本文關(guān)鍵詞：miR-191在人乳腺癌中的表達(dá)及其對乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響

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【摘要】：背景:mi RNAs是一種分子量較小,無法編碼蛋白的內(nèi)源性RNA,通過與其靶基因m RNA上的堿基互補(bǔ)結(jié)合,降解靶基因m RNA或阻礙靶基因m RNA的翻譯過程,來發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的作用。作為mi RNAs家族中的一員,mi R-191涉及許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程,但有關(guān)其在乳腺癌方面的表達(dá)以及對乳腺癌的生物學(xué)行為的影響的研究目前尚未有過多的報(bào)告。激素受體狀態(tài)是指雌激素受體及孕激素受體的表達(dá)狀態(tài),其在乳腺癌中的表達(dá)狀態(tài)會影響乳腺癌的預(yù)后及治療等方面。PLCD1是已經(jīng)明確的一種抑癌基因,對癌細(xì)胞的生長和侵襲都有抑制作用,其表達(dá)缺失或下調(diào)會促進(jìn)癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移等過程,而許多研究都發(fā)現(xiàn)PLCD1可能為mi R-191的靶點(diǎn)基因,其表達(dá)可能受到mi R-191表達(dá)的影響。為明確mi R-191在人乳腺癌細(xì)胞及正常乳腺上皮細(xì)胞之間的表達(dá)狀態(tài)及其對乳腺癌細(xì)胞生物行為的影響,我們選取了激素受體狀態(tài)不同的乳腺癌細(xì)胞株及正常上皮乳腺癌細(xì)胞株,檢測其表達(dá)是否有差異,篩選出高表達(dá)的細(xì)胞株,并利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染手段干擾其mi R-191的表達(dá),進(jìn)一步研究mi R-191對乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響及對其可能的靶基因PLCD1表達(dá)的影響。[目的]檢測mi R-191在人乳腺癌和正常乳腺上皮細(xì)胞之間的表達(dá)水平差異,探究其對乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲影響,研究其對靶基因PLCD1表達(dá)的影響。初步分析mi R-191在乳腺癌中表達(dá)情況及其在乳腺癌中的作用,為乳腺癌的診斷提供可能的腫瘤標(biāo)記物,為其治療提供可能的靶點(diǎn)。[方法]1)選取人乳腺癌細(xì)胞[MDA-MB-231株(雌激素受體陰性,ER-)、MCF-7(雌激素受體陽性,ER+)]和正常乳腺上皮細(xì)胞株(HBL-100),用real-time PCR法檢測三種細(xì)胞株中mi R-191表達(dá)水平的差異2)利用Lipofectamine2000將mi R-191inhibitor瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株中,并用real-time PCR檢測轉(zhuǎn)染效果和mi R-191的表達(dá)情況;3}利用CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染mi R-191inhibitor后MCF-7細(xì)胞的增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染mi R-191inhibitor后MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞周期變化;Transwell法檢測轉(zhuǎn)染mi R-191inhibitor后MCF-7的侵襲能力。4)Real-time PCR和Western blot法檢轉(zhuǎn)染mi R-191 inhibitor及mi mics后各組細(xì)胞PLCD1的m RNA和蛋白的表達(dá)。[結(jié)果]1)mi R-191在乳腺癌細(xì)胞(MCF-7,MDA-MB-231)中的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺上皮細(xì)胞(HBL-100)[P0.01],并且在ER(+)的乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)中表達(dá)水平高于ER(-)乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)[P0.01];2)轉(zhuǎn)染mi R-191 inhibitor后,與空白對照組相比,mi R-191表達(dá)水平明顯下調(diào),表明成功沉默mi R-191的表達(dá);3)轉(zhuǎn)染mi R-191 inhibitor后,MCF-7細(xì)胞增殖能力(0.65±0.04)較陰性對照組(1.18±0.05)明顯受到抑制(F=122.238,P0.01),侵襲能力(56.67±2.58)較陰性對照組(82.5±5.79)減弱(F=18.734,P0.01),G0/G1期的細(xì)胞比例(73.39±1.10)%較陰性對照組(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P0.01),S期細(xì)胞比例(20.9±1.17)%較陰性對照組(25.48±1.19)%減少(F=46.937,P0.01)。4)Real-time PCR及western blot檢測結(jié)果示:PLCD1在m RNA及蛋白水平表達(dá)隨mi R-191表達(dá)上調(diào)而下降,隨mi R-191表達(dá)下調(diào)而升高。[結(jié)論]mi R-191在人乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)高于正常上皮細(xì)胞,且在ER(+)乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)高于ER(-)乳腺癌細(xì)胞;轉(zhuǎn)染mi R-191抑制體后,MCF-7細(xì)胞增殖、侵襲能力明顯受到抑制,說明mi R-191對人乳腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲有促進(jìn)作用,其機(jī)制可能與mi R-191對PLCD1m RNA的降解有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 MCF-7 mi R-191 增殖 侵襲
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-10
• 前言10-13
• 第一部分、miR-191 在人乳腺癌中的表達(dá)水平差異13-21
• 一、實(shí)驗(yàn)材料及試劑13-14
• 二、實(shí)驗(yàn)方法14-17
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-19
• 四、討論19-21
• 第二部分、miR-191 對人乳腺癌細(xì)胞增殖、侵襲的影響21-29
• 一、實(shí)驗(yàn)材料及試劑21-22
• 二、實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-27
• 四、討論27-29
• 第三部分、Real-time PCR和western blot檢測轉(zhuǎn)染miR-191inhibitor及mimics后PLCD1mRNA及蛋白表達(dá)29-40
• 一、實(shí)驗(yàn)材料及試劑29-31
• 二、實(shí)驗(yàn)方法31-35
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-38
• 四、討論38-40
• 全文總結(jié)、不足與展望40-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 綜述47-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 符號說明53-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文54-55
• 致謝55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 冷弘;臧文巧;王濤;王媛媛;馬晶;趙國強(qiáng);;miR-451對食管癌EC9706細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲能力的影響[J];世界華人消化雜志;2012年15期

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本文編號：756069