發(fā)布時(shí)間：2017-08-31 14:43

  本文關(guān)鍵詞：USP14去泛素化vimentin及miR-320a下調(diào)USP14和vimentin來(lái)共同調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的惡性行為

  更多相關(guān)文章： vimentin USP14 miR-320a 胃癌

【摘要】：目的胃癌(Gastric cancer)是消化道的一種常見惡性癌癥,是世界上導(dǎo)致死亡的第三種癌癥。盡管近年來(lái)胃癌的診斷和治療得到了進(jìn)一步的發(fā)展,但由于胃癌的轉(zhuǎn)移和再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)比較高,胃癌的死亡率仍然很高。因此,研究胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移機(jī)制十分重要,并且缺乏有效的生物標(biāo)志物檢測(cè)早期胃癌的發(fā)生及發(fā)展�，F(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究利用血清蛋白抗原,致癌基因或基因家族通過先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù),如微陣列、RNA-Seq等等,探究了許多潛在的胃癌生物標(biāo)記基因。近年來(lái),vimentin在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和癌癥生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移過程中起的重要作用受到越來(lái)越多的關(guān)注。本課題主要研究vimentin、USP14和miR-320a在胃癌細(xì)胞中的惡性行為,探究它們?cè)谖赴┲邢嗷フ{(diào)節(jié)的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu),為胃癌的早期診斷和轉(zhuǎn)移治療提出一個(gè)新的思路。方法首先應(yīng)用RT-qPCR檢測(cè)胃癌組織中vimentin的表達(dá)水平,并研究vimentin在胃癌惡性行為中的作用。接著,我們尋找研究vimentin在胃癌組織和正常癌旁組織之間表達(dá)差異的影響機(jī)制及其對(duì)胃癌細(xì)胞惡性行為的影響,運(yùn)用泛素化和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Co-IP)來(lái)探究vimentin表達(dá)水平增高的調(diào)節(jié)機(jī)制,發(fā)現(xiàn)USP14通過影響vimentin的泛素化進(jìn)而影響其在胃癌中的表達(dá)水平。然后,分別運(yùn)用MTT、集落形成、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)USP14對(duì)胃癌細(xì)胞活力、細(xì)胞增殖能力、遷移和侵襲能力的作用,證實(shí)了USP14對(duì)胃癌細(xì)胞惡性行為的影響。此外,我們通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)miR-320a可以同時(shí)靶定和下調(diào)vimentin和USP14,接著,我們又進(jìn)一步研究了miR-320a對(duì)胃癌惡性行為的影響。最后,運(yùn)用RT-qPCR檢測(cè)了USP14及miR-320a在胃癌組織及正常胃組織中差異性表達(dá)及相關(guān)性分析,闡明了miR-320a可以通過對(duì)vimentin和USP14的調(diào)節(jié)作用來(lái)抑制胃癌的惡性行為。結(jié)果RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胃癌組織與癌旁正常組織相比vimentin的表達(dá)水平顯著增高,MTT、集落形成、遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)表明vimentin促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性行為。進(jìn)一步的泛素化實(shí)驗(yàn)和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明了USP14與vimentin具有相互作用,并且USP14通過去泛素化vimentin來(lái)增加vimentin在胃癌細(xì)胞中表達(dá)水平。細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)證明了USP14也促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性行為。此外,發(fā)現(xiàn)miR-320a與vimentin和USP14的3’UTR具有特異性結(jié)合位點(diǎn),并且發(fā)現(xiàn)miR-320a直接靶定和下調(diào)USP14和vimentin,并且通過細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)證明了miR-320a在胃癌組織中具有抑癌作用。最后,RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在胃癌組織中,miR-320a與USP14和vimentin均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。結(jié)論胃癌組織中vimentin表達(dá)水平增高,并且vimentin可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的惡性行為。進(jìn)一步我們研究發(fā)現(xiàn)USP14可以通過去泛素化vimentin來(lái)增加其在胃癌細(xì)胞的表達(dá)水平。此外,我們發(fā)現(xiàn)了miR-320a可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)vimentin的表達(dá)水平,研究證明了miR-320a不僅可以通過結(jié)合vimentin的3’UTR直接下調(diào)vimentin的表達(dá),還可以通過直接靶定和下調(diào)USP14的表達(dá)水平來(lái)間接減少胃癌細(xì)胞中vimentin的表達(dá)水平。此外,miR-320a可以通過下調(diào)USP14和vimentin來(lái)抑制胃癌細(xì)胞的惡性行為。綜上所述,這些研究結(jié)果為胃癌的研究及檢測(cè)提出了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：vimentin USP14 miR-320a 胃癌
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、檢測(cè)胃癌組織和胃癌細(xì)胞中vimentin的表達(dá)水平15-31
• 1.1 材料和方法15-26
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料15-16
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-26
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法26
• 1.2 結(jié)果26-30
• 1.2.1 Vimentin在胃癌組織中的mRNA表達(dá)水平增加26
• 1.2.2 Vimentin mRNA在胃癌細(xì)胞中的mRNA表達(dá)水平增加26-27
