本文關(guān)鍵詞：縫隙連接蛋白Cx26在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其對(duì)奧沙利鉑抗腫瘤作用的影響研究

  更多相關(guān)文章： 縫隙連接蛋白26 細(xì)胞縫隙連接 肝細(xì)胞癌 奧沙利鉑 抗腫瘤作用

【摘要】：目的:檢測(cè)肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC,簡(jiǎn)稱“肝癌”)癌變過(guò)程中縫隙連接蛋白26(Connexin26,Cx26)及其組成的細(xì)胞縫隙連接(Gap Junction,GJ)功能的改變;在明確其表達(dá)基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討調(diào)控HCC細(xì)胞中Cx26及其組成GJ的功能對(duì)奧沙利鉑(oxalipatin,OXA)抗腫瘤作用的影響。以期為探討HCC低化療反應(yīng)性的機(jī)制提供新的資料和理論基礎(chǔ)。方法:采用免疫組化法檢測(cè)20例正常肝組織及76例HCC組織中Cx26的表達(dá)及定位,在明確Cx26有異常表達(dá)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步在人正常肝細(xì)胞(LO2)及肝癌細(xì)胞(SMMC-7721)上,采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)Cx26的表達(dá),免疫熒光法觀察Cx26的定位,細(xì)胞接種熒光示蹤法(Parachute assay)測(cè)定GJ功能。明確GJ功能改變基礎(chǔ)上,進(jìn)一步在SMMC-7721細(xì)胞上,通過(guò)高低密度接種細(xì)胞、GJ工具藥和特異性調(diào)控Cx26表達(dá)等方法調(diào)控GJ功能,采用MTT法觀察GJ功能改變對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響。結(jié)果:1.HCC癌變過(guò)程中Cx26及其組成GJ功能的改變1.1人正常肝組織及HCC組織中Cx26的表達(dá)免疫組化法檢測(cè)結(jié)果顯示:正常肝組織Cx26蛋白均表達(dá)陽(yáng)性,而HCC組Cx26蛋白表達(dá)陽(yáng)性率顯著下調(diào)至47.37%(χ2=18.045,P=0.000)。且在正常肝組織中,陽(yáng)性表達(dá)的Cx26呈線狀分布于細(xì)胞膜上,偶見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)表達(dá);而在HCC組織中,陽(yáng)性染色顆粒主要分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),偶見(jiàn)同時(shí)有部分細(xì)胞膜著色。蛋白自細(xì)胞膜向細(xì)胞質(zhì)定位改變稱為“內(nèi)化”(internalization)現(xiàn)象。Cx26內(nèi)化率在正常肝臟組織及HCC組分別為15%和100%,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=43.938,P=0.000)。1.2人正常肝細(xì)胞(LO2)及HCC細(xì)胞(SMMC-7721)Cx26的表達(dá)及GJ功能狀態(tài)RT-PCR聯(lián)合western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示:人正常肝細(xì)胞LO2中Cx26表達(dá)水平相對(duì)較高,而肝癌細(xì)胞SMMC-7721中Cx26表達(dá)水平較低。免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明LO2細(xì)胞上Cx26的膜定位明顯,而在SMMC-7721細(xì)胞上,Cx26彌散分布于細(xì)胞質(zhì)中,僅有少量呈細(xì)顆粒狀定位于細(xì)胞膜。進(jìn)一步使用Parachute assay檢測(cè)GJ功能時(shí)發(fā)現(xiàn):LO2細(xì)胞GJ功能豐富,而SMMC-7721細(xì)胞GJ功能較弱。2.調(diào)控HCC細(xì)胞(SMMC-7721)上GJ功能對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響2.1 OXA對(duì)SMMC-7721抗腫瘤作用的影響MTT法檢測(cè)OXA(0、1、2、4、8、16、32、64、128μg/ml)作用24 h、48 h、72 h后SMMC-7721細(xì)胞的存活率,結(jié)果顯示,隨著OXA作用濃度和時(shí)間的增加,SMMC-7721細(xì)胞存活率逐漸降低。其中32、64、128μg/ml三個(gè)劑量組抑制作用明顯,該劑量級(jí)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2 GJ形成對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響通過(guò)高低密度接種細(xì)胞法,分別獲得有GJ形成細(xì)胞和無(wú)GJ形成細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)OXA的抗腫瘤作用在有GJ形成細(xì)胞顯著高于無(wú)GJ形成細(xì)胞(P0.05)。2.3工具藥調(diào)控GJ功能對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響2.3.1工具藥對(duì)SMMC-7721細(xì)胞GJ功能的影響Parachute assay實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,10μM全反式維甲酸(All-transretinoic acid,ATRA)處理SMMC-7721細(xì)胞24 h,細(xì)胞熒光傳遞功能顯著增強(qiáng),即細(xì)胞間GJ功能顯著增強(qiáng),增強(qiáng)率約為72%;5μM 18-α-甘草次酸(18-α-glycyrrhetinic acid,18-α-GA)作用SMMC-7721細(xì)胞1 h,細(xì)胞熒光傳遞功能顯著降低,即細(xì)胞間GJ功能顯著降低,抑制率約為63%。2.3.2工具藥調(diào)控GJ功能后對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響MTT結(jié)果表明,10μM ATRA單藥作用24 h對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響,但使用其預(yù)處理細(xì)胞24 h以增強(qiáng)GJ功能后,再使用64μg/ml OXA作用細(xì)胞24 h,細(xì)胞存活率較單用OXA組顯著降低(P0.05);5μM 18-α-GA單藥作用1 h對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)也無(wú)明顯影響,但使用其預(yù)處理細(xì)胞1 h以抑制GJ功能后,再使用64μg/ml OXA作用SMMC-7721細(xì)胞24 h,SMMC-7721細(xì)胞存活率較單用OXA組顯著增加(P0.05)。2.4特異性調(diào)控Cx26表達(dá)對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響以小干擾RNA(Small interfering RNA,si RNA)技術(shù)瞬時(shí)沉默SMMC-7721細(xì)胞中Cx26蛋白的表達(dá),采用MTT法檢測(cè)SMMC-7721細(xì)胞中Cx26蛋白被下調(diào)后對(duì)OXA抗腫瘤作用的影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,抑制Cx26蛋白表達(dá)后,SMMC-7721細(xì)胞存活率明顯增加(P0.05)。相反,以瞬時(shí)轉(zhuǎn)染法將Cx26-DNA導(dǎo)入SMMC-7721細(xì)胞過(guò)表達(dá)Cx26蛋白,SMMC-7721細(xì)胞存活率顯著降低(P0.05)。結(jié)論:1.HCC癌變過(guò)程中伴隨有Cx26蛋白表達(dá)下調(diào)及定位異常,兩者共同致組成的GJ功能顯著下調(diào)。2.在HCC細(xì)胞(SMMC-7721)上,增強(qiáng)GJ功能可以增強(qiáng)OXA抗腫瘤作用,而抑制GJ功能可以降低OXA抗腫瘤作用。
【關(guān)鍵詞】：縫隙連接蛋白26 細(xì)胞縫隙連接 肝細(xì)胞癌 奧沙利鉑 抗腫瘤作用
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-18
• 材料與方法18-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-39
• 討論39-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 附錄A:英中文術(shù)語(yǔ)縮略語(yǔ)對(duì)照表50-51
• 附錄B:常用試劑配制方法51-52
• 附錄C:個(gè)人簡(jiǎn)歷及發(fā)表的論文52-53
• 附錄D:綜述 縫隙連接細(xì)胞間通訊與肝細(xì)胞癌關(guān)系的研究進(jìn)展53-61
• 參考文獻(xiàn)59-61

