本文關(guān)鍵詞：GAS2-Calpain2軸維持白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)

  更多相關(guān)文章： GAS2 Calpain2 GASDN 免疫共沉淀

【摘要】：目的:GAS2(生長(zhǎng)抑制特異性蛋白2)調(diào)控細(xì)胞周期、凋亡和Calpain(鈣蛋白激酶)活性。GAS2-Calpain2軸在腫瘤細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中具有雙重作用,但關(guān)于GAS2-Calpain2軸在白血病細(xì)胞中的功能研究還非常有限,本研究旨在初步探討GAS2-Calpain2軸在白血病細(xì)胞生長(zhǎng)中的功能及作用機(jī)制。方法:(1)利用實(shí)時(shí)定量PCR(Quantitative Real-time PCR,Q-RT-PCR)和Calpain活性檢測(cè)等方法檢測(cè)各類白血病患者骨髓細(xì)胞及白血病細(xì)胞株中GAS2的m RNA表達(dá)及Calpain的活性;(2)Western blot和免疫熒光(Immunofluorescence,IF)技術(shù)檢測(cè)正常骨髓細(xì)胞、白血病患者骨髓細(xì)胞以及白血病細(xì)胞系中GAS2蛋白的表達(dá);(3)利用磷酸鈣沉淀法制備慢病毒,轉(zhuǎn)導(dǎo)THP-1和Jurkat細(xì)胞,Q-RT-PCR和Western blot等方法檢測(cè)干擾效率,比較GAS2沉默和對(duì)照細(xì)胞的增殖、集落生成和Calpain活性的差異;(4)注射對(duì)照和GAS2沉默THP1至裸鼠皮下,比較它們生成腫瘤的能力;(5)免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)GAS2與Calpain2在THP-1和Jurkat細(xì)胞中的相互作用,并研究Calpain2敲減在GAS2沉默誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制中的作用;(6)比較GAS2沉默和對(duì)照慢性髓細(xì)胞白血病(CML)患者CD34+細(xì)胞集落生成能力的差異。結(jié)果:(1)119例不同類型白血病患者骨髓中GAS2較正常骨髓都顯著異常高表達(dá);類似地,不同白血病細(xì)胞株中GAS2表達(dá)均較對(duì)照細(xì)胞顯著增高;Calpain活性在22例急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者樣本中較正常骨髓顯著降低;(2)免疫熒光染色顯示白血病細(xì)胞株CCRF-CEM、SHI-1、Jurkat、THP-1和K562中GAS2蛋白表達(dá)均明顯高于正常骨髓細(xì)胞;(3)使用慢病毒遞送含sh NC(包含一段無義的對(duì)照sh RNA核苷酸序列)和sh919sh1206(分別以sh GAS2#1和sh GAS2#2表示,分別包含特異性沉默GAS2的sh RNA核苷酸序列)至THP-1和Jurkat細(xì)胞,GAS2的m RNA和蛋白表達(dá)抑制率均60%;沉默GAS2顯著增強(qiáng)THP-1和Jurkat細(xì)胞的Calpain的活性并抑制細(xì)胞增殖和集落生成能力;(4)GAS2沉默顯著抑制THP-1細(xì)胞的裸鼠皮下成瘤能力;(5)通過免疫共沉淀證明了在Jurkat和THP-1細(xì)胞中GAS2特異性結(jié)合Calpain2而非Calpain1,在THP-1細(xì)胞中同時(shí)沉默GAS2和Calpain2能夠逆轉(zhuǎn)單獨(dú)沉默GAS2誘發(fā)的生長(zhǎng)抑制;(6)在CML干/祖細(xì)胞中沉默GAS2顯著抑制它們的集落生成能力。結(jié)論:GAS2在多種人類白血病包括慢性髓細(xì)胞白血病(CML)、急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)、急性髓細(xì)胞白血病(AML)均異常高表達(dá)。沉默GAS2在體內(nèi)和體外均能顯著抑制THP-1和Jurkat的細(xì)胞增殖并增強(qiáng)Calpain活性,沉默GAS2也抑制CML患者CD34+細(xì)胞的集落生成能力。GAS2特異結(jié)合Calpain2而非Calpain1,Calpain2參與GAS2沉默誘發(fā)的生長(zhǎng)抑制。綜上,我們證實(shí)GAS2-Calpain2維持白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)。
【關(guān)鍵詞】：GAS2 Calpain2 GASDN 免疫共沉淀
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 材料和方法12-25
• 一、材料12-14
• 1.1 標(biāo)本及細(xì)胞系12
• 1.2 主要試劑12-13
• 1.3 主要儀器13-14
• 二、方法14-25
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)14
• 2.2 細(xì)胞總RNA提取14
• 2.3 白血病患者樣本收集14-15
• 2.4 熒光定量PCR15-16
• 2.5 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot）16-17
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometric Analysis）17-18
• 2.7 免疫熒光染色（Immunofluorescence Staining）18
• 2.8 免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation）18-19
• 2.9 GAS2 慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建19-22
• 2.10 制備慢病毒22-23
• 2.11 細(xì)胞增殖和集落生成實(shí)驗(yàn)23
• 2.12 Calpain活性的檢測(cè)23
• 2.13 裸鼠的皮下成瘤23-24
• 2.14 以Ps為載體遞送mi RNA24
• 2.15 細(xì)胞凋亡檢測(cè)24
• 2.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 結(jié)果25-36
• 1、GAS2 在白血病細(xì)胞系株中的表達(dá)25-26
• 2、GAS2 在多種白血病細(xì)胞株中的蛋白表達(dá)26
• 3、GAS2 為沉默抑制THP-1 和Jurkat細(xì)胞的生長(zhǎng)26-28
• 4、過表達(dá)GAS2 能恢復(fù)由GAS2 沉默造成的生長(zhǎng)抑制28-29
• 5、沉默 GAS2 造成的 THP-1 細(xì)胞增殖抑制與細(xì)胞凋亡相關(guān)29
• 6、沉默GAS2 顯著抑制THP-1 細(xì)胞的裸鼠皮下成瘤能力29-30
• 7、沉默GAS2 抑制CML患者CD34+細(xì)胞的集落生成30-31
• 8、GAS2 與Calpain2 存在內(nèi)源性相互結(jié)合31-32
• 9、Calpain2 是沉默GAS2 抑制細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的32-34
• 10、GAS2 在不同白血病患者及正常骨髓標(biāo)本中的表達(dá)34-36
• 討論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述 Calpain與腫瘤細(xì)胞41-53
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文53-54
• 主要試劑配制54-55
• 中英文縮略詞匯表55-56
• 致謝56-58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 紀(jì)立農(nóng),陳陵霞,韓學(xué)堯,祝方;Calpain10基因多態(tài)性與中國(guó)人2型糖尿病遺傳易感性的相關(guān)性研究[J];中國(guó)糖尿病雜志;2002年01期