• 1.2.3 Vimentin蛋白在胃癌細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平增加27-28
• 1.2.4 Vimentin增加胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)活力28
• 1.2.5 Vimentin增加胃癌細(xì)胞的增殖能力28-29
• 1.2.6 Vimentin增加胃癌細(xì)胞的遷移能力29-30
• 1.2.7 Vimentin增加胃癌細(xì)胞的侵襲能力30
• 1.3 小結(jié)30-31
• 二、USP14去泛素化vimentin并導(dǎo)致其在胃癌中表達(dá)上調(diào)31-41
• 2.1 材料和方法31-36
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料31
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法31-36
• 2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法36
• 2.2 結(jié)果36-40
• 2.2.1 胃癌細(xì)胞中vimentin的泛素化水平降低36-37
• 2.2.2 CoIP證明USP14與vimentin具有相互作用37
• 2.2.3 USP14對(duì)vimentin表達(dá)水平的影響37-38
• 2.2.4 USP14減少vimentin的泛素化水平38-39
• 2.2.5 USP14突變后對(duì)vimentin表達(dá)水平和泛素化水平影響39-40
• 2.3 小結(jié)40-41
• 三、USP14對(duì)胃癌細(xì)胞惡性行為的影響41-46
• 3.1 材料和方法41-42
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料41
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法41
• 3.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法41-42
• 3.2 結(jié)果42-45
• 3.2.1 USP14促進(jìn)胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)活力42
• 3.2.2 USP14增加胃癌細(xì)胞的增殖能力42-43
• 3.2.3 USP14增加胃癌細(xì)胞的遷移能力43
• 3.2.4 USP14增加胃癌細(xì)胞的侵襲能力43-44
• 3.2.5 USP14與vimentin在細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖能力中的功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)44
• 3.2.6 USP14與vimentin在細(xì)胞遷移和侵襲能力中的功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)44-45
• 3.3 小結(jié)45-46
• 四、miR-320a下調(diào)vimentin和USP1446-56
• 4.1 材料和方法46-50
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料46
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法46-50
• 4.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法50
• 4.2 結(jié)果50-55
• 4.2.1 熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證明mi R-320a直接靶定vimentin50-51
• 4.2.2 熒光報(bào)告載體實(shí)驗(yàn)證明mi R-320a直接靶定USP1451-52
• 4.2.3 RT-qPCR和Western blot證明miR-320a對(duì)vimentin靶定作用52
• 4.2.4 RT-qPCR和Western blot證明miR-320a對(duì)USP14靶定作用52-53
• 4.2.5 miR-320a抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)活力53-54
• 4.2.6 miR-320a抑制胃癌細(xì)胞的增殖能力54
• 4.2.7 miR-320a抑制胃癌細(xì)胞的遷移能力54-55
• 4.2.8 miR-320a抑制胃癌細(xì)胞的侵襲能力55
• 4.3 小結(jié)55-56
• 五、miR-320a下調(diào)vimentin和USP14來(lái)抑制胃癌細(xì)胞惡性行為56-64
• 5.1 材料和方法56-57
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料56
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法56
• 5.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法56-57
• 5.2 結(jié)果57-63
• 5.2.1 USP14在胃癌組織中的表達(dá)水平增加57
• 5.2.2 USP14與vimentin在胃癌組織中的表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系57-58
• 5.2.3 miR-320a在胃癌組織中的表達(dá)水平降低58
• 5.2.4 miR-320a與vimentin和USP14的相關(guān)性分析58-59
• 5.2.5 miR-320a可以減弱vimentin促進(jìn)胃癌細(xì)胞活力的作用59
• 5.2.6 miR-320a可以減弱vimentin促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖能力的作用59-60
• 5.2.7 miR-320a可以減弱vimentin對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的促進(jìn)作用60
• 5.2.8 miR-320a可以減弱vimentin對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的促進(jìn)作用60-61
• 5.2.9 miR-320a可以減弱USP14對(duì)胃癌細(xì)胞惡性行為的促進(jìn)作用61
• 5.2.10 miR-320a可以減弱USP14促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖能力的作用61-62
• 5.2.11 miR-320a可以減弱USP14對(duì)胃癌細(xì)胞遷移能力的促進(jìn)作用62-63
• 5.2.12 miR-320a可以減弱USP14對(duì)胃癌細(xì)胞侵襲能力的促進(jìn)作用63
• 5.3 小結(jié)63-64
• 討論64-68
• 結(jié)論68-69
• 參考文獻(xiàn)69-74
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明74-75
• 綜述 Vimentin對(duì)腫瘤的重要作用及其調(diào)控機(jī)制75-92
• 綜述參考文獻(xiàn)86-92
• 致謝92-93
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷93

，

本文編號(hào)：766196