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 ;早期發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞癌可增加治療機(jī)會(huì)[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2000年02期

2 Schafer DF,潘朝法,李蘇云;肝細(xì)胞癌[J];第四軍醫(yī)大學(xué)吉林軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年01期

3 中沼安二,林淑蘭,姚楨;有關(guān)小肝細(xì)胞癌病理學(xué)的最新認(rèn)識(shí)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2000年05期

4 靜雨;;美國(guó)肝細(xì)胞癌發(fā)病率增高[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年01期

5 張玉勛;;肝細(xì)胞癌的非手術(shù)治療[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);2000年05期

6 徐宏勇,李開(kāi)宗,付由池,竇科峰,李景夢(mèng),何揚(yáng)舉;bcl-x,bax基因表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年14期

7 蔡端;多中心源肝細(xì)胞癌的特征:與肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的比較[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2002年02期

8 張春平;與白介素-18水平升高有關(guān)的肝細(xì)胞癌自發(fā)性消退[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2003年03期

9 薛海鷗,岳莉;兒童肝細(xì)胞癌1例報(bào)告[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

10 德力,白志剛,牧榮,賴玉書(shū),金燦浩,夏醫(yī)君;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)和預(yù)后的關(guān)系[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2003年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 卞讀軍;;肝細(xì)胞癌經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞前后磁共振波譜研究[A];2009中華醫(yī)學(xué)會(huì)影像技術(shù)分會(huì)第十七次全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2009年

2 賈建偉;趙潔;;肝細(xì)胞癌領(lǐng)域研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[A];中醫(yī)藥防治感染病之研究（九）——第九次全國(guó)中醫(yī)藥防治感染病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文集[C];2009年

3 陳孝平;;肝細(xì)胞癌外科治療進(jìn)展[A];湖北省第21屆腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2011年

4 張杰;劉軍建;韓云;張寧;芮靜安;金城;周柔麗;;用熒光差異顯示法篩選肝細(xì)胞癌相關(guān)新基因[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 馮仕庭;李子平;譚國(guó)勝;孫燦輝;彭振鵬;;中晚期肝細(xì)胞癌的多層螺旋CT血管造影表現(xiàn)及臨床應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三屆全國(guó)放射學(xué)大會(huì)論文匯編（下冊(cè)）[C];2006年

