發(fā)布時間：2017-08-28 18:51

  本文關鍵詞：PPAPDC1A在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制

  更多相關文章： 磷脂酸磷酸酶2域1A基因 粘著斑激酶基因 乳腺癌 增殖 侵襲

【摘要】：背景乳腺癌發(fā)病率占女性惡性腫瘤的首位,轉移是引起乳腺癌患者死亡的主要原因。磷脂酸磷酸酶2域1A(phosphatidic acid phosphatase type 2 domain containing 1A,PPAPDC1A)是磷脂酸磷酸酶家族的重要成員之一,主要功能是引起底物的去磷酸化而參與細胞的增生、運動等,可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關。已有的研究僅為通過基因表達譜芯片分析發(fā)現(xiàn),PPAPDC1A是正常乳腺組織和乳腺癌組織間的一個差異表達基因,未見深入研究的相關報道。本課題組利用基因表達匯編(gene expression omnibus,GEO)公共數(shù)據(jù)庫驗證了上述結果,PPAPDC1A是否與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關及調控機制尚不清楚。目的本研究從細胞和組織水平分析PPAPDC1A在正常乳腺和乳腺癌中的表達情況,通過體外實驗,研究PPAPDC1A對乳腺癌細胞增殖、轉移和侵襲的影響及相關的分子機制,試圖闡明PPAPDC1A在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制。方法1.通過實時熒光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)和Western blotting方法檢測PPAPDC1A在正常乳腺上皮細胞HBL-100、低轉移乳腺癌MCF-7細胞、高轉移乳腺癌MDA-MB-231細胞和MDA-MB-435S細胞中的表達。2.通過免疫組化(immunohistochemistry,IHC)方法檢測PPAPDC1A在正常乳腺組織、乳腺纖維腺瘤、乳腺癌組織中的表達。3.轉染PPAPDC1A重組表達質粒和靶向si RNA,通過Western blotting方法檢測乳腺癌細胞中PPAPDC1A蛋白的表達;通過CCK-8實驗檢測乳腺癌細胞增殖情況;通過劃痕、Transwell實驗檢測乳腺癌細胞遷移、侵襲能力的變化。4.利用GEO公共數(shù)據(jù)庫,通過基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)的方法分析乳腺癌中PPAPDC1A高表達組中上調的信號通路。5.通過Western blotting、免疫熒光共定位和免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)實驗檢測PPAPDC1A和FAK之間相互作用情況。結果1.q PCR和Western blotting結果均顯示:3種不同轉移能力的乳腺癌細胞中PPAPDC1A m RNA和蛋白表達水平均顯著高于正常乳腺上皮細胞(P0.01),且高轉移乳腺癌MDA-MB-231細胞和MDA-MB-435S細胞中PPAPDC1A m RNA和蛋白表達水平均顯著高于低轉移乳腺癌MCF-7細胞(P0.01)。2.IHC結果顯示:PPAPDC1A在正常乳腺、乳腺纖維腺瘤和乳腺癌組織中陽性表達率分別為11.36%、48.10%和77.08%。PPAPDC1A在乳腺纖維腺瘤(χ2=16.774,P0.01)和乳腺癌(χ2=53.001,P0.01)組織中陽性表達率均顯著高于正常乳腺組織,在乳腺癌組織中陽性表達率顯著高于乳腺纖維腺瘤組織(χ2=15.799,P0.01)。3.Western blotting結果顯示:MCF-7-PPAPDC1A細胞中PPAPDC1A的表達顯著高于MCF-7-vector細胞(P0.01)。轉染PPAPDC1A-si RNA的MDA-MB-231細胞和MDA-MB-435S細胞中PPAPDC1A的表達均顯著低于陰性對照組細胞(P0.01)。4.CCK-8結果顯示:MCF-7-PPAPDC1A細胞的生長速度較MCF-7-vector顯著增快(P0.01)。MDA-MB-231-si RNA2、MDA-MB-231-si RNA3和MDA-MB-435S-si RNA1、MDA-MB-435S-si RNA2的生長速度分別顯著低于陰性對照組細胞(P0.01)。5.細胞劃痕結果顯示:MCF-7-PPAPDC1A細胞的遷移速度較MCF-7-vector顯著增快。MDA-MB-231-si RNA2、MDA-MB-231-si RNA3和MDA-MB-435S-si RNA1、MDA-MB-435S-si RNA2細胞的遷移速度則分別顯著慢于陰性對照組細胞。6.Transwell遷移、侵襲結果均顯示:MCF-7-PPAPDC1A細胞中遷移、侵襲的細胞數(shù)量明顯多于MCF-7-vector細胞(P0.01)。MDA-MB-231-si RNA2、MDA-MB-231-si RNA3和MDA-MB-435S-si RNA1、MDA-MB-435S-si RNA2細胞中遷移、侵襲的細胞數(shù)量分別顯著少于陰性對照組細胞(P0.01)。7.GSEA結果顯示:Focal adhesion信號通路在PPAPDC1A高表達的乳腺癌中出現(xiàn)上調,且通路相關基因顯著富集(P0.05)。8.Western blotting結果顯示:轉染PPAPDC1A重組表達質粒和靶向PPAPDC1A-si RNA的乳腺癌細胞中FAK和PPAPDC1A蛋白的表達呈正相關關系。9.免疫熒光共定位結果顯示:在乳腺癌細胞MCF-7、MDA-MB-231和MDA-MB-435S中均存在PPAPDC1A和FAK的共定位,共定位于細胞膜和細胞質。10.Co-IP實驗結果顯示:PPAPDC1A和FAK蛋白之間存在相互作用。結論1.PPAPDC1A在乳腺癌中高表達,促進乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力,在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。2.FAK是PPAPDC1A在乳腺癌上述作用中的重要分子靶點。
【關鍵詞】：磷脂酸磷酸酶2域1A基因 粘著斑激酶基因 乳腺癌 增殖 侵襲
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 第一部分 從細胞和組織水平分析PPAPDC1A的表達15-30
• 1 材料與方法15-26
• 2 結果26-30
• 第二部分 PPAPDC1A對乳腺癌細胞增殖、遷移侵襲能力的影響30-43
• 1 材料與方法30-35
• 2 結果35-43
• 第三部分 PPAPDC1A調節(jié)乳腺癌細胞侵襲轉移的機制43-49
• 1 材料與方法43-45
• 2 結果45-49
• 討論49-53
• 結論53-54
• 參考文獻54-57
• 綜述：乳腺癌轉移相關基因的研究進展57-69
• 參考文獻64-69
• 附錄69-71
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況71-72
• 致謝72-73
• 個人簡歷73

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本文編號：748955