本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-205靶向調(diào)控FRAT1抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程的研究

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【摘要】：【目的】探討miR-205在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中的生物學(xué)功能和分子機(jī)制,為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的臨床診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供新的生物學(xué)標(biāo)志物和新的分子治療靶點(diǎn)�！痉椒ā康谝徊糠�:1、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)4種膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(U251、A172、U-118和U-87)和正常膠質(zhì)細(xì)胞株HEB中miR-205的表達(dá)水平。2、miR-205模擬物瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入U(xiǎn)-87細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中miR-205的表達(dá)水平。3、MTT法檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-205的U-87細(xì)胞增殖能力的改變。4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)mi R-205的U-87細(xì)胞凋亡水平的改變。5、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-205的U-87細(xì)胞遷移能力的改變。6、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)miR-205的U-87細(xì)胞侵襲能力的改變。第二部分:1、采用microRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中miR-205的候選靶基因。2、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染不同濃度miR-205模擬物后U-87細(xì)胞中候選靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平表達(dá)情況。3、采用熒光素酶雙報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)miR-205對(duì)候選靶基因FRAT1的3’UTR區(qū)的調(diào)控作用,最終確定miR-205的直接靶基因。第三部分:1、構(gòu)建膠質(zhì)母細(xì)胞瘤移植動(dòng)物模型,檢測(cè)miR-205對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響。2、采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)腫瘤增殖因子Ki67蛋白、腫瘤侵襲因子Vimentin蛋白和靶基因FRAT1的表達(dá)水平。3、采用TUNEL細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)移植瘤細(xì)胞凋亡水平的改變�！窘Y(jié)果】第一部分:1、miR-205在4種膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)水平明顯低于正常膠質(zhì)細(xì)胞株,其中在U-87細(xì)胞株中的表達(dá)水平最低。2、miR-205模擬物能夠顯著提升U-87細(xì)胞中miR-205的表達(dá)水平,轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力減弱、凋亡水平上升、細(xì)胞的遷移和侵襲能力下降。第二部分:1、通過(guò)microRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件確認(rèn)mi R-205的候選靶基為FRAT1。2、隨著miR-205模擬物轉(zhuǎn)染濃度的升高,候選靶基因FRAT1 mRNA和蛋白水平逐漸發(fā)生下降。3、miR-205能夠抑制野生型熒光素酶活性,但對(duì)突變型熒光素酶活性沒(méi)有影響。第三部分:1、miR-205能夠抑制膠質(zhì)母細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)。2、miR-205激動(dòng)劑處理組移植瘤中Ki67、Vimentin和靶基因FRAT1蛋白表達(dá)低于對(duì)照組,但腫瘤凋亡水平高于對(duì)照組�！窘Y(jié)論】在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的發(fā)展過(guò)程中,miR-205表達(dá)發(fā)生減少,導(dǎo)致下游靶基因FRAT1表達(dá)水平上升,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤獲得更強(qiáng)的惡性表型,腫瘤增殖能力增強(qiáng)、凋亡水平降低、遷移和侵襲能力提升,最終促使膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的演進(jìn)和惡性轉(zhuǎn)化。本研究闡明了膠質(zhì)母細(xì)胞瘤惡性轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制,為腫瘤的分子靶向治療提供了理論基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：micro RNA 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 mi R-205 FRAT1 演進(jìn)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 參考文獻(xiàn)11-14
• 第一部分 miR-205調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生物學(xué)行為的研究14-29
• 引言14
• 1 材料與方法14-21
• 1.1 材料14-17
• 1.2 方法17-21
• 2 結(jié)果21-25
• 2.1 miR-205在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中低表達(dá)21
• 2.2 miR-205 mimic上調(diào)U-87細(xì)胞中mi R-205的表達(dá)水平21-22
• 2.3 miR-205 mimic抑制U-87細(xì)胞的增殖22-23
• 2.4 miR-205 mimic促進(jìn)U-87細(xì)胞的凋亡23-24
• 2.5 miR-205 mimic抑制U-87細(xì)胞的遷移能力24
• 2.6 miR-205 mimic抑制U-87細(xì)胞的侵襲能力24-25
• 3 討論25-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 第二部分 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中miR-205靶基因預(yù)測(cè)及驗(yàn)證29-41
• 引言29-30
• 1 材料與方法30-35
• 1.1 材料30-32
• 1.2 方法32-35
• 2 結(jié)果35-37
• 2.1 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)FRAT1為miR-205的候選靶基因35-36
• 2.2 轉(zhuǎn)染不同濃度梯度miR-205 mimic后候選靶基因FRAT1的表達(dá)情況36-37
• 2.3 熒光素酶雙報(bào)告基因系統(tǒng)證實(shí)FRAT1為miR-205的直接靶基因37
• 3 討論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 第三部分 miR-205調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生物學(xué)行為的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證41-52
• 引言41
• 1 材料與方法41-46
• 1.1 材料41-42
• 1.2 方法42-46
• 2 結(jié)果46-49
• 2.1 miR-205對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響46-47
• 2.2 miR-205對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞移植瘤生物學(xué)行為的影響47-49
• 3 討論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 結(jié)論52-53
• 綜述 microRNA與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤53-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 縮略詞表61-62
• 發(fā)表和待發(fā)表的論文62-63
• 致謝63-64

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本文編號(hào)：746846