發(fā)布時間：2017-09-02 08:43

  本文關(guān)鍵詞：LOXL2在胃癌中表達的臨床意義及相關(guān)機制的研究

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【摘要】：目的:胃癌是消化系最常見的惡性腫瘤之一,腫瘤轉(zhuǎn)移與復發(fā)是其主要死亡原因。賴氨酰氧化酶2(lysyl oxidase-like 2 protein,LOXL2)是賴氨酸氧化酶(LOX)家族的成員之一,在腫瘤細胞中表達增高,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移過程密切相關(guān)。本研究以胃癌患者及體外培養(yǎng)的胃癌細胞系為研究對象,檢出胃癌組織及胃癌細胞中LOXL2表達情況、與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系及預后意義,并進一步探討LOXL2與胃癌增殖、侵襲遷移的關(guān)系。方法:免疫組化法檢測100例胃癌組織、癌旁組織中LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表達情況;采用RT-PCR方法及蛋白印跡技術(shù)檢測胃癌細胞株BGC823、胃上皮細胞株GES-1中LOXL2 m RNA和蛋白表達;人工合成針對LOXL2的si RNA,并轉(zhuǎn)染胃癌細胞株BGC823;MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后BGC823細胞的抑制率;流式細胞術(shù)檢測BGC823細胞的細胞周期分布變化;應用Transwell實驗、劃痕實驗檢測BGC823細胞侵襲、遷移能力;熒光定量PCR和Weatern blot檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌細胞株BGC823中PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9 m RNA和蛋白表達變化。結(jié)果:1胃癌組織中LOXL2表達的臨床意義及與腫瘤增殖、侵襲的關(guān)系1.1 LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9的表達及與胃癌臨床病理特征的關(guān)系在胃癌組織中LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表達水平明顯高于癌旁組織(均P0.05);胃癌組織中LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白陽性表達與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度間情況無關(guān),無顯著性差異(均P0.05),LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期間具有相關(guān)性,有顯著性差異(均P0.05)1.2 LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表達與患者生存期的關(guān)系根據(jù)胃癌組織中蛋白表達情況,LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白的陽性表達患者生存期均較陰性表達患者的生存期低,表達陽性和陰性患者生存之間存在顯著差異(均P0.05)。1.3胃癌組織中LOXL2、PCNA、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表達之間的相關(guān)性在胃癌組織中,LOXL2蛋白表達與PCNA、Cyclin D1蛋白表達均呈正相關(guān)性(r=0.279,0.287;均P0.05),LOXL2蛋白表達與MMP-2、MMP-9蛋白表達均呈正相關(guān)性(r=0.380、0.310;均P0.05),PCNA蛋白表達與Cyclin D1蛋白表達呈正相關(guān)性(r=0.270,P0.05)。MMP-2蛋白表達與MMP-9蛋白表達呈正相關(guān)性(r=0.545,P0.05)MMP-2蛋白表達與PCNA、Cyclin D1蛋白表達之間均無明顯相關(guān)關(guān)性(r=0.084、0.102;均P0.05),MMP-9蛋白表達與PCNA、Cyclin D1蛋白表達之間均無明顯相關(guān)關(guān)性(r=0.089、0.149;均P0.05)。2抑制LOXL2表達對胃癌細胞增殖能力的影響2.1 LOXL2在不同細胞株中mRNA及蛋白的表達:在人胃癌細胞株BGC823中LOXL2 m RNA及蛋白表達均明顯高于胃上皮細胞株GSE-1,具有明顯統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.2 LOXL2-siRNA轉(zhuǎn)染BGC823胃癌細胞對LOXL2表達的影響:LOXL2-si RNA轉(zhuǎn)染BGC823細胞后轉(zhuǎn)染24 h后,細胞中LOXL2基因表達受到明顯抑制,m RNA和蛋白表達分別下降90.47%和89.40%,而轉(zhuǎn)染陰性對照組si RNA后m RNA和蛋白水平均無明顯改變(P0.05)。