本文關(guān)鍵詞：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78對人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 結(jié)直腸癌 裸鼠 增殖 基因芯片

【摘要】：目的:探討葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)對人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制,為闡明GRP78參與結(jié)直腸癌的致癌機(jī)制提供相關(guān)依據(jù)。方法:構(gòu)建GRP78的sh RNA慢病毒表達(dá)載體p LV-sh RNA GRP78及陰性對照慢病毒表達(dá)載體p LV-control,分別轉(zhuǎn)染人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞系。MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的增殖能力,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的分布情況,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力,裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力。Affymetrix人全基因組表達(dá)芯片檢測GRP78表達(dá)抑制后,RKO細(xì)胞中基因表達(dá)譜的變化,對差異表達(dá)的基因進(jìn)行功能注釋和富集分析,繪制差異基因關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖。Western blot技術(shù)驗(yàn)證部分差異基因以確定結(jié)果的可靠性。結(jié)果:轉(zhuǎn)染p LV-sh RNA GRP78后,RKO細(xì)胞增殖能力及克隆形成數(shù)目明顯受到抑制(P0.05),但遷移能力沒有明顯變化(P0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,沉默GRP78導(dǎo)致G1期細(xì)胞比例顯著增加,而S期細(xì)胞比例顯著降低(P0.05);裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,沉默GRP78導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤能力顯著減弱(P0.05)�；蛐酒瑱z測結(jié)果顯示,GRP78表達(dá)抑制后,共有397個基因的表達(dá)發(fā)生改變(與對照組相比,變化表達(dá)倍數(shù)≥1.2),其中上調(diào)的基因258個,下調(diào)139個。功能注釋和KEGG分析發(fā)現(xiàn)這些基因主要涉及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞代謝、細(xì)胞凋亡等功能。通過生物信息學(xué)分析,篩選3個(CDKN2B,MTOR及BIRC3)特異相關(guān)的差異基因進(jìn)行western blot驗(yàn)證,驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果相符。結(jié)論:沉默GRP78可通過抑制人結(jié)直腸癌RKO細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換,從而抑制細(xì)胞的體內(nèi)外增殖生長能力,但對細(xì)胞的遷移能力無顯著影響。GRP78可能通過調(diào)控與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞代謝、凋亡等基因的表達(dá),影響結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖能力。
【關(guān)鍵詞】：葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 結(jié)直腸癌 裸鼠 增殖 基因芯片
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-5
• 引言5-6
• 第1章 實(shí)驗(yàn)材料及方法6-13
• 1.1 儀器設(shè)備、試劑和耗材6-7
• 1.2 慢病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選7
• 1.3 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞中GRP78基因表達(dá)的檢測7-9
• 1.4 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)9-10
• 1.5 裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)10
• 1.6 基因芯片實(shí)驗(yàn)（由上海吉凱公司完成）10-12
• 1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析12-13
• 第2章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果13-23
• 2.1 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞GRP78蛋白表達(dá)13
• 2.2 沉默GRP78后對RKO細(xì)胞增殖的影響13-14
• 2.3 沉默GRP78后對RKO細(xì)胞周期分布的影響14-15
• 2.4 沉默GRP78后對RKO細(xì)胞遷移的影響15-16
• 2.5 裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果16
• 2.6 基因芯片結(jié)果16-23
• 第3章 討論23-25
• 結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-29
• 綜述29-38
• 綜述參考文獻(xiàn)34-38
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果38-39
• 致謝39-40

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本文編號：773366