發(fā)布時(shí)間：2017-09-01 12:03

  本文關(guān)鍵詞：miR-128在絲裂霉素C誘導(dǎo)DNA損傷應(yīng)答中的作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： DNA損傷應(yīng)答 microRNA 絲裂霉素C αⅡ血影蛋白

【摘要】：DNA損傷應(yīng)答維持基因組穩(wěn)定性發(fā)揮著重要作用,能夠抵擋或者修復(fù)內(nèi)源和外界環(huán)境導(dǎo)致的DNA損傷。造成DNA損傷的內(nèi)源因素如活性氧等,外源因素如紫外射線、離子輻射和化療藥物等�；熕幬锇l(fā)揮抗腫瘤作用的途徑之一是對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)基因組DNA造成損傷,這些DNA損傷類型包括DNA鏈交聯(lián)、DNA單／雙鏈斷裂和DNA修飾等。絲裂霉素C(mitomycin C,MMC)在臨床上作為化療藥物,引起腫瘤細(xì)胞內(nèi)DNA損傷,但是MMC引起DNA損傷和損傷修復(fù)的詳細(xì)機(jī)制仍不明確。在本研究中,MMC刺激肺癌細(xì)胞后,細(xì)胞活力和克隆形成能力隨著刺激濃度增加和刺激時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸減弱；另一個(gè)有趣的發(fā)現(xiàn)是MMC處理細(xì)胞后,miR-128表達(dá)水平出現(xiàn)了上調(diào),αⅡ Sp(spectrin)的蛋白水平出現(xiàn)下調(diào),而該基因(SPTAN1)的mRNA水平穩(wěn)定不變,這些結(jié)果提示miR-128可能通過(guò)抑制該基因的mRNA翻譯,降低其蛋白水平,從而參與MMC引起的DNA損傷應(yīng)答過(guò)程。多種生物學(xué)信息軟件預(yù)測(cè)表明SPTAN1是miR-128潛在的靶基因；與此理論預(yù)測(cè)一致,熒光素報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-128能夠直接靶向sTAN1的3'-UTR；過(guò)表達(dá)或下調(diào)miR-128能相應(yīng)地引起αⅡ Sp蛋白的下調(diào)或上調(diào),同時(shí)影響αⅡ Sp相關(guān)的細(xì)胞周期阻滯和染色體結(jié)構(gòu)異常等。最后,免疫共沉淀和熒光共定位實(shí)驗(yàn)顯不αⅡ Sp可以和FANCA/XPF等DNA修復(fù)蛋白共定位,并且相互作用形成復(fù)合物。更重要的現(xiàn)象是,miR-128能夠影響αⅡ Sp/FANCA/XPF復(fù)合物的形成,從而阻礙DNA損傷修復(fù)。綜上所述,αⅡ Sp作為血影蛋白家族成員之一在DNA損傷修復(fù)中起著重要的作用,這種作用通過(guò)與FANCA/XPF形成復(fù)合物實(shí)現(xiàn),并且這種DNA損傷修復(fù)復(fù)合物的形成和αⅡ Sp的蛋白水平受到microRNA(miRNA)的精細(xì)調(diào)節(jié)。本文擴(kuò)大了我們對(duì)于MMC抗腫瘤作用機(jī)制和miRNA在DNA損傷修復(fù)過(guò)程中作用機(jī)制的了解。miRNA的這種調(diào)控機(jī)制可以潛在用于腫瘤的輔助治療,提高提高腫瘤化療效果,但是后期動(dòng)物水平和臨床應(yīng)用仍需要進(jìn)一步的深入探索。
【關(guān)鍵詞】：DNA損傷應(yīng)答 microRNA 絲裂霉素C αⅡ血影蛋白
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R73-36
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一章 研究背景綜述9-26
• 1.1 DNA損傷應(yīng)答9-19
• 1.1.1 DNA損傷的類型9-10
• 1.1.2 DNA損傷修復(fù)的類型10-17
• 1.1.2.1 直接修復(fù)10
• 1.1.2.2 堿基切除修復(fù)10-11
• 1.1.2.3 核苷酸切除修復(fù)11-13
• 1.1.2.4 錯(cuò)配修復(fù)13-14
• 1.1.2.5 同源重組修復(fù)14
• 1.1.2.6 非同源末端連接14-15
• 1.1.2.7 DNA交聯(lián)損傷修復(fù)15-17
• 1.1.3 絲裂霉素C17-19
• 1.1.3.1 絲裂霉素C的概述18
• 1.1.3.2 MMC抗腫瘤作用機(jī)制18-19
• 1.2 血影蛋白19-22
• 1.2.1 血影蛋白簡(jiǎn)介19-20
• 1.2.2 血影蛋白功能和DDR的關(guān)系20-22
• 1.3 microRNA 和 DDR22-26
• 1.3.1 microRNA概述22-24
• 1.3.2 miRNA在DDR中的作用24-26
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法26-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料26-28
• 2.1.1 細(xì)胞株26
• 2.1.2 主要試劑26-27
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)中所使用的主要儀器27-28
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)中涉及的引物28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-38
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)28
• 2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及絲裂霉素C刺激實(shí)驗(yàn)28-29
• 2.2.3 細(xì)胞RNA的提取29-30
• 2.2.4 細(xì)胞蛋白提取及免疫印記30
• 2.2.5 熒光實(shí)時(shí)定量PCR30-33
• 2.2.5.1 miRNA表達(dá)水平檢測(cè)30-31
• 2.2.5.2 mRNA表達(dá)水平檢測(cè)31-33
• 2.2.6 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)并篩選靶位點(diǎn)33
• 2.2.7 miR-128靶點(diǎn)生物信息學(xué)分析33
• 2.2.8 PI法檢測(cè)細(xì)胞周期33
• 2.2.9 細(xì)胞中期染色分析實(shí)驗(yàn)33-34
• 2.2.10 免疫熒光共定位34
• 2.2.11 Annexin V/PI法檢測(cè)細(xì)胞凋亡34-35
• 2.2.12 熒光素酶活性檢測(cè)35-36
• 2.2.13 EdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.2.14 細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)37-38
• 2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析38-39
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-63
• 3.1 不同濃度MMC刺激對(duì)細(xì)胞活力的影響39-40
• 3.2 MMC刺激細(xì)胞導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)異常和DNA損傷40-41
• 3.3 MMC對(duì)αⅡ Sp mRNA和蛋白水平的影響41-42
• 3.4 MMC刺激后miR-128表達(dá)水平上調(diào)42-43
• 3.5 生物信息軟件預(yù)測(cè)miR-128靶向SPTAN1的3’UTR43
• 3.6 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-128靶向SPTAN1的3’-UTR43-44
• 3.7 過(guò)表達(dá)或下調(diào)miR-128影響αⅡ Sp的表達(dá)水平44-46
• 3.8 miR-128抑制細(xì)胞分裂增殖能力46-47
• 3.9 miR-128對(duì)細(xì)胞細(xì)胞周期的影響47-48
• 3.10 miR-128對(duì)細(xì)胞凋亡的影響48-49
• 3.11 miR-128導(dǎo)致細(xì)胞染色體異常49-50
• 3.12 miR-128破壞αⅡ Sp/FANCA/XPF形成的復(fù)合物50-52
• 3.13 miR-128靶點(diǎn)生物信息學(xué)分析52-63
• 討論與展望63-65
• 附錄65-68
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表成果72-73
• 致謝73-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ZHANG Rui;ZHANG ChenYu;ZHAO Qi;LI DongHai;;Spectrin:Structure, function and disease[J];Science China(Life Sciences);2013年12期

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本文編號(hào)：771958