本文關(guān)鍵詞：線粒體D環(huán)單核苷酸基因多態(tài)與惡性纖維組織細(xì)胞瘤預(yù)后之間的關(guān)系研究

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【摘要】：目的:線粒體單核苷酸基因多態(tài)被證實(shí)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有重要關(guān)系。在之前的研究中,我們證實(shí)了線粒體單核苷酸基因多態(tài)與惡性纖維組織細(xì)胞瘤發(fā)病率之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性,在本實(shí)驗(yàn)中,我們將進(jìn)一步研究和探討線粒體單核苷酸基因多態(tài)與惡性纖維組織細(xì)胞瘤臨床特征與預(yù)后之間的關(guān)系,從而為惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者篩查出不良預(yù)后人群并為該腫瘤的治療提供一種方法。方法:收集2002年到2011年間在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院接受治療的惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者的血液標(biāo)本80例,同時(shí)收集自100個(gè)健康對(duì)照組的血液標(biāo)本。對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行相關(guān)臨床信息采集,完善臨床資料。對(duì)患者進(jìn)行隨訪,隨訪期限為3年。應(yīng)用GENMED全血線粒體DNA萃取試劑盒提取惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者及健康人的線粒體DNA,提取后將其置于-20℃恒溫冰箱中保存?zhèn)溆�。�?duì)目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列分析:PCR擴(kuò)增的上游引物序列是5'-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3'(核苷酸16190-16209)下游引物是5'-GCTTTGAGGAGGT AAGCTAC-3'(核苷酸602-583)。PCR反應(yīng)體系約50u L(10×Buffer 5 u L,2.5mmol/L Mg Cl2 2u L,10mmol/L d NTP 2u L,10mmol/L引物各2u L,Taq酶3-5u L),血漿DNA提取物6u L作為模板DNA,陽性對(duì)照模板和健康組模板為2u L,約2ng。PCR的條件是:95℃下預(yù)變性2分鐘,然后95℃下變性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1分鐘,接著在72℃下延伸5分鐘,后三個(gè)步驟反復(fù)進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳提純,應(yīng)用循環(huán)測(cè)序法對(duì)合格的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)通測(cè)序。計(jì)算其3年生存率,同時(shí)分析與患者臨床特征的關(guān)系。參照基因數(shù)據(jù)庫AC_000021號(hào)數(shù)據(jù),從已經(jīng)完成的惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者線粒體D環(huán)區(qū)的982bp序列中找出單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn),對(duì)不同單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)與患者3年生存率的關(guān)系進(jìn)行分析.用Kaplan Meier的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行l(wèi)og-rank校正來生成患者的生存曲線。用Cox proportional hazards model對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多因素分析。所有的數(shù)據(jù)處理均用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P0.05被認(rèn)為是有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:我們用Kaplan Meier的統(tǒng)計(jì)方法對(duì)這些患者的臨床特點(diǎn)隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,并用log-rank進(jìn)行校正。這些臨床體征包括:性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤位置。年齡、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者術(shù)后的預(yù)后存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性,P值分別是0.017,0.001,0.015。在惡性纖維組織細(xì)胞瘤組以及對(duì)照組的長為982bp的線粒體D環(huán)區(qū)域我們共發(fā)現(xiàn)71個(gè)線粒體單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn),其中的28個(gè)位點(diǎn)在患者或者對(duì)照組中的頻率≥5%,可以用來分析患者預(yù)后情況。5個(gè)線粒體基因單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)與惡性纖維組織細(xì)胞瘤預(yù)后之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性,這5個(gè)線粒體基因多態(tài)位點(diǎn)分別是152,16390,16290,16304,523-524。擁有單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)152C,16390A,16290T的患者被證實(shí)術(shù)后3年生存時(shí)間較擁有152T,16390G,16290C的患者術(shù)后生存時(shí)間短。恰恰相反,擁有單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)16304C,523和524位點(diǎn)的AC堿基缺失的患者術(shù)后3年生存時(shí)間較擁有16304T以及523-524AC位點(diǎn)患者生存時(shí)間長。相應(yīng)的,他們的P值分別是0.047,0.016,0.043,0.043,0.029。在對(duì)這5個(gè)單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)與年齡、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行多因素分析后我們證實(shí)線粒體單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)16290上的C→T突變、16390位置上的G→A突變以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、腫瘤直徑大小是評(píng)估惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者術(shù)后生存時(shí)間的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。結(jié)論:線粒體D環(huán)區(qū)域是一個(gè)高度變異的多態(tài)性區(qū)域,該區(qū)域與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。線粒體單核苷酸基因多態(tài)與惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者預(yù)后之間存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。5個(gè)線粒體基因單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)與惡性纖維組織細(xì)胞瘤預(yù)后之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性,這5個(gè)線粒體基因多態(tài)位點(diǎn)分別是152,16390,16290,16304,523-524。2個(gè)線粒體單核苷酸基因多態(tài)位點(diǎn)是評(píng)估惡性纖維組織細(xì)胞瘤患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素,這兩個(gè)位點(diǎn)是16290,16390。線粒體基因D環(huán)區(qū)單核苷酸基因多態(tài)可以作為預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)病率以及腫瘤預(yù)后的生物標(biāo)記物。同時(shí)為該腫瘤的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早期治療提供新的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：線粒體基因 線粒體D環(huán) 單核苷酸基因多態(tài) 惡性纖維組織細(xì)胞瘤 預(yù)后
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.26
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-21
• 附圖21-22
• 附表22-24
• 討論24-27
• 結(jié)論27
• 參考文獻(xiàn)27-33
• 綜述 線粒體單核苷酸基因多態(tài)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及預(yù)后的研究進(jìn)展33-45
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 致謝45-46
• 個(gè)人簡歷46

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本文編號(hào)：777152