 結(jié)腸癌 微小核糖核酸
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-31
• 小結(jié)31-32
• 附圖32-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 綜述：MicroRNAs作為潛在的腫瘤標(biāo)志物:機(jī)遇與挑戰(zhàn)37-51
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 附錄51-52
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況52-53
• 致謝53-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷54

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本文編號(hào)：782048