本文關(guān)鍵詞：STIP介導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 非小細(xì)胞肺癌 STIP蛋白 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡

【摘要】：肺癌是臨床最常見(jiàn)的肺原發(fā)性惡性腫瘤,其病理類(lèi)型包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC),其中NSCLC約占肺癌總數(shù)的80%-85%。在我國(guó)肺癌是導(dǎo)致惡性腫瘤病人死亡的首位原因,5年生存率僅有10%,其治療方式以手術(shù)為主,但80%的患者確診時(shí)已處于晚期,已失去了手術(shù)治療機(jī)會(huì)�；熓峭砥诜伟┲饕委煼椒ㄖ�,但隨著化療次數(shù)增多,耐藥率會(huì)越來(lái)越高。目前,晚期肺癌尚無(wú)理想治療的方法,因此,深入研究肺癌的發(fā)病機(jī)制,尋找基于病因?qū)W的潛在分子靶點(diǎn),對(duì)肺癌的診斷以及防治具有重要意義。STIP蛋白是含有多個(gè)結(jié)構(gòu)域的核蛋白,在核中可以自我聚集,形成rod樣的結(jié)構(gòu)-stiposome。在C.elegans中,利用RNAi技術(shù)敲除STIP蛋白的表達(dá),可以使線蟲(chóng)的早期胚胎發(fā)育停滯于16細(xì)胞階段,通過(guò)導(dǎo)入人或果蠅的stip基因可以拯救由于STIP缺失而引起的致死表型,這表明STIP在物種進(jìn)化的各階段擁有重要的保守功能。蛋白質(zhì)組的研究發(fā)現(xiàn)STIP是核剪接體(spliceosome)的組成成員,可能參與m RNA前體中內(nèi)含子的移除過(guò)程,影響細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)調(diào)控。然而,至今關(guān)于其在腫瘤中的表達(dá)及功能尚未有報(bào)道。本課題研究發(fā)現(xiàn),與肺癌旁組織相比,STIP在NSCLC組織中顯著高表達(dá)并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明STIP的表達(dá)可能與NSCLC有關(guān)。為了明確STIP在NSCLC中的生物學(xué)功能,我們構(gòu)建了靶向stip基因的sh RNA慢病毒,通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)和克隆形成以及體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),下調(diào)STIP的表達(dá)能夠顯著抑制NSCLC細(xì)胞系A(chǔ)549和H460腫瘤細(xì)胞的增殖,并且抑制NSCLC移植瘤的生長(zhǎng),表明STIP具有促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖的功能。由于細(xì)胞增殖是通過(guò)細(xì)胞周期的有序運(yùn)行實(shí)現(xiàn)的,因此,我們進(jìn)一步探究了STIP對(duì)細(xì)胞周期的影響。在A549和H460細(xì)胞中干擾STIP表達(dá)后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯于G2/M期。檢測(cè)相關(guān)調(diào)控分子的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Cyclin B1、CDK1和Cdc25C蛋白表達(dá)減少,CDK1的Thr-14/Tyr-15位點(diǎn)的去磷酸化被抑制。推測(cè)其機(jī)制可能是通過(guò)抑制Cyclin B1-CDK1復(fù)合物的表達(dá)及活性而導(dǎo)致G2/M期的阻滯。細(xì)胞周期的阻滯常伴隨著細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo),為了明確STIP對(duì)細(xì)胞凋亡的影響,我們干擾A549和H460細(xì)胞中STIP表達(dá)后檢測(cè)這些細(xì)胞的核形態(tài)和膜磷脂酰絲氨酸外翻的變化,發(fā)現(xiàn)下調(diào)STIP表達(dá)能誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞發(fā)生凋亡,其誘導(dǎo)的機(jī)制:一方面是通過(guò)上調(diào)促凋亡蛋白Bax以及下調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá);另一方面是通過(guò)增強(qiáng)Caspase-9和Caspase-3的活性,誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡。有研究表明STIP作為剪接體的組成成員,參與m RNA前體中內(nèi)含子移除過(guò)程,介導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,我們發(fā)現(xiàn)在A549細(xì)胞中干擾STIP表達(dá),同對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組有566個(gè)表達(dá)差異基因,其中490個(gè)上調(diào)和76個(gè)下調(diào)。這些基因影響多條與腫瘤相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,包括MAPK、Wnt、PI3K/AKT和NF-kB信號(hào)通路。本研究對(duì)STIP在NSCLC中的生物學(xué)功能及其相關(guān)的分子調(diào)控機(jī)制進(jìn)行揭示,表明STIP可能是NSCLC中一個(gè)潛在的診斷和治療靶標(biāo)。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 STIP蛋白 細(xì)胞周期 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 中英文縮寫(xiě)對(duì)照9-13
• 第1章 緒論13-21
• 1.1 STIP蛋白的概述13-14
• 1.2 肺癌14-15
• 1.3 細(xì)胞增殖與腫瘤的關(guān)系15
• 1.4 細(xì)胞周期與腫瘤15-17
• 1.4.1 CDK-Cyclin16
• 1.4.2 CKIs16-17
• 1.4.3 細(xì)胞周期調(diào)控分子異常表達(dá)與腫瘤17
• 1.5 細(xì)胞凋亡與腫瘤17-19
• 1.5.1 細(xì)胞凋亡17-18
• 1.5.2 細(xì)胞凋亡的機(jī)制18-19
• 1.5.3 細(xì)胞凋亡與腫瘤19
• 1.6 本課題的研究目的、內(nèi)容和意義19-21
• 第2章 STIP在肺癌組織中的表達(dá)情況及對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響21-35
• 2.1 前言21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器21-22
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 2.3.1 試劑配制22-23
• 2.3.2 免疫組化23-24
• 2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)24-25
• 2.3.4 蛋白質(zhì)的檢測(cè)25-26
• 2.3.5 特異性STIP-sh RNA的制備26-29
• 2.3.6 慢病毒侵染構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系29-30
• 2.3.7 慢病毒侵染30
• 2.3.8 siRNA轉(zhuǎn)染30-31
• 2.3.9 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)31
• 2.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-34
• 2.4.1 STIP蛋白在肺癌組織中的表達(dá)31-32
• 2.4.2 干擾STIP表達(dá)抑制NSCLC細(xì)胞的增殖32-34
• 2.5 小結(jié)與討論34-35
• 第3章 STIP對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞周期和凋亡的影響35-47
• 3.1 前言35-36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器36
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料36
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器36
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法36-39
• 3.3.1 試劑配制36
• 3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期36-37
• 3.3.3 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)37
• 3.3.4 Caspase酶活檢測(cè)37-38
• 3.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38-39
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-44
• 3.4.1 干擾STIP表達(dá)對(duì)NSCLC細(xì)胞周期的影響39-40
• 3.4.2 干擾STIP的表達(dá)對(duì)G2/M期的相關(guān)分子的影響40
• 3.4.3 干擾STIP的表達(dá)對(duì)NSCLC細(xì)胞凋亡的影響40-43
• 3.4.4 干擾STIP的表達(dá)對(duì)凋亡相關(guān)分子及Caspases活性的影響43-44
• 3.5 小結(jié)與討論44-47
• 第4章 下調(diào)STIP對(duì)人非小肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的影響47-56
• 4.1 前言47-48
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器48
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料48
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器48
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法48-53
• 4.3.1 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序48-50
• 4.3.2 Real-time PCR50-53
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-55
• 4.4.1 STIP干擾后NSCLC細(xì)胞基因表達(dá)譜的分析53-54
• 4.4.2 Real-time PCR54-55
• 4.5 小結(jié)與討論55-56
• 第5章 STIP對(duì)裸鼠人非小細(xì)胞肺癌移植瘤生長(zhǎng)的影響56-60
• 5.1 前言56
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器56
• 5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料56
• 5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器56
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法56-58
• 5.3.1 裸鼠肺癌模型的建立56-57
• 5.3.2 腫瘤組織HE染色57-58
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-59
• 5.4.1 干擾STIP抑制NSCLC移植瘤生長(zhǎng)58
• 5.4.2 HE染色結(jié)果58-59
• 5.5 小結(jié)與討論59-60
• 結(jié)論與展望60-61
• 1 結(jié)論60
• 2 展望60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 附錄A 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄68-69
• 致謝69

