本文關(guān)鍵詞：法舒地爾抗白血病機(jī)制相關(guān)研究

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康捏w外研究Rho激酶抑制劑法舒地爾對(duì)HL-60細(xì)胞增殖、凋亡、分化以及遷移的作用,初步闡明法舒地爾抑制白血病轉(zhuǎn)移的可能作用機(jī)制,為臨床上將法舒地爾作為抗白血病藥物提供更多基礎(chǔ)理論。實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法用法舒地爾以不同濃度對(duì)HL-60細(xì)胞(人急性早幼粒白血病細(xì)胞)和患者白血病細(xì)胞處理96小時(shí)(分時(shí)段24、48、72、96小時(shí))用臺(tái)盼藍(lán)拒染方法計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù),以此觀察法舒地爾對(duì)白血病細(xì)胞增殖的抑制作用;HL-60細(xì)胞為天津血液病醫(yī)院饋贈(zèng);用法舒地爾以不同濃度對(duì)HL-60細(xì)胞處理48小時(shí),分時(shí)段(6h、12h、24h、48h)利用流式細(xì)胞儀器測(cè)其凋亡率;用法舒地爾以不同濃度對(duì)HL-60細(xì)胞處理72小時(shí),利用NBT還原實(shí)驗(yàn)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面分化抗原CD11b、CD13;法舒地爾以不同濃度對(duì)HL-60細(xì)胞處理72小時(shí)后利用RT-PCR檢測(cè)MMP-2、MMP-9m RNA的表達(dá);利用Transwell小室體外構(gòu)建腫瘤細(xì)胞遷移模型,用法舒地爾以不同濃度在Transwell小室上室對(duì)HL-60細(xì)胞和患者白血病細(xì)胞處理12小時(shí)后計(jì)數(shù)Transwell小室下室細(xì)胞數(shù)目,以此觀察法舒地爾對(duì)白血病細(xì)胞遷移的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.利用臺(tái)盼藍(lán)拒染的方法監(jiān)測(cè)法舒地爾對(duì)HL-60細(xì)胞增殖的抑制作用:不同濃度的法舒地爾(25、50、75umol/l)在24、48、72、96小時(shí)均能抑制HL-60細(xì)胞增殖,其抑制增殖的強(qiáng)度具有時(shí)間-濃度依賴。2.利用臺(tái)盼藍(lán)拒染的方法監(jiān)測(cè)法舒地爾對(duì)患者白血病細(xì)胞的抑制作用:不同濃度的法舒地爾(25、50、75、100umol/l)在24、48、72、96小時(shí)均能抑制患者白血病細(xì)胞增殖(2例M5、1例慢粒),其抑制增殖的強(qiáng)度具有時(shí)間-濃度依賴。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)白血病細(xì)胞凋亡率:以不同的濃度的法舒地爾(50、100、150umol/L)處理HL-60細(xì)胞6h、12h、24h、48h,Annexin V-7AAD雙標(biāo)后用細(xì)胞流式術(shù)檢測(cè)顯示法舒地爾在一定時(shí)間范圍內(nèi)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的作用隨藥物濃度及作用時(shí)間的增加而增強(qiáng),并且呈現(xiàn)明顯的時(shí)間和劑量依賴性,同一時(shí)間對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率比較有差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.用法舒地爾各以25umol/l、50umol/l、75umol/l濃度處理HL-60細(xì)胞72小時(shí)后,收集細(xì)胞經(jīng)NBT染色后在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比,其結(jié)果顯示隨藥物濃度的增大陽(yáng)性細(xì)胞百分比也隨之升高;用法舒地爾各以25umol/l、50umol/l、75umol/l濃度處理HL-60細(xì)胞72小時(shí),用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HL-60細(xì)胞表面分化抗原CD11b、CD13的表達(dá)率,發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加CD11b的表達(dá)率也隨之增加,而CD13的表達(dá)率隨之遞減,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組各組相比有差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.利用RT-PCR檢測(cè)MMP-2、MMP-9m RNA表達(dá):將細(xì)胞用法舒地爾以50、100、150umol/l濃度處理HL-60細(xì)胞72h,結(jié)果顯示與對(duì)照組相比隨著藥物濃度的增大,MMP-2、MMP-9m RNA表達(dá)量下調(diào)。6.利用Transwell小室體外構(gòu)建腫瘤細(xì)胞遷移模型觀察法舒地爾對(duì)HL-60細(xì)胞和患者白血病細(xì)胞遷移影響:與對(duì)照組相比隨著藥物濃度的增大,法舒地爾對(duì)HL-60細(xì)胞和患者白血病細(xì)胞遷移的抑制作用逐漸增強(qiáng)。對(duì)照組與各實(shí)驗(yàn)組對(duì)比有差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)實(shí)驗(yàn)結(jié)論法舒地爾能抑制白血病細(xì)胞增殖并促其凋亡,能促進(jìn)白血病細(xì)胞分化,能夠抑制白血病細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,揭示了Rho激酶抑制劑法舒地爾在抗白血病方面的作用,為將來(lái)臨床應(yīng)用法舒地爾治療白血病奠定了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：白血病 法舒地爾 轉(zhuǎn)移 HL-60
【學(xué)位授予單位】：延安大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.7
【目錄】：

• 縮略詞中英文對(duì)照表3-4
• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 緒論10-14
• 第二章 研究背景14-16
• 第三章 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 第四章 實(shí)驗(yàn)方法及原理18-24
• 第五章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-30
• 第六章 討論30-33
• 第七章 結(jié)論與展望33-34
• 參考文獻(xiàn)34-41
• 綜述41-51
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 致謝51-52

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4 江金W，

本文編號(hào)：765724