本文關(guān)鍵詞：漢防己甲素對HL-60細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶表達的影響

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【摘要】：目的:漢防己甲素(tetrandrine,Tet)是一種多作用點的抗癌癥傳統(tǒng)藥物,能經(jīng)由多種作用機理實行抗癌癥效應(yīng)。地西他濱(DAC)是一種被FDA批準(zhǔn)的特異性的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase,DNMT)抑制劑,已在治療MDS、MDS轉(zhuǎn)AML、老年AML等血液惡性疾病中發(fā)揮出較好的療效。本課題擬研究Tet單用及與DAC聯(lián)合應(yīng)用對HL-60細(xì)胞DNMT表達的影響,研究漢防己甲素是否能夠抑制DNMT及其抑制程度,給漢防己甲素的應(yīng)用提出新的抗癌癥可能機理。方法:1.MTT(四甲基偶氮唑藍)法檢測Tet單藥、DAC單藥、Tet與DAC聯(lián)合用藥后對HL-60細(xì)胞的生長抑制作用;2.流式細(xì)胞術(shù)檢測Tet、DAC單藥及聯(lián)合用藥后HL-60細(xì)胞的早期凋亡率;3.實時熒光定量PCR檢測Tet、DAC單藥及聯(lián)合用藥后HL-60細(xì)胞DNMT1、DNMT3B基因的表達量;4.蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測Tet、DAC單藥及聯(lián)合用藥后HL-60細(xì)胞DNMT1、DNMT3B蛋白的表達量。結(jié)果:1.MTT檢測HL-60細(xì)胞生長抑制結(jié)果顯示:隨著Tet、DAC藥物濃度的增加,Tet、DAC對HL-60細(xì)胞的生長抑制作用越來越明顯,相比于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,隨著Tet、DAC藥物作用時間的增加(0小時、24小時、48小時),Tet、DAC對HL-60細(xì)胞的生長抑制作用越來越明顯,相比于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,說明Tet、DAC對HL-60細(xì)胞生長抑制作用呈明顯的時間-劑量依賴關(guān)系;且2umol/L Tet與4umol/L DAC聯(lián)合作用于HL-60細(xì)胞后,增殖抑制率均明顯大于2umol/L Tet及4umol/L DAC單藥組,抑制作用更強(F=152.956,P=0.005)。2.流式細(xì)胞術(shù)測定HL-60的早凋率結(jié)果:2umol/L Tet作用于HL-60細(xì)胞的平均早期凋亡率為(9.2±0.16)%,4umol/L Tet作用于HL-60細(xì)胞的平均早期凋亡率為(12.3±0.20)%,說明Tet導(dǎo)致HL-60細(xì)胞凋亡有劑量依賴性,相比于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;2umol/L Tet與4umol/L DAC聯(lián)合用藥后平均早期凋亡率為(17.6±0.87)%,即聯(lián)合Tet與DAC后的促HL-60細(xì)胞早期凋亡效果更強(P0.05)。3.實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示:經(jīng)Tet 2 umol/L、4umol/L,DAC 4 umol/L處理HL-60細(xì)胞四十八小時后,細(xì)胞中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B的m RNA表達水平明顯下調(diào),相比于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Tet組F=21676.000,P=0.02),2 umol/L Tet與4 umol/L DAC聯(lián)合用藥組下降幅度明顯大于2umol/L Tet及4umol/L DAC單藥組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.01)。4.蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果示:與對照組相比,2 umol/L Tet和4 umol/L DAC單藥組分別作用于HL-60細(xì)胞48h后,各組細(xì)胞中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3B蛋白的表達下調(diào),聯(lián)合Tet與DAC用藥后下調(diào)更明顯,差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論:1.漢防己甲素可抑制HL-60細(xì)胞的生長增殖,與DAC聯(lián)合后作用更強,提示Tet有增敏DAC的作用;2.Tet可以降低DNMT1、DNMT3B m RNA及蛋白的表達量,與DAC聯(lián)合后作用更強。
【關(guān)鍵詞】：漢防己甲素 HL-60細(xì)胞 DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 地西他濱
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 1 材料和方法11-17
• 1.1 材料11
• 1.2 方法11-17
• 2 結(jié)果17-22
• 2.1 Tet對HL-60 細(xì)胞增殖的影響17-18
• 2.2 Tet對HL-60 早期凋亡的影響18-19
• 2.3 Tet對HL-60 細(xì)胞DNMT1、DNMT3B mRNA表達水平的影響19-20
• 2.4 Tet對HL-60 細(xì)胞DNMT1、DNMT3B蛋白表達的影響20-22
• 3 討論22-24
• 4 結(jié)論24-25
• 參考文獻25-27
• 綜述27-36
• 參考文獻33-36
• 致謝36-37
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果37-38
• 個人簡歷38

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 沈文靜;劉石磊;邱廣蓉;;zebularine調(diào)控卵巢癌A2780細(xì)胞RASSF1A基因再表達的研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

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本文編號：756350