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張明輝,安廣宇,董寧征,白霞,阮長(zhǎng)耿;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子165對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];中華血液學(xué)雜志;2005年09期

2 成海燕;彭應(yīng)梅;于建春;韓景獻(xiàn);;腦細(xì)胞增殖研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年02期

3 ;對(duì)人類(lèi)生老病死奧秘的最新闡釋——細(xì)胞增殖、分化與凋亡[J];山東中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年04期

4 劉勇,路名芝;細(xì)胞增殖調(diào)控與腫瘤發(fā)生[J];九江醫(yī)學(xué);1997年04期

5 劉勇;腫瘤細(xì)胞增殖調(diào)控的研究進(jìn)展[J];實(shí)用癌癥雜志;1997年02期

6 周劍濤,徐久元;P21 CIP1/WAF1/SDI1與細(xì)胞增殖調(diào)控[J];九江醫(yī)學(xué);1999年04期

7 鄭瑞玉,陳澤紅;胰母細(xì)胞增殖癥手術(shù)治療護(hù)理要點(diǎn)[J];護(hù)士進(jìn)修雜志;2001年03期

8 Kase S.;SaitoW.;YokoiM. ;王文軍;;人類(lèi)特發(fā)性視網(wǎng)膜前膜細(xì)胞增殖及谷氨酰胺合成酶的表達(dá)[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘.眼科學(xué)分冊(cè);2006年04期

9 陳潔;李瑞明;方娟;盧志勇;阮緒芝;;siRNA-FAM92A1-289對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響[J];湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);2011年02期

