本文關(guān)鍵詞：miR-192和miR-204轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控HOTTIP影響肝細(xì)胞癌的生長

  更多相關(guān)文章： HOTTIP miR-192 miR-204 肝細(xì)胞癌 GLS 谷氨酰胺代謝

【摘要】：肝細(xì)胞癌是世界上死亡率最高的癌癥之一,長鏈非編碼RNA HOTTIP是肝細(xì)胞癌的一個(gè)重要的原癌基因。然而,由HOTTIP的異常表達(dá)對(duì)HOTTIP在轉(zhuǎn)錄后水平和下游分子事件的調(diào)控作用仍未曾研究過。首先我們預(yù)測(cè)了靶向HOTTIP的miRNA,通過實(shí)時(shí)定量PCR確定了miR-192和miR-204可以在肝細(xì)胞癌細(xì)胞系HepG2口SMMC7721中抑制HOTTIP的表達(dá)。niR-192和miR-204在許多癌癥中都發(fā)揮著抑癌作用,在目前的研究中,我們確定了在肝細(xì)胞癌中miR-192和miR-204可通過AG02介導(dǎo)的RNA干涉途徑抑制HOTTIP的表達(dá)。通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)進(jìn)一步確定miR-192和miR-204與H OTTIP之間的作用。同樣,在肝細(xì)胞癌組織中也發(fā)現(xiàn)這兩種miR-192和miR-204與HOTTIP存在負(fù)相關(guān)的關(guān)系。有趣的是,這三種非編碼RNA的異常調(diào)節(jié)與肝細(xì)胞癌病人的總生存時(shí)間有關(guān)。此外,miR-192、miR-204或HOTTIP siRNA轉(zhuǎn)錄后可以沉默HOTTIP進(jìn)而抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞的生長。內(nèi)源性抑制miR-192和miR-204可使HOTTIP表達(dá)上調(diào),促進(jìn)細(xì)胞生長。通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序我們確定了除靶基因HOXA13外的19個(gè)基因,如谷氨酰胺基因,為miR-192/-204-HOTTIP的下游靶基因。谷氨酰胺是癌細(xì)胞的一個(gè)重要的標(biāo)志物,我們檢測(cè)到miR-192/204-HOTTIP可抑制谷氨酰胺的表達(dá)中斷肝細(xì)胞癌的谷氨酰胺代謝,阻礙細(xì)胞生長。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明miR-192/-204-HOTTIP軸可能是肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的一條重要的分子通路。肝細(xì)胞癌臨床標(biāo)本的數(shù)據(jù)表明,miR-192, miR-204和HOTTIP與肝細(xì)胞癌的預(yù)后相關(guān),且具有潛在治療的作用。
【關(guān)鍵詞】：HOTTIP miR-192 miR-204 肝細(xì)胞癌 GLS 谷氨酰胺代謝
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 符號(hào)說明7-12
• 第一章 前言12-24
• 1.1 miRNA的研究進(jìn)展12-17
• 1.1.1 miRNA概述12-13
• 1.1.2 miRNA的生物發(fā)生13-14
• 1.1.3 miRNA的調(diào)控14-15
• 1.1.4 miRNA與靶基因的分子機(jī)制15
• 1.1.5 miRNA與腫瘤15-16
• 1.1.6 miR-192和miR-204在腫瘤中的研究進(jìn)展16-17
• 1.2 lncRNA的研究進(jìn)展17-21
• 1.2.1 lncRNA概述17
• 1.2.2 lncRNA的生物學(xué)功能及其分子機(jī)制17-19
• 1.2.3 lncRNA與腫瘤19-21
• 1.2.4 HOTTIP簡(jiǎn)介及其在腫瘤中的研究進(jìn)展21
• 1.3 GLS簡(jiǎn)介及其在腫瘤中的研究進(jìn)展21-23
• 1.4 立題背景與研究意義23-24
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法24-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料24-30
• 2.1.1 細(xì)胞系24-25
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需溶液27-28
• 2.1.5 引物和mimics28-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法30-40
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)30
• 2.2.2 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染30-31
• 2.2.3 提取RNA31-32
• 2.2.4 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miRNA的轉(zhuǎn)染效率(polyA加尾法)32-33
• 2.2.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)mRNA的表達(dá)33-34
• 2.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)34-35
• 2.2.7 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)35
• 2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)35-36
• 2.2.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)36-37
• 2.2.10 劃痕實(shí)驗(yàn)37
• 2.2.11 亞細(xì)胞分離定位HOTTIP37-38
• 2.2.12 基因表達(dá)譜38
• 2.2.13 患者與組織分析38
• 2.2.14 裸鼠移植瘤模型實(shí)驗(yàn)38-39
• 2.2.15 數(shù)據(jù)分析39-40
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-62
• 3.1 生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)靶向HOTTIP的miRNA40-41
• 3.2 確定靶向HOTTIP的miRNA41-43
• 3.3 miR-192與miR-204在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控HOTTIP43-45
• 3.4 miR-192與miR-204抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞增殖45-50
• 3.5 miR-192與miR-204可影響多個(gè)HOTTIP下游基因50-55
• 3.6 在肝癌組織中miR-192、miR-204與HOTTIP負(fù)相關(guān)55-58
• 3.7 在體內(nèi)miR-192、miR-204可抑制肝細(xì)胞癌的生長58-62
• 第四章 結(jié)論62-64
• 參考文獻(xiàn)64-68
• 致謝68-70
• 研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文70-72
• 作者和導(dǎo)師簡(jiǎn)介72-73
• 附件73-74

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王少冰;王芳;;長鏈非編碼RNA PVT1對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響[J];發(fā)育醫(yī)學(xué)電子雜志;2013年04期

2 王少冰;孫樹漢;王芳;;胎肝特異性癌胚RNA——AK003710的篩選及功能研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2015年03期

3 LIU BoDu;SUN LiJuan;SONG ErWei;;Non-coding RNAs regulate tumor cell plasticity[J];Science China(Life Sciences);2013年10期

4 林夢(mèng)潔;陳志強(qiáng);尹凌帝;孫倩;劉博巽;孫明;德偉;劉志軍;;長鏈非編碼RNA HOTAIR對(duì)非小細(xì)胞肺癌遷移和侵襲能力的影響[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2014年08期

5 郭楊;馮帥帥;王昕;;lncRNAs調(diào)控表觀遺傳的研究進(jìn)展[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2015年07期

6 許馨;李美紅;王t，

本文編號(hào)：746881