2 蘇燕;熊國(guó)梅;彭姝彬;;Calpain10基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2006年11期

3 唐亞平;戴芳;楊宏寶;;2型糖尿病與calpain 10基因的研究[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年10期

4 馮彤;王華;;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠腦CalpainⅠ表達(dá)及其臨床意義[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘(兒科學(xué));2008年02期

5 褚志華;張君;袁紅玲;田世坤;徐文靜;陸環(huán);李愛琴;謝建新;;Calpain 10基因與新疆維吾爾族2型糖尿病遺傳易感性研究[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年03期

6 許軍峰;郭琳;;Calpain在腦缺血細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2011年04期

7 張茂昒;許冰瑩;邱俊;龔鶴琴;李云濤;楊昭;鄢志梅;馬景孚;;Calpain10基因多態(tài)性與昆明地區(qū)人群2型糖尿病相關(guān)性研究[J];中國(guó)慢性病預(yù)防與控制;2005年06期

8 邱俊;張茂昒;;昆明地區(qū)人群Calpain10基因SNP44變異與2型糖尿病遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年02期

9 陳小盼;宋欽華;陳志斌;王轉(zhuǎn)鎖;;海南黎族2型糖尿病患者Calpain-10基因多態(tài)性的實(shí)驗(yàn)研究[J];臨床薈萃;2006年14期

10 王東;陳軍建;俞力;鄧梅香;王瑩;陳霞;;Calpain-10基因SNP43單核苷酸多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性研究[J];山東醫(yī)藥;2008年25期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姜立群;溫紹君;王紅月;陳蘭英;;應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選心臟文庫(kù)中與calpain相作用的蛋白質(zhì)[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

