本文關(guān)鍵詞：miR-503在食管鱗癌中的表達及臨床意義

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【摘要】：目的:檢測miR-503在食管鱗癌組織標(biāo)本及食管鱗癌患者血清中的表達情況,分析miR-503與食管鱗癌病理特征的相關(guān)性;探索miR-503在食管鱗癌細胞Eca109、Eca9706中的生物學(xué)功能的影響及其作用機制。方法:1、收集2014年3月至2014年9月在四川醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院胸心外科手術(shù)切除的新鮮食管鱗癌及癌旁組織40例;2、采用Taqman探針法分析miR-503在癌組織、癌旁組織的表達情況;3、依據(jù)miR-503表達水平,運用t檢驗分析及單因素方差分析其與食管鱗癌患者的性別、年齡、腫瘤分化程度、T分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性;4、體外合成 miR-503 mimics 和 miR-503 inhibitor,用 miRNA 轉(zhuǎn)染人食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706;5、采用Taqman探針法檢測食管鱗癌細胞中miR-503表達水平變化;6、通過CCK-8試劑盒檢測Eca109、Eca9706細胞增殖能力的改變;7、Transwell侵襲實驗法檢測miR-503對食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706細胞的侵襲、遷移能力;8、利用流式細胞術(shù)分析miR-503對食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706細胞周期的影響;9、采用 Western Blot 方法檢測 Vimentin、E-cadherin、CyclinD1、CyclinE1蛋白在轉(zhuǎn)染miR-503mimics和NC組Eca109中的表達水平。10、統(tǒng)計學(xué)分析:所有實驗數(shù)據(jù)均使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包,所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間差異的比較使用獨立樣本均數(shù)t檢驗,多組樣本的均數(shù)比較采用單因素方差分析,以α=0.05為標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:1、Taqman探針法結(jié)果顯示,40例食管鱗癌組織中的miR-503的表達水平(6.69±1.04)顯著高于癌旁組織(1);2、通過t檢驗分析發(fā)現(xiàn)食管鱗癌組織中miR-503的表達水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、食管鱗癌分化程度及T分期呈負(fù)相關(guān)(P0.05),與患者的年齡、性別和腫瘤大小無相關(guān)性(P0.05);3、Taqman探針法結(jié)果顯示:與空白對照組相比,mimics組mi R-503的表達水平(180.33士3.13)顯著上調(diào)(P0.01);與空白對照組相比,inhibitor組的miR-503的相對表達水平(0.46±0.02)顯著下調(diào)(P0.01),表明轉(zhuǎn)染效率較好,符合后續(xù)試驗要求。4、CCK-8實驗結(jié)果顯示,在48 h、72 h時Eca109及Eca9706細胞的miR-503 mimics組OD值明顯少于NC組及control組細胞(P0.05),miR-503 inhibitor組OD值明顯高于NC組及control組細胞(P0.05)。這表明miR-503能抑制食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706細胞的增殖。5、Transwell實驗結(jié)果:在遷移實驗中,Eca9706細胞,miR-503 mimics組細胞數(shù)與NC組比較顯著減低(P0.05),inhibitor組細胞數(shù)與N C組比較顯著升高(P0.05),Eca109細胞也呈同樣的趨勢(P0.05),這表明miR-503有抑制食管鱗癌細胞株的遷移能力。在侵襲實驗中,Eca9706細胞,miR-503 mimics組細胞數(shù)與NC組比較顯著減低(P0.05),inhi bitor組細胞數(shù)與NC組比較顯著升高(P0.05),Eca109細胞也呈同樣的趨勢(P0.05),這表明miR-503有抑制食管鱗癌細胞株的侵襲能力。6、流式細胞檢測結(jié)果顯示,Eca109中miR-503 mimics組G0/G 1細胞比例增加至68.41±1.04%,S細胞比例降低至23.59士 1.58%,與對照組比較差異具有顯著性(P0.05),而G2/M期細胞比例沒有明顯變化;miR-503 inhibitor組G0/G1細胞比例降低至44.61 士 1.15%,S細胞比例增高至47.39±1.32%,與對照組比較差異具有顯著性(P0.05),而G2/M期細胞比例沒有明顯變化;在Eca9706細胞中也呈現(xiàn)同樣的結(jié)果趨勢,表明miR-503具有將食管鱗癌細胞Eca109、Eca9706阻滯在G1期的功能。7、Western Blot 結(jié)果表明:在 Eca109 中轉(zhuǎn)染 miR-503mimics 組細胞相對于NC組Vimentin表達降低,E-cadherin表達升高,Cycli nD1和CyclinE1蛋白的表達水平降低。這表明:miR-503能通過促進E-cadherin的表達及抑制Vimentin表達來調(diào)控食管鱗癌細胞株E ca109的侵襲和轉(zhuǎn)移,能通過抑制CyclinD1、CyclinE1的表達調(diào)節(jié)食管鱗癌細胞株Eca109的細胞增殖。結(jié)論:1、miR-503在食管鱗癌組織高表達,在癌旁組織中低表達;食管鱗癌組織中miR-503的表達水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、食管鱗癌分化程度及T分期呈負(fù)相關(guān),與患者的年齡、性別和腫瘤大小無相關(guān)性;2、上調(diào)食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706中miR-503表達能抑制食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706細胞的生長和侵襲,并促進其凋亡,下調(diào)食管鱗癌Eca109、Eca9706細胞中miR-503表達能促進食管鱗癌細胞株Eca109、Eca9706細胞的生長和侵襲;
【關(guān)鍵詞】：食管鱗癌 miR-503 臨床病理特征 靶基因
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1
【目錄】：

• 中文摘要3-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-39
• 討論39-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻48-56
• 英漢縮略詞對照表56-57
• 致謝57-58
• 食管鱗狀細胞癌中miRNAs的研究進展(綜述)58-76
• 參考文獻70-76

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