本文關(guān)鍵詞：乳腺癌中MTH1的表達(dá)分析及影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景:以往的研究已證實(shí)MTH1可以修復(fù)活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)造成的損傷,在多種腫瘤細(xì)胞中具有較高水平,但是否存在于乳腺癌細(xì)胞并對其生物學(xué)行為產(chǎn)生影響,尚沒有具體的研究。研究目的:本研究首先探討MTH1在不同惡性程度的乳腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。隨后探究MTH1對于乳腺癌細(xì)胞包括遷移能力、侵襲能力以及增殖能力在內(nèi)的生物學(xué)行為的影響。最后分析MTH1對乳腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial to mesenchymal transition,EMT)的作用。研究方法:本研究首先利用Western Blot、Real-time PCR等方法,探究MTH1在乳腺癌不同惡性程度細(xì)胞系中的表達(dá)情況,篩選出MTH1高表達(dá)與低表達(dá)的細(xì)胞系。隨后構(gòu)建MTH1過表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染MTH1低表達(dá)細(xì)胞系,并結(jié)合si RNA轉(zhuǎn)染MTH1高表達(dá)細(xì)胞系,通過MTT比色法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Edu細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)以及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析MTH1對于乳腺癌細(xì)胞增值能力、遷移能力和侵襲能力等生物學(xué)行為的影響。最后通過Western Blot和免疫熒光等實(shí)驗(yàn)方法探討MTH1對乳腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的作用。研究結(jié)果:通過研究發(fā)現(xiàn)MTH1在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平要明顯高于其在正常乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá),并且隨著乳腺癌細(xì)胞系惡性程度的提高表達(dá)水平呈上升趨勢。通過轉(zhuǎn)染MTH1過表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)入MCF-7(MTH1低表達(dá)細(xì)胞系)提高M(jìn)TH1的表達(dá)水平和轉(zhuǎn)染siRNA進(jìn)入MDA-MB-231(MTH1高表達(dá)細(xì)胞系)抑制MTH1的表達(dá),從正方兩方面證明MTH1的表達(dá)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移和增值能力,從而提高乳腺癌的生物學(xué)惡性程度。除此之外,MTH1還可以上調(diào)間質(zhì)標(biāo)志蛋白N-cadherin和Vimentin,下調(diào)上皮標(biāo)志蛋白E-cadherin和cytokeratin,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。研究結(jié)論:MTH1在乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá),并且表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞惡性程度成正相關(guān)。此外,MTH1還可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移運(yùn)動、增殖以及發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。因此MTH1是一種促進(jìn)乳腺腫瘤發(fā)生并提高其生物學(xué)惡性程度的物質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：MTH1 乳腺癌 遷移 增殖 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、MTH1在乳腺癌中高表達(dá)14-25
• 1.1 對象和方法14-21
• 1.1.1 細(xì)胞系14
• 1.1.2 抗體與試劑14-15
• 1.1.3 耗材與儀器設(shè)備15-16
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)所需試劑的配置16-18
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)步驟18-21
• 1.2 結(jié)果21-23
• 1.2.1 MTH1在乳腺癌中的表達(dá)水平升高21-22
• 1.2.2 MTH1在不同乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)水平不同22-23
• 1.3 討論23-24
• 1.3.1 MTH1在乳腺癌中的表達(dá)水平升高23
• 1.3.2 MTH1在不同乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)水平不同23-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 二、MTH1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖與遷移25-47
• 2.1 對象和方法25-38
• 2.1.1 細(xì)胞系25
• 2.1.2 抗體與試劑25-26
• 2.1.3 耗材與儀器設(shè)備26-27
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需試劑的配置27-28
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)步驟28-38
• 2.2 結(jié)果38-45
• 2.2.1 提高M(jìn)TH1的表達(dá)水平可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移38-42
• 2.2.2 降低MTH1的表達(dá)水平可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移42-45
• 2.3 討論45-46
• 2.4 小結(jié)46-47
• 三、MTH1誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT47-52
• 3.1 對象和方法47-49
• 3.1.1 細(xì)胞系47
• 3.1.2 抗體與試劑47
• 3.1.3 耗材與儀器設(shè)備47
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)所需試劑的配置47-48
• 3.1.5 實(shí)驗(yàn)步驟48-49
• 3.2 結(jié)果49-50
• 3.3 討論50-51
• 3.4 小結(jié)51-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明56-57
• 綜述 MTH1在腫瘤形成及生存中的作用57-66
• 綜述參考文獻(xiàn)62-66
• 致謝66-67
• 個人簡歷67

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本文編號：753562