本文關(guān)鍵詞：乳腺癌患者圍化療期免疫功能動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)

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【摘要】：目的：探討乳腺癌患者圍化療期免疫功能狀態(tài),為乳腺癌患者化療聯(lián)合生物免疫治療的臨床工作提供理論依據(jù)。方法：通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)乳腺癌患者化療前1天、化療后第3天和第5天外周血來(lái)源的CIK細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況,在培養(yǎng)的21天內(nèi),其增殖能力、對(duì)K562的細(xì)胞毒活性、細(xì)胞表型和細(xì)胞因子的水平。用淋巴細(xì)胞分離液分離出乳腺癌患者化療前1天、乳腺癌患者化療后第3天和第5天外周血樣本中的外周血單個(gè)核細(xì)胞,培養(yǎng)在RPMI-1640培養(yǎng)基(含10%FBS),添加IFN-γ,24小時(shí)后添加anti-CD3單克隆抗體(克隆號(hào)：OKT3)和IL-2,以后每2-3天添加RPMI-1640培養(yǎng)基和IL-2。分別在培養(yǎng)的第0、7、14、21天觀察CIK細(xì)胞形態(tài)的變化,用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞量繪制增殖曲線；設(shè)3種效靶比：16：1、8：1、4：1,用MTS檢測(cè)CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性；用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞、CD3+CD56+T細(xì)胞亞群的比值；用ELISA檢測(cè)TNF-α的分泌水平以及所有樣本血漿中IL-2、IFN-γ和TNF-α的濃度。同時(shí)用健康人外周血和臍血作為對(duì)比,比較不同來(lái)源的樣本各項(xiàng)免疫指標(biāo)的差異。采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：1、培養(yǎng)21天后五種來(lái)源的CIK細(xì)胞增殖倍數(shù)分別是：乳腺癌患者化療前1天外周血(118.01±30.49)、乳腺癌患者化療后第3天外周血(36.15±23.45)、乳腺癌患者化療后第5天外周血(28.62±14.62)、健康人外周血(187.59±29.84)和臍血(279.07±33.19),乳腺癌患者化療抑制自體來(lái)源的CIK細(xì)胞增殖,乳腺癌患者化療前1天、乳腺癌患者化療后第3天和第5天的樣本與健康人樣本相比具有顯著性差異(P0.001),乳腺癌患者化療后第3天和第5天的樣本與乳腺癌患者化療前1天樣本相比也具有顯著性差異(P0.001),但在CIK細(xì)胞形態(tài)上并沒(méi)有明顯不同。2、五種來(lái)源的CIK細(xì)胞毒性隨培養(yǎng)天數(shù)的變化趨勢(shì)相似,在培養(yǎng)第7天檢測(cè)到CIK細(xì)胞毒活性最強(qiáng),培養(yǎng)第14、21天其細(xì)胞毒活性有所降低,但要高于新鮮分離的PBMC的細(xì)胞毒活性,CIK細(xì)胞培養(yǎng)到第7、14、21天的細(xì)胞毒活性顯示乳腺癌患者化療后第3天和第5天的樣本較弱。3、五種來(lái)源的CIK細(xì)胞在培養(yǎng)的21天內(nèi),它們CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD56+的表型隨培養(yǎng)時(shí)間的變化趨勢(shì)是一致的,培養(yǎng)至21天時(shí)乳腺癌患者化療后第3天和第5天樣本與健康人樣本相比沒(méi)有顯著性差異。4、五種來(lái)源血漿中IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平比較,乳腺癌患者化療前1天、乳腺癌患者化療后第3天和第5天收集的血漿中IL-2、TFN-α和TNF-α的水平均低于健康人和臍血的樣本,乳腺癌患者化療前1天、乳腺癌患者化療后第3天和第5天樣本與健康人樣本相比有顯著性差異(P0.001)。5、五種來(lái)源CIK細(xì)胞在培養(yǎng)的第7、14和21天分泌TNF-α的水平比較,乳腺癌患者化療前1天、乳腺癌患者化療后第3天和第5天外周血來(lái)源的CIK細(xì)胞培養(yǎng)液上清中TNF-α的水平均低于健康人和臍血的樣本,乳腺癌患者化療前1天、乳腺癌患者化療后第3天和第5天樣本與健康人樣本相比有顯著性差異(P0.001)。結(jié)論：1、化療后乳腺癌患者分泌IL-2、TFN-γ和TNF-α的功能以及自體來(lái)源的CIK細(xì)胞的增殖、細(xì)胞毒活性和分泌TNF-α的功能受到嚴(yán)重抑制。2、五種來(lái)源的CIK細(xì)胞其增殖、細(xì)胞毒活性、細(xì)胞表型和分泌的TNF-α隨培養(yǎng)天數(shù)變化的趨勢(shì)是一致的。3、乳腺癌患者化療并不會(huì)影響自體來(lái)源的CIK細(xì)胞CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD56+的表型的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 化療 免疫功能 CIK細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-16
