本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-30a-5p影響肺癌細(xì)胞增殖及遷移的研究

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【摘要】：背景：肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率及致死率最高的癌癥,其中80%屬于非小細(xì)胞肺癌。盡管肺癌的臨床研究取得了較大的進(jìn)展,早期的診斷技術(shù)不斷改進(jìn),手術(shù)、放化療及生物治療等治療技術(shù)不斷進(jìn)步,但是非小細(xì)胞癌的5年生存率仍然很低。僅依靠臨床研究來提高肺癌患者的生存率及降低復(fù)發(fā)率是不夠的,加強(qiáng)病因發(fā)病學(xué)(特別是相關(guān)基因)的研究并開發(fā)診斷和治療肺癌的新靶點(diǎn)成為當(dāng)前迫切的問題,而miRNA的發(fā)現(xiàn)及深入研究提供了這種可能。微小RNA (MicroRNAs)是一類長(zhǎng)約22個(gè)堿基的內(nèi)源性單鏈非編碼RNA。miRNA可與靶基因mRNA的3'非編譯區(qū)(3'UTR)中的位點(diǎn)互補(bǔ)結(jié)合通過降解mRNA或抑制mRNA翻譯兩種方式調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá),進(jìn)而影響生命活動(dòng)。它的表達(dá)及功能失調(diào)常常會(huì)引起多種重要過程的紊亂,包括細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等。在腫瘤的發(fā)生過程中,不同的miRNA可能起著類似抑癌基因或者癌基因的作用。miR-30a-5p作為miRNA中的一種,近年有報(bào)道其在與多種腫瘤密切相關(guān)。然而,miR-30a-5p在肺癌中的所發(fā)揮的作用尚不清楚。目的：探討miR-30a-5p在肺癌中的差異性表達(dá)及臨床意義,進(jìn)一步研究miR-30a-5p影響肺癌細(xì)胞增殖及遷移的可能機(jī)制,為明確肺癌發(fā)病機(jī)制提供重要的理論依據(jù),并也有助于為肺癌診斷和治療尋找可能的的潛在靶標(biāo)。方法：通過實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù),分別檢測(cè)miR-30a-5p在臨床患者的術(shù)后肺癌組織及相應(yīng)的無瘤正常組織中、多種肺癌細(xì)胞株及人正常胚肺細(xì)胞株的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。就miR-30a-5p的肺癌組織中的表達(dá)水平與患者多種臨床病理因素(年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期、腫瘤轉(zhuǎn)移)及臨床預(yù)后分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的相關(guān)性分析。。利用生物信息學(xué)軟件(MiRanda、RNAhybrid和Findtar3軟件)預(yù)測(cè)1niR-30a-5p可能作用的靶基因。利用雙熒光素酶報(bào)告基因分析實(shí)驗(yàn)對(duì)靶基因進(jìn)行驗(yàn)證。通過實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡等實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察,：niR-30a-5p在mRNA水平和蛋白水平上對(duì)靶基因的調(diào)控作用。通過細(xì)胞增殖、細(xì)胞平板克隆形成、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞劃痕及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)研究轉(zhuǎn)染miR-30a-5p對(duì)肺癌細(xì)胞增殖及遷移等生物學(xué)特性的影響。構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)miR-30a-5p的肺癌細(xì)胞株A549-miR-30a-5p并用其進(jìn)行裸鼠移植瘤成瘤實(shí)驗(yàn),觀察荷瘤小鼠移植瘤生長(zhǎng)情況；進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)移植瘤中細(xì)胞核增殖、細(xì)胞凋亡及其所調(diào)控的基因的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果：在臨床肺癌標(biāo)本及多種肺癌細(xì)胞株中,miR-30a-5p均呈現(xiàn)低表達(dá)。miR-30a-5p在已發(fā)生轉(zhuǎn)移的肺癌組織樣本中的表達(dá)量更低。miR-30a-5p的低表達(dá)與腫瘤TNM分期及是否轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P0.05),而與年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度均無相關(guān)性(P0.05); miR-30a-5p的低表達(dá)與不良預(yù)后呈正相關(guān)(P0.05)。乳酸脫氫酶A(以下簡(jiǎn)稱LDHA)是miR-30a-5p作用的靶基因。miR-30a-5p可直接結(jié)合于LDHA mRNA的3'UTR并抑制熒光素酶的活性。在A549和H460細(xì)胞株中,過表達(dá)miR-30a-5p可抑制LDHA蛋白的表達(dá)量,并不改變LDHA mRNA的表達(dá)量。轉(zhuǎn)染miR-30a-5p模擬物或siR-LDHA小干擾RNA均可抑制肺癌A549和H460細(xì)胞的體外增殖、遷移；轉(zhuǎn)染miR-30a-5p或siR-LDHA可引起肺癌A549和H460細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期,但兩者均不會(huì)引起A549和H460肺癌細(xì)胞的凋亡。成功構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)miR-30a-5p的A549-miR-30a-5p肺癌細(xì)胞株；裸鼠體內(nèi)移植瘤成瘤實(shí)驗(yàn)的。結(jié)果提示,過表達(dá)miR-30a-5p可抑制肺癌A549細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的移植瘤生長(zhǎng)。移植瘤免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,過表達(dá)miR-30a-5p可抑制肺癌細(xì)胞移植瘤中PCNA和LDHA蛋白的表達(dá)；過表達(dá)miR-30a-5p不能促進(jìn)移植瘤細(xì)胞在體內(nèi)的凋亡。結(jié)論：miR-30a-5p在臨床肺癌腫瘤組織及肺癌細(xì)胞中均低表達(dá)；1miR-30a-5p的低表達(dá)與肺癌TNM分期,有無轉(zhuǎn)移及肺癌臨床不良預(yù)后均具有正相關(guān)性。乳酸脫氫酶A (LDHA)是miR-30a-5p在肺癌中的靶基因。過表達(dá)miR-30a-5p可抑制LDHA的蛋白的表達(dá),引起體外肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)周期阻滯,抑制肺癌腫瘤細(xì)胞的體外增殖；抑制腫瘤細(xì)胞的遷移；抑制腫瘤細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)。引起
【關(guān)鍵詞】：miR-30a-5p 肺癌 乳酸脫氫酶A 細(xì)胞增殖 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-17
• 1. 材料與方法17-46
• 2. 結(jié)果46-70
• 3. 討論70-75
• 小結(jié)75-76
• 參考文獻(xiàn)76-85
• 綜述85-95
• 參考文獻(xiàn)91-95
• 附錄：英漢縮略語名詞對(duì)照95-97
• 致謝97-98
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄98

