本文關(guān)鍵詞：4-1BB信號(hào)在Treg中的免疫調(diào)控作用及同種異源Treg對(duì)腫瘤細(xì)胞直接效應(yīng)初步研究

  更多相關(guān)文章： 多發(fā)性骨髓瘤 Treg 4-1BB 樹(shù)突狀細(xì)胞 Treg 多發(fā)性骨髓瘤 免疫抑制

【摘要】：第一部分多發(fā)性骨髓瘤患者Treg表達(dá)水平及4-1BB信號(hào)在Treg中的免疫調(diào)控作用目的:(1)研究多發(fā)性骨髓瘤患者Treg的表達(dá)水平(2)探討4-1BB信號(hào)對(duì)Treg細(xì)胞的促增殖作用。方法:(1)采用免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤患者外周血和骨髓Treg表達(dá);(2)采用免疫磁珠法分選CD4+CD25+CD127low/-細(xì)胞,利用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其表面4-1BB表達(dá),同時(shí)加入IL-2后測(cè)定其4-1BB表達(dá)有無(wú)改變;(3)采用免疫磁珠法富集骨髓瘤原代細(xì)胞,與同源PBMC進(jìn)行腫瘤淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng),CFSE法測(cè)定阻斷4-1BB/4-1BBL信號(hào)通路后CD4+CD25high細(xì)胞的增殖改變結(jié)果:(1)多發(fā)性骨髓瘤患者外周血Treg水平較正常對(duì)照組高,多發(fā)性骨髓瘤患者的Treg水平與臨床特征和預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)性;(2)Treg細(xì)胞表面構(gòu)成性表達(dá)4-1BB分子,IL-2可上調(diào)Treg表面4-1BB表達(dá),(3)原代骨髓瘤細(xì)胞表面高表達(dá)4-1BBL分子,通過(guò)4-1BB-FC交聯(lián)4-1BBL阻斷4-1BB活化信號(hào)能夠抑制Treg增殖.結(jié)論:多發(fā)性骨髓瘤患者Treg細(xì)胞表達(dá)水平上調(diào),Treg細(xì)胞表面構(gòu)成性表達(dá)4-1BB分子,其介導(dǎo)的4-1BB正向信號(hào)可促進(jìn)Treg細(xì)胞增殖,提示4-1BB信號(hào)可能為調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的干預(yù)靶點(diǎn)。第二部分同種異源Treg對(duì)腫瘤細(xì)胞直接效應(yīng)的初步研究目的:探討抗原特異性的Treg細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接效應(yīng)方法:(1)分離正常供體單核細(xì)胞,以粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和重組白細(xì)胞介素(IL-4)誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞;(2)以負(fù)載腫瘤抗原的樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗原特異性Treg體外生成和擴(kuò)增(3)把抗原特異性Treg與骨髓瘤細(xì)胞系進(jìn)行體外共培養(yǎng),采用Annexin-V/PI染色法測(cè)定骨髓瘤細(xì)胞凋亡水平有無(wú)改變,采用CFSE測(cè)定骨髓瘤細(xì)胞增殖是否受抑,采用細(xì)胞內(nèi)因子染色法測(cè)定骨髓瘤細(xì)胞合成IL-6水平有無(wú)改變,(4)測(cè)定活化后CD95L在Treg表面有無(wú)上調(diào).結(jié)果:(1)通過(guò)形態(tài)和表型特征鑒定證實(shí)培養(yǎng)所得不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞;(2)采用樹(shù)突狀細(xì)胞能夠誘導(dǎo)Treg體外擴(kuò)增,7天后擴(kuò)增效率達(dá)10倍(3)擴(kuò)增所得抗原特異性Treg能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡并抑制其增殖,細(xì)胞內(nèi)因子染色提示抗原特異性Treg降低骨髓瘤細(xì)胞自分泌IL-6;(4)活化后Treg表面CD95L未上調(diào)表達(dá)結(jié)論:建立樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗原特異性Treg體外擴(kuò)增模型,明確了抗原特異性Treg能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡,其殺傷作用為CD95/CD95L非依賴(lài)性。
【關(guān)鍵詞】：多發(fā)性骨髓瘤 Treg 4-1BB 樹(shù)突狀細(xì)胞 Treg 多發(fā)性骨髓瘤 免疫抑制
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R733.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-23
• 參考文獻(xiàn)17-23
• 第一部分 多發(fā)性骨髓瘤患者Treg表達(dá)水平及 4-1BB信號(hào)在Treg中的免疫調(diào)控作用23-37
• 前言23
• 材料和方法23-26
• 結(jié)果26-33
• 討論33-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 第二部分 同種異源Treg對(duì)腫瘤細(xì)胞直接效應(yīng)的初步研究37-50
• 前言37
• 材料和方法37-40
• 結(jié)果40-46
• 討論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 結(jié)論50-51
• 綜述 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化和功能的機(jī)制研究51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 英文詞匯縮略表59-60
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文60-61
• 致謝61-63

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