10 石淙;萬(wàn)臘根;;細(xì)胞增殖的檢測(cè)方法[J];實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2012年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王瀟;高瑞蘭;錢(qián)煦岱;林筱潔;陳小紅;尹利明;;大黃素對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 王瀟;錢(qián)煦岱;陳曉紅;林筱潔;尹利明;高瑞蘭;;大黃素對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];2009年浙江省中醫(yī)藥學(xué)會(huì)血液病學(xué)術(shù)年會(huì)、浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)血液病學(xué)術(shù)年會(huì)暨國(guó)家級(jí)中西醫(yī)結(jié)合血液病新進(jìn)展繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

3 鄧錦波;牛艷麗;范文娟;劉彬;;死亡受體5與神經(jīng)細(xì)胞增殖[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年

4 鄧錦波;牛艷麗;范文娟;劉彬;;死亡受體5與神經(jīng)細(xì)胞增殖[A];河南省細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第二屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2009年

5 鄭志宏;胡建達(dá);陳英玉;鄭靜;林敏輝;;大黃素對(duì)K562細(xì)胞增殖、凋亡的影響[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

6 楊林;陶天遵;吳瑩;李曉蕊;劉楓晨;劉偉;張淑云;聞穎;陶樹(shù)清;吳麗萍;;地塞米松對(duì)成人骨細(xì)胞增殖和分化影響的實(shí)驗(yàn)研究(摘要)[A];第五次全國(guó)創(chuàng)傷康復(fù)暨第七次全國(guó)運(yùn)動(dòng)療法學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 李墨;韓艷玲;劉俊;吳非;韓昱晨;;RACK1直接與MCM7結(jié)合,促進(jìn)細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)日程及論文匯編[C];2010年

8 徐楓;趙玫;杜菲;林梁;周啟兵;余權(quán);黃常志;;Hsp 70與T細(xì)胞增殖的相關(guān)研究[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

9 陳勇;呂合作;胡建國(guó);李柏青;;可刺激人γδT細(xì)胞增殖的結(jié)核桿菌多肽抗原的生物學(xué)特性分析[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

10 黃文榮;王立生;高春記;魯茁壯;王華;段海峰;達(dá)萬(wàn)明;;rhG-CSF動(dòng)員對(duì)T細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒的影響[A];第10屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 四川省廣元市元壩中學(xué) 葉靜;《細(xì)胞增殖》第1課時(shí)[N];學(xué)知報(bào);2011年

2 ;自身細(xì)胞可制再生血管[N];中國(guó)環(huán)境報(bào);2000年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李因濤;促微管聚合蛋白TPPP3在肥胖及肺癌中的功能及調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 鄭碧云;HBx與COXIII共定位上調(diào)HepG2細(xì)胞線粒體功能促進(jìn)細(xì)胞增殖[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉霞;REG3A促進(jìn)AD-HIES支氣管上皮細(xì)胞增殖修復(fù)的作用機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

4 段亮;結(jié)直腸癌中炎性分子S100A9的表達(dá)與疾病進(jìn)展的關(guān)系及其對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖與遷移的作用及分子機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王齊;Sam68對(duì)T-ALL細(xì)胞增殖和凋亡的作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

6 黃正洋;表皮生長(zhǎng)因子參與鵝卵泡顆粒細(xì)胞增殖調(diào)控機(jī)理的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

7 桂琳;多細(xì)胞因子調(diào)控hsBAFF通過(guò)Erk1/2和S6K1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)B細(xì)胞增殖機(jī)理研究[D];南京師范大學(xué);2015年

8 李繼偉;氧化固醇結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白4L(ORP4L)通過(guò)維持細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)平衡促進(jìn)細(xì)胞增殖[D];暨南大學(xué);2016年

9 來(lái)凱然;環(huán)氧合酶-2在TNF-α誘導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)分化中的作用及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

10 王洪領(lǐng);抗腫瘤新藥羧胺三唑抑制細(xì)胞增殖機(jī)制的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孫思;TGF-β調(diào)節(jié)仔豬睪丸支持細(xì)胞增殖的機(jī)制[D];西南大學(xué);2015年

2 王愿;ATO通過(guò)下調(diào)CD44對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 劉夢(mèng)涵;靶向抑制miRNA-21對(duì)K562細(xì)胞增殖及PTEN-PI3K/AKT通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 高曉晗;尼洛替尼聯(lián)合三氧化二砷對(duì)K562細(xì)胞增殖及凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 姚晶晶;地西他濱聯(lián)合三氧化二砷對(duì)HL-60細(xì)胞增殖、凋亡的作用以及對(duì)DAPK基因影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 鄭雅文;Co-ASS對(duì)KB細(xì)胞增殖、凋亡及其機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

7 黃銳;可溶性CD40配體對(duì)THP-1細(xì)胞增殖及PI3K、Akt mRNA表達(dá)的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2016年

8 肖霞;5-Aza調(diào)控單核細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖、分化和遷移的機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2016年

9 袁媛;游離脂肪酸對(duì)甲狀腺細(xì)胞增殖的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李娟;NOX4通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)促進(jìn)NSCLC細(xì)胞增殖[D];廣東藥科大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：766510