2.3 LOXL2-siRNA干擾LOXL2對胃癌BGC823細胞增殖的抑制作用MTT實驗觀察LOXL2-si RNA對BGC823細胞增殖活性的影響。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染LOXL2-si RNA的BGC823細胞增殖活性呈時間-劑量依賴性下降(P0.05)。2.4 LOXL2-si RNA干擾LOXL2對胃癌BGC823細胞周期影響LOXL2-siRNA轉(zhuǎn)染BGC823細胞48 h之后,BGC823細胞中G0/G1期細胞比例明顯高于陰性組(P0.05),S期細胞的比例明顯低于陰性組(P0.05).轉(zhuǎn)染陰性對照si RNA組BGC823細胞中G0/G1期及S期細胞比例與陰性組相比無明顯變化(P0.05)。2.5 LOXL2-siRNA干擾LOXL2對BGC823細胞增殖相關(guān)基因表達的影響LOXL2-si RNA-2轉(zhuǎn)染BGC823細胞48 h后檢測增殖相關(guān)基因,LOXL2-si RNA組細胞PCNA、Cyclin D1 m RNA及蛋白表達較陰性組明顯降低(均P0.05)。轉(zhuǎn)染陰性對照si RNA組BGC823細胞中PCNA、Cyclin D1m RNA及蛋白表達與陰性組相比無明顯變化(P0.05)。3抑制LOXL2基因?qū)ξ赴┘毎忠u能力的影響3.1 LOXL2-siRNA干擾LOXL2表達對BGC823細胞遷移的影響采用劃痕實驗觀檢測LOXL2-si RNA對BGC823細胞水平遷移能力影響。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染LOXL2-si RNA的BGC823細胞遷移率較陰性組顯著減慢(P0.05)。3.2 LOXL2-siRNA干擾LOXL2表達對BGC823細胞侵襲的影響通過transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲能力的變化,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染LOXL2-si RNA的BGC823細胞侵襲能力較陰性組顯著下降(P0.05)。3.3 LOXL2-si RNA對BGC823細胞侵襲相關(guān)基因表達的影響LOXL2-si RNA-2轉(zhuǎn)染BGC823細胞48 h后檢測侵襲相關(guān)基因,LOXL2-si RNA組細胞MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表達較陰性組明顯降低(均P0.05)。結(jié)論:1胃癌組織中LOXL2表達上調(diào),且LOXL2的表達與與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期間具有相關(guān)性,LOXL2是胃癌的預后因子,高表達LOXL2的胃癌患者預后較差。2 LOXL2可通過上調(diào)PCNA、Cyclin D1的表達促進胃癌細胞的增殖。3 LOXL2可通過上調(diào)MMP-2、MMP-9的表達促進胃癌細胞的遷移和侵襲,對胃癌進展有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：賴氨酰氧化酶2 胃癌 預后 胃癌細胞株 增殖 遷移
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 引言13-15
• 第一部分 胃癌組織中LOXL2表達的臨床意義及與腫瘤增殖、侵襲的關(guān)系15-40
• 前言15
• 材料與方法15-18
• 結(jié)果18-22
• 附圖22-30
• 附表30-35
• 討論35-37
• 小結(jié)37
• 參考文獻37-40
• 第二部分si RNA抑制LOXL2表達對胃癌細胞增殖能力的影響40-61
• 前言40
• 材料與方法40-49
• 結(jié)果49-51
• 附圖51-56
• 附表56-57
• 討論57-58
• 小結(jié)58
• 參考文獻58-61
• 第三部分si RNA抑制LOXL2表達對胃癌細胞侵襲遷移能力的影響61-73
• 前言61
• 材料與方法61-64
• 結(jié)果64-66
• 附圖66-69
• 討論69-70
• 小結(jié)70
• 參考文獻70-73
• 結(jié)論73-74
• 綜述 LOXL2與腫瘤關(guān)系的研究進展74-82
• 參考文獻78-82
• 致謝82-83
• 個人簡歷83

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 吳勝春;LOXL2在胃癌中表達的臨床意義及相關(guān)機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

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本文編號：777563