本文關(guān)鍵詞：結(jié)腸癌干細(xì)胞抗原致敏的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的研究

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【摘要】：目的結(jié)腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一。目前，外科切除聯(lián)合化療和/或放射治療仍然是針對結(jié)腸癌的主要治療方法，但是仍有很高的腫瘤復(fù)發(fā)率。雖然輔助放化療能夠在一定程度上延長患者的生存期，但同時也伴隨著嚴(yán)重的副作用，因此急需發(fā)展更有效的治療結(jié)腸癌的策略。近年來，臨床前數(shù)據(jù)表明腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cell，CSC）起始了腫瘤的生長并且是腫瘤自我更新、分化、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移以及放化療耐受性的關(guān)鍵。根據(jù)腫瘤干細(xì)胞（CSC）理論，只有靶向清除CSC，才有可能治愈腫瘤。因此，本文以CD44為篩選標(biāo)志，從小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞系CT-26中分選出CD44+細(xì)胞作為小鼠結(jié)腸癌干細(xì)胞，探討CD44+CT-26細(xì)胞裂解物和總RNA致敏的樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）是否能誘導(dǎo)靶向腫瘤干細(xì)胞的抗腫瘤免疫應(yīng)答。 方法用免疫磁珠法分離獲得CD44+CT-26細(xì)胞，用含20ng/ml bFGF、20ng/mlEGF、2%B27的無血清DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)擴增。將CD44+CT-26的細(xì)胞裂解物或總RNA分別作為抗原負(fù)載小鼠骨髓來源的DC，獲得Pro-DC和RNA-DC疫苗，免疫接種有CD44+CT-26細(xì)胞的BALB/c小鼠，進行免疫保護實驗和免疫治療實驗，每2-3天測量腫瘤大小并觀察瘤體生長及小鼠存活情況。取小鼠的脾臟，體外檢測T細(xì)胞的細(xì)胞毒性以及IFN-γ分泌能力。 結(jié)果（1）免疫保護組：與PBS組和未致敏DC組相比，Pro-DC組和RNA-DC組的成瘤時間延遲且腫瘤生長緩慢，尤其是Pro-DC組在接種后第15天仍未長出腫瘤。Pro-DC組和RNA-DC組的腫瘤重量顯著低于對照組和未致敏DC組（P0.05）；生存周期分析發(fā)現(xiàn)，Pro-DC和RNA-DC組小鼠的生存期顯著長于PBS組和未致敏DC組（P0.05），第50天時未致敏DC組和PBS組小鼠已經(jīng)全部死亡，至第60天實驗結(jié)束時，Pro-DC組和RNA-DC組的生存率分別為60%和50%；Pro-DC和RNA-DC組CTL對CD44+CT-26的殺傷作用及細(xì)胞上清液中IFN-γ的分泌量顯著高于PBS組和未致敏DC組（P0.05）；另外，與RNA-DC相比，Pro-DC的免疫保護作用更加顯著（P0.05）。（2）免疫治療組：與PBS組和未致敏DC組相比，經(jīng)Pro-DC和RNA-DC治療后，腫瘤的生長受到了顯著的抑制。實驗結(jié)束時，Pro-DC組和RNA-DC組的腫瘤重量顯著低于對照組和未致敏DC組（P0.05）；Pro-DC和RNA-DC組小鼠的生存期顯著長于PBS組和未致敏DC組（P0.05），第50天時未致敏DC組和PBS組小鼠已經(jīng)全部死亡，至第60天實驗結(jié)束時，Pro-DC組和RNA-DC組的生存率分別為60%和10%；Pro-DC或RNA-DC組CTL對CD44+CT-26的殺傷作用以及細(xì)胞上清液中IFN-γ的分泌量顯著高于PBS組和未致敏DC組（P0.05）；另外，與RNA-DC相比，Pro-DC的免疫治療作用更加顯著（P0.05）。 結(jié)論（1）免疫保護組：Pro-DC和RNA-DC疫苗的免疫誘導(dǎo)機體產(chǎn)生了有效的免疫保護作用，能夠延緩腫瘤出現(xiàn)，抑制腫瘤的生長，并且顯著延長荷瘤小鼠的生存時間。另外，Pro-DC和RNA-DC誘導(dǎo)機體產(chǎn)生了特異性CTL，，對CT-26腫瘤干細(xì)胞有顯著的殺傷作用，同時分泌較高水平的IFN-γ。并且與RNA-DC相比，Pro-DC的免疫保護作用更加顯著。（2）免疫治療組：Pro-DC和RNA-DC能夠誘導(dǎo)有效的抗腫瘤免疫，且Pro-DC的免疫治療效果優(yōu)于RNA-DC。綜上所述，CT-26腫瘤干細(xì)胞裂解物或總RNA負(fù)載的DC能夠誘導(dǎo)靶向結(jié)腸癌干細(xì)胞的免疫應(yīng)答，這為以結(jié)腸癌干細(xì)胞為靶向的DC疫苗的研究提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：樹突狀細(xì)胞 腫瘤干細(xì)胞 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 結(jié)腸癌 免疫治療