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1 陳芳琳;陳正堂;;綠色熒光蛋白基因標(biāo)記的肺癌細(xì)胞株的建立[J];重慶醫(yī)學(xué);2007年19期

2 高利偉;朱文;馮志華;安寧;;高轉(zhuǎn)移和低轉(zhuǎn)移人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株的比較蛋白組學(xué)研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年05期

3 夏梁,蔡偉麗,張麗娟,孫一娜,肖雪媛,何大澄;體外培養(yǎng)的不同亞型肺癌細(xì)胞株差異蛋白的初步分析[J];現(xiàn)代儀器;2004年01期

4 孫繼麗,賀修勝,余艷輝,陳主初;BNIP3L基因在肺癌組織中的表達(dá)及結(jié)構(gòu)分析[J];癌癥;2004年01期

5 宋春林,陳耀勇,鄒東霆,李冰,葛曰萍;肺癌細(xì)胞株肺癌相關(guān)基因差異表達(dá)分析[J];江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn);2004年05期

6 王炳勝;石德光;翟書悅;劉登凱;張秀麗;劉秀芳;張海;;益氣活血方對(duì)肺癌細(xì)胞株上皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)及侵襲能力的影響[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2006年09期

7 朱彥君;夏偉;曹國(guó)軍;丁紅梅;高亞萍;楊光;邵寧生;;不同轉(zhuǎn)移能力肺癌細(xì)胞株差異非編碼RNA的鑒定[J];中華腫瘤防治雜志;2009年04期

8 楊桂青;王東;王義善;王園園;楊柯;;黑蒜提取液對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞株的放療增敏作用[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2013年08期

9 盛智,徐光;二苯乙烯類化合物對(duì)肺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)的抑制作用[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年05期

10 林琳,黃震宇,張中華,楊瑤琴,胡晶瑩,朱明潔,許凱黎;應(yīng)用免疫PCR法檢測(cè)肺癌細(xì)胞株方法的建立[J];腫瘤;1998年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王勇;李德冠;吳紅英;王月;英璐路;孟愛民;樊飛躍;;輻射耐受肺癌細(xì)胞株的初步建立[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)放射毒理專業(yè)委員會(huì)第七次、中國(guó)毒理學(xué)會(huì)免疫毒理專業(yè)委員會(huì)第五次、中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致突專業(yè)委員會(huì)第二次、中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致畸專業(yè)委員會(huì)第二次、中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致癌專業(yè)委員會(huì)第二次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

