本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-205靶向調(diào)控FRAT1抑制膠質(zhì)母細胞瘤惡性轉(zhuǎn)化進程的研究

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【摘要】：【目的】探討miR-205在膠質(zhì)母細胞瘤惡性轉(zhuǎn)化過程中的生物學(xué)功能和分子機制,為膠質(zhì)母細胞瘤的臨床診斷、治療和預(yù)后評估提供新的生物學(xué)標志物和新的分子治療靶點�！痉椒ā康谝徊糠�:1、通過實時熒光定量PCR檢測4種膠質(zhì)瘤細胞株(U251、A172、U-118和U-87)和正常膠質(zhì)細胞株HEB中miR-205的表達水平。2、miR-205模擬物瞬時轉(zhuǎn)染入U-87細胞,實時熒光定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后細胞中miR-205的表達水平。3、MTT法檢測過表達miR-205的U-87細胞增殖能力的改變。4、流式細胞術(shù)檢測過表達mi R-205的U-87細胞凋亡水平的改變。5、劃痕實驗檢測過表達miR-205的U-87細胞遷移能力的改變。6、Transwell實驗檢測過表達miR-205的U-87細胞侵襲能力的改變。第二部分:1、采用microRNA靶基因預(yù)測軟件預(yù)測膠質(zhì)母細胞瘤中miR-205的候選靶基因。2、采用實時熒光定量PCR和Western Blot法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度miR-205模擬物后U-87細胞中候選靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平表達情況。3、采用熒光素酶雙報告基因系統(tǒng)檢測miR-205對候選靶基因FRAT1的3’UTR區(qū)的調(diào)控作用,最終確定miR-205的直接靶基因。第三部分:1、構(gòu)建膠質(zhì)母細胞瘤移植動物模型,檢測miR-205對膠質(zhì)母細胞瘤生長的影響。2、采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測腫瘤增殖因子Ki67蛋白、腫瘤侵襲因子Vimentin蛋白和靶基因FRAT1的表達水平。3、采用TUNEL細胞凋亡實驗檢測移植瘤細胞凋亡水平的改變�！窘Y(jié)果】第一部分:1、miR-205在4種膠質(zhì)瘤細胞株中的表達水平明顯低于正常膠質(zhì)細胞株,其中在U-87細胞株中的表達水平最低。2、miR-205模擬物能夠顯著提升U-87細胞中miR-205的表達水平,轉(zhuǎn)染后細胞增殖能力減弱、凋亡水平上升、細胞的遷移和侵襲能力下降。第二部分:1、通過microRNA靶基因預(yù)測軟件確認mi R-205的候選靶基為FRAT1。2、隨著miR-205模擬物轉(zhuǎn)染濃度的升高,候選靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平逐漸發(fā)生下降。3、miR-205能夠抑制野生型熒光素酶活性,但對突變型熒光素酶活性沒有影響。第三部分:1、miR-205能夠抑制膠質(zhì)母細胞移植瘤的生長。2、miR-205激動劑處理組移植瘤中Ki67、Vimentin和靶基因FRAT1蛋白表達低于對照組,但腫瘤凋亡水平高于對照組�！窘Y(jié)論】在膠質(zhì)母細胞瘤的發(fā)展過程中,miR-205表達發(fā)生減少,導(dǎo)致下游靶基因FRAT1表達水平上升,膠質(zhì)母細胞瘤獲得更強的惡性表型,腫瘤增殖能力增強、凋亡水平降低、遷移和侵襲能力提升,最終促使膠質(zhì)母細胞瘤的演進和惡性轉(zhuǎn)化。本研究闡明了膠質(zhì)母細胞瘤惡性轉(zhuǎn)化的分子機制,為腫瘤的分子靶向治療提供了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：micro RNA 膠質(zhì)母細胞瘤 mi R-205 FRAT1 演進
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 參考文獻11-14
• 第一部分 miR-205調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤生物學(xué)行為的研究14-29
• 引言14
• 1 材料與方法14-21
• 1.1 材料14-17
• 1.2 方法17-21
• 2 結(jié)果21-25
• 2.1 miR-205在膠質(zhì)瘤細胞株中低表達21
• 2.2 miR-205 mimic上調(diào)U-87細胞中mi R-205的表達水平21-22
• 2.3 miR-205 mimic抑制U-87細胞的增殖22-23
• 2.4 miR-205 mimic促進U-87細胞的凋亡23-24
• 2.5 miR-205 mimic抑制U-87細胞的遷移能力24
• 2.6 miR-205 mimic抑制U-87細胞的侵襲能力24-25
• 3 討論25-27
• 參考文獻27-29
• 第二部分 膠質(zhì)母細胞瘤中miR-205靶基因預(yù)測及驗證29-41
• 引言29-30
• 1 材料與方法30-35
• 1.1 材料30-32
• 1.2 方法32-35
• 2 結(jié)果35-37
• 2.1 生物信息學(xué)預(yù)測FRAT1為miR-205的候選靶基因35-36
• 2.2 轉(zhuǎn)染不同濃度梯度miR-205 mimic后候選靶基因FRAT1的表達情況36-37
• 2.3 熒光素酶雙報告基因系統(tǒng)證實FRAT1為miR-205的直接靶基因37
• 3 討論37-38
• 參考文獻38-41
• 第三部分 miR-205調(diào)控膠質(zhì)母細胞瘤生物學(xué)行為的體內(nèi)實驗驗證41-52
• 引言41
• 1 材料與方法41-46
• 1.1 材料41-42
• 1.2 方法42-46
• 2 結(jié)果46-49
• 2.1 miR-205對膠質(zhì)母細胞瘤生長的影響46-47
• 2.2 miR-205對膠質(zhì)母細胞移植瘤生物學(xué)行為的影響47-49
• 3 討論49-50
• 參考文獻50-52
• 結(jié)論52-53
• 綜述 microRNA與膠質(zhì)母細胞瘤53-61
• 參考文獻57-61
• 縮略詞表61-62
• 發(fā)表和待發(fā)表的論文62-63
• 致謝63-64

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