本文關(guān)鍵詞：hRad9在乳腺癌化療反應(yīng)中的作用及其靶點(diǎn)研究

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【摘要】：hRad9/chk1通路在DNA損傷修復(fù)和基因組穩(wěn)定維護(hù)中具有重要作用。人類多種腫瘤細(xì)胞中存在hRad9蛋白的高水平表達(dá),并且與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān),但在乳腺癌化療反應(yīng)性中作用的研究未見報(bào)道。本研究主要探討hRad9在乳腺癌化療反應(yīng)中的作用以及以其為靶點(diǎn)提高化療敏感性的可行性。第一部分hRad9在乳腺癌化療反應(yīng)中的作用研究方法1.挑選山東大學(xué)齊魯醫(yī)院術(shù)前接受至少4周期新輔助化療乳腺浸潤性導(dǎo)管癌標(biāo)本50例,收集NAC前活檢和和NAC后腫瘤組織,完善各項(xiàng)臨床病理學(xué)資料。2.復(fù)習(xí)NAC前后腫瘤標(biāo)本HE切片,根據(jù)Miller-Payne病理反應(yīng)性分級(jí)(MP分級(jí))對(duì)所有乳腺癌進(jìn)行化療反應(yīng)性的病理學(xué)評(píng)價(jià)。根據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果,將NAC后標(biāo)本分為化療敏感組(MP3-5級(jí))和化療耐藥組(MP1-2級(jí))。3.免疫組化檢測NAC前后腫瘤組織hRad9、chk1 及 cyclin D1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1.乳腺癌NAC前活檢標(biāo)本中,hRad9、chk1和cyclin D1蛋白陽性表達(dá)率分別為70%、42%和50%。2.通過分析NAC術(shù)后標(biāo)本中hRad9表達(dá)與乳腺癌化療反應(yīng)的關(guān)系我們發(fā)現(xiàn)hRad9蛋白表達(dá)與乳腺癌化療反應(yīng)性差相關(guān)(X2=40.9,P=0.000)。3.通過分析NAC術(shù)后標(biāo)本中chkl蛋白表達(dá)與乳腺癌化療反應(yīng)性的關(guān)系我們發(fā)現(xiàn)chkl蛋白表達(dá)與乳腺癌化療反應(yīng)性差相關(guān)(X2=5.4,P=0.021)。4.通過雙變量分析,我們發(fā)現(xiàn)hRad9蛋白分別與chk1、cyclin D1蛋白表達(dá)正相關(guān)(R=0.327, P=0.020; R=0.393, P=0.005)。5.通過比較NAC前后腫瘤組織hRad9和chkl蛋白表達(dá)變化,我們發(fā)現(xiàn)化療后chkl蛋白表達(dá)較化療前明顯增高(P=0.012),化療前后hRad9蛋白表達(dá)無明顯變化(P=0.571)。結(jié)論1.乳腺癌中存在hRad9、chk1高表達(dá),兩者的高表達(dá)與化療反應(yīng)性差密切相關(guān)。2.hRad9與chkl表達(dá)正相關(guān),提示hRad9/chk1通路可能在乳腺癌化療抵抗中發(fā)揮重要的作用。3.chk1蛋白表達(dá)在化療前后發(fā)生顯著性變化,提示其可能在獲得性化療耐藥中發(fā)揮作用；而hRad9蛋白表達(dá)在化療前后變化不明顯,提示其過表達(dá)與內(nèi)在性性化療耐藥相關(guān)。第二部分以hRad9為靶點(diǎn)提高乳腺癌化療敏感性的研究方法1.設(shè)計(jì)并合成靶向干擾hRad9基因表達(dá)的小干擾RNA (hRad9-siRNA),以非靶向性干擾序列作為陰性對(duì)照(NC-siRNA)。2.將乳腺癌細(xì)胞分成三組：hRad9-siRNA轉(zhuǎn)染組、NC組和空白對(duì)照組,并將上述siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系MCF-7 和 MDA-MB-231。3. RT-qPCR檢測各組細(xì)胞中hRad9 mRNA的表達(dá)情況；細(xì)胞免疫化學(xué)及Western-blot檢測各組細(xì)胞中hRad9蛋白的表達(dá)情況。4.RT-qPCR、Western-blot檢測各組細(xì)胞中chk1 mRNA及蛋白表達(dá)。5.MTS檢測hRad9-siRNA轉(zhuǎn)染組和各對(duì)照組乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物阿霉素的敏感性變化。6.流式細(xì)胞術(shù)檢測hRad9-siRNA轉(zhuǎn)染組和各對(duì)照組乳腺癌細(xì)胞加藥前后凋亡情況變化。結(jié)果1. RT-qPCR、細(xì)胞爬片免疫組化及Westernblot結(jié)果表明：與對(duì)照組(NC組及空白對(duì)照組)相比hRad9-siRNA轉(zhuǎn)染組hRad9 mRNA及蛋白的表達(dá)均明顯降低。2. RT-qPCR 及 Western blot結(jié)果表明：沉默hRad9基因表達(dá)后,chk1 mRNA及蛋白表達(dá)也隨之明顯降低。3.加藥MTS檢測結(jié)果表明：沉默乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞中hRad9基因表達(dá)后能顯著增強(qiáng)阿霉素的細(xì)胞毒性作用。4.細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：無論是否經(jīng)阿霉素處理hRad9-siRNA轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率比對(duì)照組明顯增加。結(jié)論1.hRad9基因沉默后,可顯著提高乳腺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的化療敏感性及細(xì)胞凋亡率,提示hRad9可能成為新的提高腫瘤化療反應(yīng)性的靶點(diǎn)。2.hRad9通過調(diào)控下游因子chk1蛋白表達(dá)發(fā)揮提高化療反應(yīng)性的作用,hRad9/chkl通路在化療耐藥中的作用機(jī)制需要進(jìn)一步的深入研究。
【關(guān)鍵詞】：hRad9 chk1 新輔助化療 乳腺癌
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說明13-15
• 前言15-19
• 第一部分 hRad9在乳腺癌化療反應(yīng)中的作用研究19-28
• 材料與方法19-23
• 結(jié)果23-27
• 小結(jié)27-28
• 第二部分 以hRad9為靶點(diǎn)提高乳腺癌化療敏感性的研究28-46
• 材料與方法28-39
• 結(jié)果39-44
• 小結(jié)44-46
• 討論46-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 致謝53-54
• 攻讀學(xué)位期問發(fā)表的學(xué)位論文目錄54-55
• 附件55-63
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表63

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本文編號(hào)：780733