本文關鍵詞：miR-192和miR-204轉錄后水平調控HOTTIP影響肝細胞癌的生長

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【摘要】：肝細胞癌是世界上死亡率最高的癌癥之一,長鏈非編碼RNA HOTTIP是肝細胞癌的一個重要的原癌基因。然而,由HOTTIP的異常表達對HOTTIP在轉錄后水平和下游分子事件的調控作用仍未曾研究過。首先我們預測了靶向HOTTIP的miRNA,通過實時定量PCR確定了miR-192和miR-204可以在肝細胞癌細胞系HepG2口SMMC7721中抑制HOTTIP的表達。niR-192和miR-204在許多癌癥中都發(fā)揮著抑癌作用,在目前的研究中,我們確定了在肝細胞癌中miR-192和miR-204可通過AG02介導的RNA干涉途徑抑制HOTTIP的表達。通過雙熒光素酶報告基因實驗進一步確定miR-192和miR-204與H OTTIP之間的作用。同樣,在肝細胞癌組織中也發(fā)現這兩種miR-192和miR-204與HOTTIP存在負相關的關系。有趣的是,這三種非編碼RNA的異常調節(jié)與肝細胞癌病人的總生存時間有關。此外,miR-192、miR-204或HOTTIP siRNA轉錄后可以沉默HOTTIP進而抑制肝細胞癌細胞的生長。內源性抑制miR-192和miR-204可使HOTTIP表達上調,促進細胞生長。通過轉錄組測序我們確定了除靶基因HOXA13外的19個基因,如谷氨酰胺基因,為miR-192/-204-HOTTIP的下游靶基因。谷氨酰胺是癌細胞的一個重要的標志物,我們檢測到miR-192/204-HOTTIP可抑制谷氨酰胺的表達中斷肝細胞癌的谷氨酰胺代謝,阻礙細胞生長。實驗結果表明miR-192/-204-HOTTIP軸可能是肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的一條重要的分子通路。肝細胞癌臨床標本的數據表明,miR-192, miR-204和HOTTIP與肝細胞癌的預后相關,且具有潛在治療的作用。
【關鍵詞】：HOTTIP miR-192 miR-204 肝細胞癌 GLS 谷氨酰胺代謝
【學位授予單位】：北京化工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符號說明7-12
• 第一章 前言12-24
• 1.1 miRNA的研究進展12-17
• 1.1.1 miRNA概述12-13
• 1.1.2 miRNA的生物發(fā)生13-14
• 1.1.3 miRNA的調控14-15
• 1.1.4 miRNA與靶基因的分子機制15
• 1.1.5 miRNA與腫瘤15-16
• 1.1.6 miR-192和miR-204在腫瘤中的研究進展16-17
• 1.2 lncRNA的研究進展17-21
• 1.2.1 lncRNA概述17
• 1.2.2 lncRNA的生物學功能及其分子機制17-19
• 1.2.3 lncRNA與腫瘤19-21
• 1.2.4 HOTTIP簡介及其在腫瘤中的研究進展21
• 1.3 GLS簡介及其在腫瘤中的研究進展21-23
• 1.4 立題背景與研究意義23-24
• 第二章 實驗方法24-40
• 2.1 實驗材料24-30
• 2.1.1 細胞系24-25
• 2.1.2 實驗試劑25-26
• 2.1.3 實驗儀器26-27
• 2.1.4 實驗所需溶液27-28
• 2.1.5 引物和mimics28-30
• 2.2 實驗方法30-40
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)30
• 2.2.2 瞬時轉染30-31
• 2.2.3 提取RNA31-32
• 2.2.4 實時定量PCR檢測miRNA的轉染效率(polyA加尾法)32-33
• 2.2.5 實時定量PCR檢測mRNA的表達33-34
• 2.2.6 雙熒光素酶報告基因實驗34-35
• 2.2.7 細胞增殖實驗35
• 2.2.8 流式細胞術35-36
• 2.2.9 克隆形成實驗36-37
• 2.2.10 劃痕實驗37
• 2.2.11 亞細胞分離定位HOTTIP37-38
• 2.2.12 基因表達譜38
• 2.2.13 患者與組織分析38
• 2.2.14 裸鼠移植瘤模型實驗38-39
• 2.2.15 數據分析39-40
• 第三章 實驗結果40-62
• 3.1 生物信息學分析預測靶向HOTTIP的miRNA40-41
• 3.2 確定靶向HOTTIP的miRNA41-43
• 3.3 miR-192與miR-204在轉錄后水平調控HOTTIP43-45
• 3.4 miR-192與miR-204抑制肝細胞癌細胞增殖45-50
• 3.5 miR-192與miR-204可影響多個HOTTIP下游基因50-55
• 3.6 在肝癌組織中miR-192、miR-204與HOTTIP負相關55-58
• 3.7 在體內miR-192、miR-204可抑制肝細胞癌的生長58-62
• 第四章 結論62-64
• 參考文獻64-68
• 致謝68-70
• 研究成果及發(fā)表的學術論文70-72
• 作者和導師簡介72-73
• 附件73-74

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前7條

1 王少冰;王芳;;長鏈非編碼RNA PVT1對MDA-MB-231細胞增殖和侵襲能力的影響[J];發(fā)育醫(yī)學電子雜志;2013年04期

2 王少冰;孫樹漢;王芳;;胎肝特異性癌胚RNA——AK003710的篩選及功能研究[J];第二軍醫(yī)大學學報;2015年03期

3 LIU BoDu;SUN LiJuan;SONG ErWei;;Non-coding RNAs regulate tumor cell plasticity[J];Science China(Life Sciences);2013年10期

4 林夢潔;陳志強;尹凌帝;孫倩;劉博巽;孫明;德偉;劉志軍;;長鏈非編碼RNA HOTAIR對非小細胞肺癌遷移和侵襲能力的影響[J];臨床腫瘤學雜志;2014年08期

5 郭楊;馮帥帥;王昕;;lncRNAs調控表觀遺傳的研究進展[J];家畜生態(tài)學報;2015年07期

6 許馨;李美紅;王t，

本文編號：746881