本文關(guān)鍵詞：胃癌手術(shù)前后血清miRNA差異研究

  更多相關(guān)文章： 胃癌 血清miRNA 腫瘤分子標(biāo)志物 qRT-PCR 靶基因

【摘要】：目的:篩選胃癌患者手術(shù)治療前后差異表達(dá)血清miRNA,這些血清miRNA有望成為評(píng)價(jià)胃癌療效、監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)、預(yù)測(cè)預(yù)后的標(biāo)志物。方法1.對(duì)6例胃癌患者手術(shù)治療前后血清進(jìn)行等體積混合,然后采用高通量微陣列芯片技術(shù)對(duì)混合血清中miRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析,進(jìn)行一次生物學(xué)重復(fù),篩選出擴(kuò)增效率好、表達(dá)差異大、差異穩(wěn)定的血清miRNA。2.采用qRT-PCR技術(shù)對(duì)初篩差異表達(dá)血清miRNA在另外55例胃癌患者配對(duì)手術(shù)治療前后血清中進(jìn)行驗(yàn)證,分析結(jié)果的穩(wěn)定性和差異的可重復(fù)性,二次篩選出差異顯著的血清miRNA。3.擴(kuò)大樣本(包括健康人群、胃癌患者及其他常見(jiàn)腫瘤患者血清),采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)差異miRNA在這些血清樣本中的表達(dá)情況,驗(yàn)證其作為胃癌診斷標(biāo)志物的可能性。4.結(jié)合臨床病理資料,分析其對(duì)療效的評(píng)價(jià)作用及與胃癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系;通過(guò)隨訪,分析其在監(jiān)測(cè)胃癌復(fù)發(fā)、預(yù)測(cè)預(yù)后中的作用及效率。5.通過(guò)相關(guān)生物信息學(xué)軟件對(duì)差異血清miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)并查找靶基因所涉及的相關(guān)信號(hào)通路,分析其作用胃癌發(fā)生發(fā)展的可能分子機(jī)制。結(jié)果1.高通量微陣列芯片結(jié)果顯示:胃癌患者手術(shù)治療前后血清中差異表達(dá)顯著、擴(kuò)增效率較好的miRNA有22個(gè)。2.采用qRT-PCR對(duì)這22個(gè)miRNA在15例手術(shù)前后胃癌血清樣本中進(jìn)行初次驗(yàn)證,得出12個(gè)穩(wěn)定性和重復(fù)性較好的血清miRNA,結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,結(jié)果顯示:hsa-miR-20a-5p(miR-20a),hsa-let-7d-5p(let-7d)和hsa-let-7g-5p(let-7g)在胃癌患者手術(shù)前后血清中差異表達(dá)顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.繼續(xù)采用qRT-PCR技術(shù)對(duì)miR-20a,let-7d和let-7g在余下的40例配對(duì)胃癌手術(shù)前后血清樣本中進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示這3個(gè)miRNA在所驗(yàn)證的55例胃癌手術(shù)前后血清樣本中差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),綜合分析后發(fā)現(xiàn)miR-20a在胃癌血清樣本中易檢測(cè)且手術(shù)前后變化差異最大,所以最終確定miR-20a為目的miRNA。4.擴(kuò)大樣本,采用qRT-PCR檢測(cè)健康人群、胃癌(術(shù)前)、鼻咽癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌患者血清樣本中miR-20a的表達(dá)情況,結(jié)果顯示:胃癌、鼻咽癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌患者血清中miR-20a水平顯著高于健康對(duì)照組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.分析miR-20a表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系,結(jié)果顯示:miR-20a表達(dá)與患者年齡、腫瘤分期、腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05);Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示miR-20a低表達(dá)組總生存率明顯高于高表達(dá)組(P0.05)。6.在線生物信息學(xué)軟件(Target Scan、miRanda、Pic Tar)共同預(yù)測(cè)到的miR-20a靶基因有3個(gè),分別為Zinc finger protein 367(ZNF367)、AT rich interactive domain 4B(ARID4B)、cofilin2(CFL2),其所涉及的相關(guān)信號(hào)通路主要包括MAPK、Calcium、Toll-like receptor。結(jié)論1.胃癌患者血清中miR-20a水平在術(shù)后顯著下降;2.胃癌患者血清中miR-20a水平高于正常人群,且其表達(dá)與胃癌患者年齡、腫瘤分期、腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān);3.MiR-20a低表達(dá)組生存時(shí)間顯著高于高表達(dá)組。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 血清miRNA 腫瘤分子標(biāo)志物 qRT-PCR 靶基因
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-14
• 第1章 緒論14-20
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料20-26
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器20
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及材料20-22
• 2.3 溶液的配制22-26
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法26-36
• 3.1 血液樣本的收集26
• 3.2 血清總RNA的提取、純化26-28
• 3.3 逆轉(zhuǎn)錄28-29
• 3.4 高通量芯片檢測(cè)胃癌患者手術(shù)前后血清miRNA表達(dá)譜29
• 3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)29-31
• 3.6 引物的設(shè)計(jì)與合成31-33
• 3.7 數(shù)據(jù)篩選與統(tǒng)計(jì)分析33-36
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-48
• 4.1 高通量微陣列芯片檢測(cè)胃癌手術(shù)前后血清差異miRNA36-39
• 4.2 運(yùn)用qRT-PCR對(duì)初篩差異表達(dá)miRNA進(jìn)行驗(yàn)證39-41
• 4.3 擴(kuò)大樣本，對(duì)以上3個(gè)miRNA進(jìn)一步驗(yàn)證41-42
• 4.4 miR-20a、let-7d和let-7g表達(dá)情況分析42-43
• 4.5 在正常人群和其它常見(jiàn)腫瘤中檢測(cè)miR-20a的表達(dá)43
• 4.6 探討miR-20a表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系43-45
• 4.7 血清miR-20a表達(dá)與胃癌患者臨床預(yù)后45-46
• 4.8 MiR-20a靶基因預(yù)測(cè)46-48
• 第5章 討論48-56
• 5.1 胃癌臨床診斷及治療的研究現(xiàn)狀48-49
• 5.2 胃癌診斷標(biāo)志物研究49-50
• 5.3 MiR-20a作為胃癌血清分子標(biāo)志物的潛力50-53
• 5.4 循環(huán)miRNA檢測(cè)所面臨的問(wèn)題53-54
• 5.5 本實(shí)驗(yàn)研究克服的問(wèn)題及具有的優(yōu)勢(shì)54-55
• 5.6 展望55-56
• 第6章 結(jié)論56-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 文獻(xiàn)綜述 循環(huán)MicroRNA在胃癌中的研究進(jìn)展66-76
• 參考文獻(xiàn)71-76
• 作者攻讀碩士學(xué)位期間的科研成果76-78
• 致謝78-79

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