本文關(guān)鍵詞：急性早幼粒細(xì)胞白血病臨床及遺傳學(xué)因素研究

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【摘要】：目的1.系統(tǒng)分析2003年1月至2015年1月在蘇大附屬第一醫(yī)院就診的1208例初治急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)患者的臨床實(shí)驗(yàn)室特征及相關(guān)基因的突變情況,總結(jié)本中心APL患者的臨床特點(diǎn)。2.對有完整臨床資料的470例初治急性早幼粒細(xì)胞白血病患者,探討附加染色體異常對APL臨床預(yù)后的影響3.運(yùn)用FISH和RT-PCR等技術(shù)尋找STAT5B-RARα陽性的APL患者,總結(jié)其臨床預(yù)后特征,并克隆STAT5B-RARα融合基因,采用體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究STAT5B-RARα融合基因的生物學(xué)功能及致白血病機(jī)制。方法1.選取2003年1月至2015年1月在蘇大附一院就診的1208例初治APL患者,收集基本臨床資料及實(shí)驗(yàn)室MICM資料,分析這些APL患者的核型特點(diǎn)、融合基因類型,伴隨突變等臨床特點(diǎn)及相關(guān)基因突變對臨床預(yù)后的影響,總結(jié)我中心APL患者基本特征。2.對臨床資料完整的470例初治APL患者,根據(jù)染色體核型將其分為單純t(15;17)組、伴附加染色體異常組等,利用SPSS 21.0軟件,采用Kaplan-Meier法、卡方檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計方法分析比較各組的實(shí)驗(yàn)室及臨床特征,根據(jù)附加染色體的結(jié)構(gòu)及數(shù)量異常將進(jìn)一步分組,分析各組附加染色體異常與單純t(15;17)組臨床預(yù)后的差別。3.采用FISH和RT-PCR等技術(shù)發(fā)現(xiàn)STAT5B-RARα陽性的APL患者,總結(jié)其臨床實(shí)驗(yàn)室特征。擬通過RT-PCR技術(shù)克隆STAT5B-RARα融合基因,以LV5慢病毒為載體,攜帶STAT5B-RARα在U937細(xì)胞中表達(dá),采用CCK-8法繪制細(xì)胞生長曲線、集落生成實(shí)驗(yàn)等檢測STAT5B-RARα對U937細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果1、本中心1208例初治APL患者的臨床及遺傳學(xué)特征1208例初診APL患者中男性633例,女性575例,男女之比:1.10:1,中位年齡39歲(4-78歲)。APL患者主要集中于30-49歲。依據(jù)細(xì)胞及分子遺傳學(xué)特征,將1208例初診的APL患者分別為1175例典型APL患者,17例RARα變異型APL患者,和16例染色體及融合基因均陰性,但骨髓形態(tài),白血病免疫分型及臨床特征均支持該診斷的APL患者。17例RARα變異型APL患者,男性患者比例顯著高于典型APL患者(P=0.005)。染陰融陰組(P=0.002)及變異型組患者(P=0.005)初診白細(xì)胞均明顯高于典型組APL患者。染陰融陰組(P=P=0.041)及RARα變異型APL患者(P0.001)的高危組所占比例均明顯高于典型APL患者。對核型資料完整的1142例APL患者進(jìn)行核型分析,發(fā)現(xiàn)816例APL患者有單純t(15;17),占71.45%;208例患者伴附加染色體異常,占18.21%;78例APL患者為正常核型。17例RARα重排變異的APL患者,比例為1.49%。另外,有15例APL患者有包含15/17號染色體在內(nèi)的3條或3條以上的染色體復(fù)雜易位。+8染色體是最常見的附加染色體異常,共有47例,比例為22.60%;9q-,7q-,+21所占比例較高,分別有15例,12例,11例,比例分別為7.21%,5.77%,5.29%。對APL患者突變分析發(fā)現(xiàn),FLT3-ITD突變率最高,達(dá)32.67%。71例APL患者進(jìn)行突變分析,其中46例檢測到基因突變,比例為64.79%,包括32例患者有一種突變,比例為69.57%;11例患者有2種突變,比例為23.91%;3例患者檢測到3種突變,比例為6.52%。本研究分析突變對APL患者臨床預(yù)后影響時發(fā)現(xiàn),相比于FLT3-ITD突變陰性患者,FLT3-ITD突變陽性患者的初診白細(xì)胞計數(shù)(P0.001),PML-RARα融合基因S型比例(P0.05),及高危組患者比例(P0.001),均顯著增高,5年總體生存明顯降低(P=0.014);5年無復(fù)發(fā)生存率在兩組之間無明顯差異(P=0.055)。另外,FLT3-TKD,TET2,WT1,NRAS突變對APL患者的臨床預(yù)后則無明顯影響。