本文關鍵詞：p53調節(jié)EGFR-TKI對三陰性乳腺癌細胞敏感性研究

  更多相關文章： 三陰性乳腺癌 MDA-MB-468細胞系 p53基因突變 重組人p53腺病毒 表皮生長因子受體 酪氨酸激酶抑制劑

【摘要】：目的與背景：乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,亦是女性主要的癌癥死亡原因。根據(jù)雌激素受體(Estrogen receptor, ER)、孕激素受體(Progesterone receptor, PR)、人表皮生長因子受體(Human epidermal growth factor receptor 2, HER-2)及Ki-67表達不同將乳腺癌分為不同的分子亞型。三陰性乳腺癌(Triple-negative breast cancer, TNBC)是一種特殊的乳腺癌分子亞型,其主要特點為ER、PR、HER2均陰性表達。目前,TNBC缺乏內分泌和針對HER-2靶向治療機會,化療是治療TNBC的主要策略,預后比其他類型的乳腺癌差。乳腺癌中表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor, EGFR)過度表達與腫瘤體積大、分化差以及預后不良有關,乳腺癌各種分子亞型均可見EGFR的過度表達,但TNBC中EGFR的表達率(約70%)明顯高于其他各分子亞型。吉非替尼為小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI),目前臨床主要應用于非小細胞肺癌的治療,其在乳腺癌中的應用已經展開臨床研究,但是療效不明顯。乳腺癌患者對EGFR-TKI耐藥是該類藥物應用于乳腺癌的重要障礙。乳腺癌中約30%的患者表現(xiàn)為p53基因突變,而80%TNBC存在p53高表達。有研究稱p53基因突變可能與非小細胞肺癌對EGFR-TKI耐藥有關。MDA-MB-468細胞系為TNBC細胞系,其特點為p53基因突變及EGFR過度表達,該細胞系對EGFR-TKI不敏感。本課題旨在運用p53腺病毒(攜帶野生型p53)轉導MDA-MB-468細胞系,觀測EGFR-TKI對TNBC細胞系MDA-MB-468細胞的敏感性影響。方法首先收集2012年1月至2013年8月就診于山東省腫瘤防治研究院乳腺病中心行手術治療初治浸潤性乳腺癌病例共264例。分析各種分子亞型乳腺癌中p53與EGFR的表達及二者的相關性。然后采用Ad-p53(重組p53腺病毒)和EGFR-TKI(吉非替尼)處理MDA-MB-468細胞系,四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞增殖的變化；克隆形成實驗檢測細胞的克隆形成能力；流式細胞技術檢測細胞凋亡及細胞周期的變化；Westernblot檢測p53及EGFR的表達,PI3K/Akt通路及凋亡通路相關蛋白的表達；裸鼠移植瘤實驗觀察Ad-p53聯(lián)合吉非替尼抗裸鼠移植瘤的作用。結果臨床病理資料分析顯示,TNBC中p53突變表達與EGFR過度表達明顯高于二者在其他分子分型中的表達,p53突變與EGFR過度表達在TNBC中呈現(xiàn)明顯的正相關。MTT結果顯示,Ad-p53感染MDA-MB-468細胞系后,該細胞對吉非替尼敏感性增加。流式細胞技術檢測結果顯示：對照組、Ad-p53組、吉非替尼組及聯(lián)合組細胞凋亡率分別為8.5%、17.4%、20.5%及32.6%,細胞G2/M周期比率分別為21.9%、31.5%、45.4%及65.3%。Ad-p53聯(lián)合吉非替尼處理細胞后細胞凋亡及細胞周期檢測結果顯示：細胞凋亡明顯增加,G2/M期周期阻滯明顯,具有統(tǒng)計學差異(均P0.05)。Western blot檢測結果顯示,Ad-p53聯(lián)合吉非替尼,p-Akt蛋白水平明顯下調(F=105.7,P0.01),caspase-9以及cleaved caspase-3蛋白活性增加(均P0.01)。裸鼠乳腺癌移植瘤中Ad-p53組、吉非替尼組及聯(lián)合組抑瘤率(Tumor inhibition rate, TIR)分別為35.7%、28.7%及74.4%。Ad-p53及吉非替尼聯(lián)合用藥能夠明顯縮小腫瘤體積,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1.p53基因突變與EGFR在TNBC過度表達,且二者表達呈明顯的正相關。2.p53突變可能是三陰性乳腺癌對TKI耐藥的重要因素。3.野生型p53基因可能通過下調PI3K/Akt通路活性增加MDA-MB-468細胞系對TKI的敏感性,并啟動caspase級聯(lián)反應促進細胞凋亡。4.修飾p53基因表達可以調節(jié)TNBC細胞對TKI的靶向耐藥。
【關鍵詞】：三陰性乳腺癌 MDA-MB-468細胞系 p53基因突變 重組人p53腺病毒 表皮生長因子受體 酪氨酸激酶抑制劑
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 研究生導師和課題指導小組介紹5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 主要符號表11-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 材料與方法15-23
• 2.1 實驗試劑與儀器15-16
• 2.2 實驗資料與方法16-23
• 第三章 結果23-30
• 3.1 臨床資料分析結果23-25
• 3.2 體外實驗結果25-28
• 3.3 體內實驗結果28-30
• 第四章 討論30-35
• 4.1 三陰性乳腺癌的認識30
• 4.2 浸潤性乳腺癌p53突變與EGFR過度表達及其相關性分析30-31
• 4.3 p53調節(jié)EGFR-TKI對三陰性乳腺癌細胞敏感性的研究31-35
• 第五章 結論35-36
• 第六章 參考文獻36-40
• 綜述40-49
• 參考文獻47-49
• 攻讀學位期間取得的研究成果49-50
• 致謝50

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