本文關(guān)鍵詞：Pokemon對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞侵襲遷移能力的影響

  更多相關(guān)文章： pokemon 慢病毒載體 MCF-7細(xì)胞 細(xì)胞侵襲能力

【摘要】：目的:1.構(gòu)建表達(dá)pokemon基因的慢病毒載體,建立穩(wěn)定性表達(dá)pokemon基因的乳腺癌MCF-7細(xì)胞系,并分別觀察pokemon的高表達(dá)對(duì)MCF-7細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響。2.探討乳腺癌組織中pokemon蛋白的表達(dá)及意義。方法:實(shí)驗(yàn)分為兩部分:第一部分通過(guò)RT-PCT方法獲得pokemon-c DNA,將pokemon-c DNA與GV-165載體連接,得到帶有目的基因慢病毒表達(dá)載體,再將三種質(zhì)粒(GV165/Pokemon、p Helper 1.0、p Helper 2.0)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,包裝得到病毒載體原液并測(cè)定其滴度。將得到的高滴度pokemon表達(dá)病毒載體(pokemon組)和空白病毒載體(NC組)分別轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞,建立穩(wěn)定高表達(dá)pokemon的乳腺癌MCF-7細(xì)胞系。通過(guò)熒光顯微鏡觀察Pokemon表達(dá)慢病毒載體的轉(zhuǎn)染效率,Western blot檢測(cè)GFP-Pokemon融合蛋白的表達(dá)能力,Transwell試驗(yàn)及細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pokemon基因高表達(dá)對(duì)MCF-7細(xì)胞侵襲遷移能力的作用。第二部分利用免疫組織化學(xué)方法(IHC)檢測(cè)185例乳腺癌及23例邊緣組織組合芯片中pokemon基因的表達(dá)情況,并且分析pokemon的高表達(dá)和乳腺癌的發(fā)病年齡、腫瘤組織類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及細(xì)胞核分級(jí)等臨床病理指標(biāo)之間的相關(guān)性。結(jié)果:第一部分:1.成功構(gòu)建含有pokemon基因的慢病毒載體:1)通過(guò)RT-PCR方法獲得目的基因,將pokemon-c DNA和慢病毒載體表達(dá)質(zhì)粒GV-165經(jīng)過(guò)酶切、連接、轉(zhuǎn)化后,得到GV165-pokemon重組載體,以上結(jié)果均經(jīng)過(guò)酶切及測(cè)序鑒定,與預(yù)期結(jié)果相符。2)將病毒載體三質(zhì)粒系統(tǒng)(Pokemon-GV165重組載體、p Helper 1.0與p Helper2.0)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48h后,離心后收集上清液,過(guò)濾器過(guò)濾后得到病毒濃縮液。3)將病毒稀釋后轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞24h后,通過(guò)RT-PCR測(cè)定所收集的病毒滴度為2.0×108 TU/m L。2.成功建立穩(wěn)定高表達(dá)pokemon的MCF-7細(xì)胞系:1)在pokemon表達(dá)病毒載體和空白病毒載體(NC)轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞48小時(shí)后,在熒光顯微鏡下兩組細(xì)胞均可見(jiàn)GFP蛋白表達(dá)(綠色熒光)。2)pokemon轉(zhuǎn)染組GFP及融合蛋白的表達(dá)主要集中于細(xì)胞核,而空白病毒轉(zhuǎn)染組其表達(dá)主要分布于細(xì)胞質(zhì)。3)Western blot顯示在pokemon轉(zhuǎn)染組中6號(hào)克隆具有pokemon-GFP融合蛋白的表達(dá),而空白病毒轉(zhuǎn)染組只有GFP蛋白表達(dá)。3.Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示pokemon組比NC組到達(dá)Transwell小室下室的細(xì)胞數(shù)目明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明pokemon可抑制MCF-7細(xì)胞的侵襲能力。4.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示pokemon組比NC組經(jīng)過(guò)8h、32h后細(xì)胞遷移的距離無(wú)明顯變化,表明pokemon基因?qū)CF-7細(xì)胞遷移能力無(wú)明顯影響。第二部分:1.pokemon蛋白在乳腺癌中的表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織(P0.05)。2.pokemon蛋白高表達(dá)和乳腺癌組織類(lèi)型相關(guān),其在乳腺導(dǎo)管癌中的表達(dá)高于乳腺小葉癌(P0.05),但和發(fā)病年齡、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、細(xì)胞核分級(jí)無(wú)關(guān)(P0.05)。結(jié)論:1.pokemon可抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的侵襲能力2.pokemon蛋白在乳腺癌組織中存在高表達(dá),其在乳腺導(dǎo)管癌中的表達(dá)高于乳腺小葉癌
【關(guān)鍵詞】：pokemon 慢病毒載體 MCF-7細(xì)胞 細(xì)胞侵襲能力
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 主要縮略詞及英文索引12-13
• 前言13-15
• 第一部分 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容15-29
• 1.材料與方法15-23
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-29
• 第二部分 乳腺癌中Pokemon的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系29-35
• 1.材料與方法29-31
• 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 綜述45-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附錄57-59
• 致謝59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Xinkai Zhao;Qiaoming Ning;Xiaoning Sun;De'an Tian;;Pokemon reduces Bcl-2 expression through NF-κ Bp65:a possible mechanism of hepatocellular carcinoma[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2011年06期

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本文編號(hào)：758001