2、附加染色體異常對APL患者臨床特征及預(yù)后的影響附加染色體異常組比單純t(15;17)組男性患者明顯增多(50.4%vs.66.7%,P=0.004),兩組患者在年齡,初診白細(xì)胞,血紅蛋白,血小板計數(shù),融合基因類型,及總體生存時間及無復(fù)發(fā)時間無明顯差別。從附加染色體結(jié)構(gòu)異常分析,+8組,9q-組,,-7/7q-組,+21組,分別與典型t(15;17)組比較,總體生存率及無復(fù)發(fā)生存率均無明顯差異;從附加染色體數(shù)量異常分析,伴1種附加染色體異常,2種附加染色體異常,=3種附加染色體異常組,分別與典型t(15;17)組比較,總體生存率及無復(fù)發(fā)生存率也無明顯差異。3、STAT5B-RARα融合基因的克隆及初步功能研究結(jié)果運(yùn)用FISH和RT-PCR等技術(shù)檢測到6例STAT5B-RARα陽性的APL患者,該組患者對維甲酸/亞砷酸治療不敏感,預(yù)后不佳。以STAT5B-RARα陽性的APL患者c DNA為模板,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出STAT5B-RARα融合基因,構(gòu)建慢病毒載體質(zhì)粒LV5-GFP-STAT5B-RARα,采用磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染U937細(xì)胞系,成功建立了穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,STAT5B-RARα能夠在一定程度上促進(jìn)U937細(xì)胞的增殖。結(jié)論1.本中心1208例APL患者主要集中于中青年,男女發(fā)病率基本相等。依據(jù)遺傳學(xué)特征,分為1175例典型APL患者,17例RARα變異型APL患者,和16例染色體及融合基因均陰性,但骨髓形態(tài),白血病免疫分型及臨床特征均支持該診斷的APL患者。RARα變異型APL患者中,男性患者比例顯著高于典型APL患者。染陰融陰組及變異型組患者初診白細(xì)胞均明顯高于典型組APL患者。染陰融陰組及RARα變異型APL患者的高危組所占比例均明顯高于典型APL患者。APL患者核型分析發(fā)現(xiàn),71.45%的APL患者有單純t(15;17);18.21%的患者有附加染色體異常。在附加染色體中,其中+8比例為22.60%染色體是最常見的附加染色體異常,其次9q-,7q-,+21也較常見,比例分別為7.21%,5.77%,5.29%。APL患者突變分析發(fā)現(xiàn),FLT3-ITD突變率最高,達(dá)32.67%,在APL患者中是預(yù)后不良的因素。WT1,FLT3-TKD突變率較高,分別為14.46%,11.11%。FLT3-TKD,TET2,WT1,NRAS突變對APL患者的臨床預(yù)后則無明顯影響。2.伴附加染色體異常對急性早幼粒細(xì)胞白血病患者的臨床特征及預(yù)后無明顯影響。3.我們成功構(gòu)建STAT5B-RARα融合基因慢病毒載體,建立U937穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,STAT5B-RARα在一定程度上能夠促進(jìn)U937細(xì)胞的增殖。我們將在建立STAT5B-RARα穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對其致病機(jī)制進(jìn)行深入研究。
【關(guān)鍵詞】：急性早幼粒細(xì)胞白血病 附加染色體 STAT5B-RARα融合基因
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-15
• 參考文獻(xiàn)12-15
• 第一部分 回顧性分析單中心1208例APL患者的臨床及實(shí)驗(yàn)室特征15-28
• 病例與方法15-16
• 結(jié)果16-25
• 討論25-27
• 參考文獻(xiàn)27-28
• 第二部分 附加染色體異常對APL患者的臨床特征及預(yù)后的影響28-36
• 病例資料28
• 材料和方法28-30
• 結(jié)果30-34
• 討論34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 第三部分 STAT5B-RARα融合基因的克隆及初步功能研究36-52
• 實(shí)驗(yàn)方法36-45
• 結(jié)果45-49
• 討論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 結(jié)論52-53
• 綜述53-66
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文66-67
• 中英文縮略詞匯表67-68
• 致謝68-69

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本文編號：768769