• 縮略詞16-18
• 第一章 緒論18-33
• 1.1 乳腺癌的發(fā)病率18-19
• 1.2 乳腺癌的治療19-23
• 1.2.1 外科手術(shù)19
• 1.2.2 放射治療19
• 1.2.3 系統(tǒng)治療19-23
• 1.2.3.1 化療20-22
• 1.2.3.2 激素治療22
• 1.2.3.3 靶向治療22-23
• 1.2.3.3.1 HER2靶向治療22
• 1.2.3.3.2 其它靶向藥物22-23
• 1.3 化療的毒副作用23-26
• 1.3.1 免疫抑制23-25
• 1.3.1.1 T細(xì)胞的腫瘤免疫作用24
• 1.3.1.2 CD4~+T淋巴細(xì)胞和CD8~+T淋巴細(xì)胞功能24-25
• 1.3.2 化療后CD4~+T淋巴細(xì)胞和CD8~+T淋巴細(xì)胞的變化25-26
• 1.4 CIK細(xì)胞治療26-30
• 1.4.1 CIK細(xì)胞的免疫表型27
• 1.4.2 CIK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子27-29
• 1.4.2.1 IL-228
• 1.4.2.2 IFN-γ28-29
• 1.4.2.3 TNF-α29
• 1.4.3 CIK細(xì)胞免疫功能相關(guān)的基因表達(dá)29-30
• 1.4.4 CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性30
• 1.5 乳腺癌化療聯(lián)合CIK細(xì)胞治療30-31
• 1.6 研究目的、內(nèi)容及意義31-33
• 1.6.1 研究目的31
• 1.6.2 研究?jī)?nèi)容31-32
• 1.6.3 研究意義32-33
• 第二章 材料與方法33-59
• 2.1 材料33-41
• 2.1.1 細(xì)胞33
• 2.1.2 耗材33-34
• 2.1.3 試劑34-35
• 2.1.4 主要試劑的配制35-40
• 2.1.4.1 RPMI-1640培養(yǎng)基的配制：1L35-37
• 2.1.4.2 胎牛血清的滅活37
• 2.1.4.3 完全培養(yǎng)基(含10%FBS)的配制37
• 2.1.4.4 緩沖液1×PBS的配制：1L37-38
• 2.1.4.5 緩沖液1×DPBS的配制：1L38-39
• 2.1.4.6 MTT工作液的配制：100ml39
• 2.1.4.7 MTS工作液的配制：21ml39
• 2.1.4.8 PMS工作液的配制：1ml39
• 2.1.4.9 CIK培養(yǎng)用細(xì)胞因子初濃度配制39-40
• 2.1.5 主要實(shí)驗(yàn)儀器40-41
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法41-59
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)41-45
• 2.2.2 外周血(臍血)單個(gè)核細(xì)胞的分離45-48
• 2.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)48-49
• 2.2.4 CIK細(xì)胞的培養(yǎng)49-51
• 2.2.5 CIK增殖曲線51
• 2.2.6 MTS檢測(cè)CIK細(xì)胞毒活性51-53
• 2.2.7 CIK細(xì)胞表型檢測(cè)53-55
• 2.2.8 ELISA實(shí)驗(yàn)55-58
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析58-59
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-76
• 3.1 CIK細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)59-62
• 3.2 CIK細(xì)胞增殖曲線62-64
• 3.3 MTS法比較五種來(lái)源CIK細(xì)胞毒活性64-68
• 3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)五種來(lái)源CIK細(xì)胞表型68-73
• 3.4.1 CD3~+的表達(dá)68-69
• 3.4.2 CD3~+CD4~+的表達(dá)69-70
• 3.4.3 CD3~+CD8~+的表達(dá)70-72
• 3.4.4 CD3~+CD56~+的表達(dá)72-73
• 3.5 ELISA法檢測(cè)五種來(lái)源血漿中IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平73-74
• 3.6 ELISA法檢測(cè)五種來(lái)源CIK細(xì)胞分泌TNF-α的水平74-76
• 第四章 討論76-80
• 第五章 結(jié)論80-81
• 第六章 總結(jié)與展望81-82
• 致謝82-84
• 參考文獻(xiàn)84-94
• 附錄一 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄94-95
• 附錄二 樣本信息95-96

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