2 李明輝;王興岡;謝燁卿;虞勇;陳瑞珍;;Calpain在柯薩奇B3病毒引起的心肌纖維化發(fā)生過程中的作用[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

3 徐超;;Calpain:缺血性腦損傷保護(hù)作用的一個(gè)靶點(diǎn)[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)神經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省藥理學(xué)會(huì)2002年年會(huì)論文摘要集[C];2002年

4 徐超;;Calpain活性抑制與腦缺血大腦的保護(hù)[A];第八屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)暨第七屆Servier獎(jiǎng)?lì)C獎(jiǎng)大會(huì)會(huì)議摘要集[C];2003年

5 Fei Liu;Nana Jin;Xiaomin Yin;Wei Qian;Jianhua Shi;Jianlan Gu;Caoyi Chen;;Truncation and activation of GSK-3 by calpain I:a molecular mechanism links to tau hyperphosphorylation[A];2013年全國(guó)老年性癡呆與相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

6 吳金蘭;萬福生;;Calpain與心血管疾病的關(guān)系[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

7 虞勇;;Calpain在CVB3感染大鼠心肌細(xì)胞凋亡中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第十次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2008年

8 孫會(huì);秦貴信;姜海龍;張慶華;高磊;;宰前短期高鈣日糧對(duì)豬肌鈣含量和μ-calpain活性及其mRNA表達(dá)量的影響[A];第六次全國(guó)飼料營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

9 張仁利;黃達(dá)娜;高世同;耿藝介;吳少庭;胡章立;張順祥;程錦泉;;疫苗候選分子Calpain抗日本血吸蟲感染的保護(hù)性免疫機(jī)制[A];全國(guó)寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

10 余冰;唐仁勇;陳代文;;鎂離子對(duì)大鼠L6成肌細(xì)胞μ-Calpain基因表達(dá)及Nebulin降解的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 程曉剛;Calpain inhibitor I對(duì)創(chuàng)傷應(yīng)激相關(guān)功能調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 賈寶成;風(fēng)濕性心臟病心房顫動(dòng)的電生理機(jī)制及Calpain Ⅰ的作用機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 張勇;α-酮基酰胺類Calpain抑制劑的設(shè)計(jì)、合成與活性研究[D];沈陽(yáng)藥科大學(xué);2008年

4 姜立群;人calpain1大亞基相作用的蛋白質(zhì)篩選及其在Angll誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大模型中功能的初步探索[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

5 王宇卉;Caspase-3與calpain在缺血性腦損傷中的作用及治療干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

6 陳莉娜;新生鼠實(shí)驗(yàn)性缺氧缺血性腦損傷后μ-Calpain的活性變化及其抑制劑的腦保護(hù)作用研究[D];四川大學(xué);2006年

7 張?jiān)圃?實(shí)驗(yàn)性糖尿病性多發(fā)性神經(jīng)病CGT、calpainⅡ的表達(dá)及人神經(jīng)生長(zhǎng)因子的干預(yù)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

8 崔巍;游離脂肪酸通過Ca~(2+)/calpain-2途徑誘導(dǎo)β細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 劉德杰;Calpains對(duì)機(jī)械通氣肺損傷早期炎性反應(yīng)的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2013年

10 唐仁勇;μ-Calpain、Calpastatin與豬肉嫩度的關(guān)系及其基因表達(dá)的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孫麗麗;GAS2-Calpain2軸維持白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)[D];蘇州大學(xué);2015年

2 王東;Calpain-10基因43位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)與2型糖尿病的相關(guān)性研究[D];江蘇大學(xué);2008年

3 李明輝;Calpain在急性病毒性心肌炎發(fā)病中的作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

4 馮彤;實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠腦皮質(zhì)Calpain表達(dá)的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

5 張雙;Calpain介導(dǎo)小鼠心肌缺血/再灌注氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2014年

6 張曉綱;哮喘豚鼠心肌組織calpain表達(dá)的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

7 馮燁;氧化應(yīng)激中calpain對(duì)GSK-3β的片段化在其活性調(diào)節(jié)中的作用及機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2012年

8 任虎;UK114和calpain-5調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 李蓉;Calpain-10基因多態(tài)性與PCOS患者遺傳易感性的相關(guān)性研究[D];四川大學(xué);2005年

10 李慶偉;m-Calpain在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌中表達(dá)的研究[D];鄭州大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：768342