6 張法標(biāo);方哲平;王義;董輝;叢文銘;;上皮鈣粘素和β-連接素在兒童肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[A];2007年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

7 陳鐘杰;;螺旋CT診斷原發(fā)型肝細(xì)胞癌28例[A];2008年浙江省放射學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2008年

8 賈克東;;肝細(xì)胞癌的診斷進(jìn)展及治療現(xiàn)狀[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

9 李秋萍;龍順欽;楊小兵;鄧宏;蔡姣芝;潘宗奇;河文峰;周宇姝;歐陽(yáng)育樹(shù);廖桂雅;吳萬(wàn)垠;;癌服靈治療晚期肝細(xì)胞癌的臨床研究[A];2012·中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會(huì)第三次會(huì)議論文集[C];2012年

10 朱明華;祝峙;劉曉紅;林靜;曲建慧;陳穎;曹曉哲;王力;倪燦榮;;乙型肝炎病毒感染與肝細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)系的分子病理學(xué)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)臨床腫瘤學(xué)協(xié)作專業(yè)委員會(huì)主任委員 秦叔逵;治療肝細(xì)胞癌 別只盯著靶向藥[N];健康報(bào);2013年

2 記者 王丹 管九蘋(píng);肝細(xì)胞癌標(biāo)志物研究獲新進(jìn)展[N];健康報(bào);2013年

3 吳一福;四軍醫(yī)大唐都醫(yī)院發(fā)現(xiàn)硒蛋白P與肝細(xì)胞癌發(fā)生有關(guān)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

4 黎彬;肝癌研究重要進(jìn)展——預(yù)測(cè)肝癌轉(zhuǎn)移成為可能[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

5 錢(qián)文彩;α2δ1陽(yáng)性細(xì)胞為新的肝細(xì)胞癌干細(xì)胞[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2013年

6 新美;基礎(chǔ)研究進(jìn)展推動(dòng)肝臟病學(xué)進(jìn)步[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

7 周金蓮;MIB-1和bcl-2表達(dá)預(yù)測(cè)肝癌發(fā)生[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

8 張金山;要靈活運(yùn)用影像學(xué)提供的方法和手段[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

9 李杰;不能手術(shù)切除肝細(xì)胞癌的治療[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

10 ;修復(fù)肝細(xì)胞 改善肝功能[N];人民日?qǐng)?bào)海外版;2006年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 白蘭;乙肝病毒捕獲細(xì)胞因子和信號(hào)級(jí)聯(lián)以逃避宿主免疫并維持持續(xù)感染[D];武漢大學(xué);2014年

2 何洪衛(wèi);肝細(xì)胞癌內(nèi)γδT細(xì)胞浸潤(rùn)減少及功能缺陷的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 蔡曉燕;淋巴細(xì)胞在肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的差異性表達(dá)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 向?qū)?細(xì)胞周期因子FoxM1促進(jìn)肝臟再殖的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 康富標(biāo);共刺激分子B7-H3在肝細(xì)胞癌的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

6 楊純;Gankyrin正反饋調(diào)控Nrf2在肝細(xì)胞癌中發(fā)揮抗氧化作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 王斌;微衛(wèi)星雜合性缺失檢測(cè)多結(jié)節(jié)性和復(fù)發(fā)性肝細(xì)胞癌克隆起源及其臨床意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

8 關(guān)英慧;氯喹體外抗肝細(xì)胞癌作用的實(shí)驗(yàn)研究及機(jī)制探討[D];吉林大學(xué);2010年

9 明利華;肝細(xì)胞癌病因的剖析、遺傳標(biāo)志的論證及其臨床意義的探討[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

10 宮琳;炎癥相關(guān)重要分子與肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王飛;CDH17調(diào)控肝細(xì)胞癌的生物學(xué)機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳中博;咖啡攝入與肝細(xì)胞癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的Meta分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張華鵬;核受體輔激活蛋白5在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2015年

4 郭慧敏;血清sCD25測(cè)定在肝細(xì)胞癌診斷中的意義[D];鄭州大學(xué);2015年

5 凌青霞;雙氧化酶1（Duox1）在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)調(diào)控及作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 李會(huì)芬;血清Talin-1在肝細(xì)胞癌診斷中的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

7 蒙錦瑩;血管生長(zhǎng)相關(guān)因子的血清濃度與肝細(xì)胞癌預(yù)后的相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2015年

8 戰(zhàn)勇;肝細(xì)胞癌術(shù)前造影參數(shù)與生物學(xué)表現(xiàn)相關(guān)性及術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)因素討論[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

9 姚樂(lè);microRNA-32在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床預(yù)后意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 吳華;MACC1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)與臨床意義[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：780980