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.35
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 第1章 緒論12-26
• 1.1 結(jié)腸癌的簡介12
• 1.2 腫瘤干細(xì)胞12-15
• 1.2.1 腫瘤干細(xì)胞理論12-13
• 1.2.2 靶向腫瘤干細(xì)胞的治療13-15
• 1.3 結(jié)腸癌干細(xì)胞15-17
• 1.3.1 結(jié)腸癌干細(xì)胞的分選15-16
• 1.3.2 結(jié)腸癌干細(xì)胞的鑒定16-17
• 1.4 DC 的簡介17-21
• 1.4.1 DC 的體內(nèi)分布及來源17-18
• 1.4.2 DC 在免疫應(yīng)答中的作用18-20
• 1.4.3 不同細(xì)胞因子對DC體外培養(yǎng)的作用20-21
• 1.4.4 DC 與腫瘤的關(guān)系21
• 1.5 DC 腫瘤疫苗21-26
• 1.5.1 腫瘤疫苗的生物學(xué)特點21-22
• 1.5.2 以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗22-24
• 1.5.3 DC 腫瘤疫苗的臨床應(yīng)用24
• 1.5.4 DC 腫瘤疫苗的安全性24-26
• 第2章 材料與方法26-30
• 2.1 研究對象26
• 2.1.1 細(xì)胞系26
• 2.1.2 實驗動物26
• 2.2 主要儀器26-27
• 2.3 主要試劑27-28
• 2.4 主要試劑配制28-30
• 第3章 實驗方法30-37
• 3.1 小鼠結(jié)腸癌干細(xì)胞的分離培養(yǎng)30-32
• 3.1.1 免疫磁珠法篩選結(jié)腸癌干細(xì)胞30-31
• 3.1.2 結(jié)腸癌干細(xì)胞的培養(yǎng)31
• 3.1.3 結(jié)腸癌干細(xì)胞的鑒定31-32
• 3.2 結(jié)腸癌干細(xì)胞抗原的制備32-33
• 3.2.1 反復(fù)凍融法獲得結(jié)腸癌干細(xì)胞完全抗原32
• 3.2.2 結(jié)腸癌干細(xì)胞總RNA的提取32-33
• 3.3 樹突狀細(xì)胞（DC）疫苗的制備33
• 3.3.1 DC 的分離培養(yǎng)33
• 3.3.2 DC 疫苗的制備33
• 3.4 負(fù)載結(jié)腸癌干細(xì)胞抗原的 DC 疫苗的免疫保護實驗33-34
• 3.5 負(fù)載結(jié)腸癌干細(xì)胞抗原的 DC 疫苗的免疫治療實驗34
• 3.6 CTL對結(jié)腸癌干細(xì)胞的殺傷作用34-36
• 3.6.1 T 淋巴細(xì)胞的分離培養(yǎng)34-35
• 3.6.2 CTL 對結(jié)腸癌干細(xì)胞的殺傷作用35
• 3.6.3 IFN-γ的檢測35-36
• 3.7 統(tǒng)計學(xué)分析36-37
• 第4章 實驗結(jié)果37-49
• 4.1 小鼠結(jié)腸癌干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定37-39
• 4.1.1 小鼠結(jié)腸癌干細(xì)胞的分離培養(yǎng)37
• 4.1.2 小鼠結(jié)腸癌干細(xì)胞的鑒定37-39
• 4.2 DC 的分離培養(yǎng)39
• 4.3 小鼠腫瘤干細(xì)胞抗原致敏的 DC 誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫保護作用39-44
• 4.3.1 小鼠腫瘤的生長情況39-41
• 4.3.2 小鼠的生存時間41-42
• 4.3.3 CTL 對結(jié)腸癌干細(xì)胞的殺傷作用42-43
• 4.3.4 CTL的IFN-γ分泌43-44
• 4.4 小鼠腫瘤干細(xì)胞抗原致敏的 DC 誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫治療作用44-49
• 4.4.1 小鼠腫瘤的生長情況44-46
• 4.4.2 小鼠的生存時間46
• 4.4.3 CTL 對結(jié)腸癌干細(xì)胞的殺傷作用46-47
• 4.4.4 CTL 的 IFN-γ分泌47-49
• 第5章 討論49-52
• 第6章 結(jié)論52-53
• 參考文獻53-62
• 作者簡介及攻讀學(xué)位期間發(fā)表研究成果62-63
• 致謝63

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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本文編號：755563