2 王軍臣;符雪蓮;高勇;李琦;;G蛋白偶聯(lián)受體家族C型5A(GPRC5A)在肺癌組織中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)日程及論文匯編[C];2010年

3 周永列;胡惟孝;呂亞萍;邱蓮女;王文松;楊忠愚;劉建棟;饒國(guó)武;;四嗪二甲酰胺對(duì)肺癌細(xì)胞株A549體內(nèi)外作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

4 劉潔薇;侯梅;李潞;許峰;尤嘉琮;李洋;劉彬;祖玲玲;周清華;;運(yùn)用改良抑制消減雜交法對(duì)人不同轉(zhuǎn)移潛能大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株差異表達(dá)基因的篩選及驗(yàn)證[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

5 羅猛;鄧益;侯梅;李潞;許峰;尤嘉琮;李洋;劉彬;祖玲玲;周清華;;骨橋蛋白在不同轉(zhuǎn)移潛能肺癌細(xì)胞株中的差異表達(dá)及其與肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)功能研究[A];第13屆全國(guó)肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

6 魯為山;李書軍;劉彬;李洋;羅猛;孫麗亞;尤嘉琮;周清華;;不同轉(zhuǎn)移潛能人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)移相關(guān)miRNAs的篩選研究[A];第九屆全國(guó)腫瘤轉(zhuǎn)移學(xué)術(shù)大會(huì)暨2011年黑龍江省醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)年會(huì)摘要集[C];2011年

7 許慶勇;徐向英;高媛;劉珊珊;胡松柳;;反復(fù)射線照射誘導(dǎo)輻射抗拒肺癌細(xì)胞株的建立及其基因表達(dá)譜分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)放射腫瘤治療學(xué)分會(huì)六屆二次暨中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤放療專業(yè)委員會(huì)二屆二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

8 陸燕蓉;林蘋;張潔;周宏遠(yuǎn);黃孝忠;寧其志;楊可;;HGPRT缺陷型Lewis肺癌細(xì)胞株的篩選及其生物學(xué)特征[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

9 羅猛;劉迪;劉成武;梅宏;周清華;;慢病毒介導(dǎo)的穩(wěn)定沉默nm23-H1基因的肺癌細(xì)胞株的建立及生物學(xué)行為改變[A];2012貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)胸心血管外科年會(huì)論文集[C];2012年

10 周永列;胡惟孝;呂亞萍;邱蓮女;王文松;楊忠愚;劉建棟;饒國(guó)武;;四嗪二甲酰胺對(duì)肺癌細(xì)胞株A549體內(nèi)外作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2006年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

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1 肖偉;肺癌Th1/Th2的漂移及黃芪、川芎嗪促逆轉(zhuǎn)作用的研究[D];山東大學(xué);2004年

2 李定彪;Nm23-H1基因調(diào)控肺癌細(xì)胞PKA信號(hào)通路及其分子機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2004年

3 莫曉媚;肺癌細(xì)胞株中miRNA的篩選及miR-544a促進(jìn)肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2014年

4 胡文獻(xiàn);轉(zhuǎn)錄因子KLF4抑制肺癌發(fā)生、發(fā)展的作用研究[D];浙江大學(xué);2008年

5 胡燕婕;肺癌呼氣特征性VOCs的篩選及診斷價(jià)值研究[D];浙江大學(xué);2010年

6 陳剛;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子對(duì)肺癌細(xì)胞株藥物敏感性影響的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

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1 羅斌;MicroRNA-30a-5p影響肺癌細(xì)胞增殖及遷移的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 康艷霞;熱療聯(lián)合化療對(duì)肺癌細(xì)胞株作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

3 王曉睿;YB-1蛋白在人類不同肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

4 蔡紅艷;抗胃泌素釋放肽前體McAb的鑒定及其對(duì)肺癌細(xì)胞株生長(zhǎng)的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

5 牛韌;MicroRNA-128在肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

6 趙曉鵬;miRNA-449a在肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其生物學(xué)功能研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

7 莊瑩;P-S6K1在肺癌中的表達(dá)與雷帕霉素治療敏感性的關(guān)系[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2009年

8 邱小明;不同轉(zhuǎn)移潛能人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株基因表達(dá)譜變化的研究[D];四川大學(xué);2007年

9 王勇;RASGRF2真核表達(dá)載體構(gòu)建、肺癌穩(wěn)定細(xì)胞株建立及功能的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

10 呂彥天;CD40信號(hào)在肺癌細(xì)胞株H1299增殖、趨化、侵襲中的作用及其機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：781853