發(fā)布時(shí)間：2017-08-27 01:34

  本文關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌DNMT1與抑癌基因啟動(dòng)子甲基化及表達(dá)的研究

  更多相關(guān)文章： DNA甲基化 DNMT1 表觀遺傳 非小細(xì)胞肺癌 抑癌基因

【摘要】：目的:DNA甲基化是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1催化(DNMT1)的一種表觀遺傳學(xué)上的DNA修飾酶。本研究的目的是探討人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株在離體及在體生長(zhǎng)下DNMT1基因、蛋白的表達(dá)及其對(duì)抑癌基因甲基化狀態(tài)的影響。方法:人肺鱗癌細(xì)胞株A549,H838在體外生長(zhǎng)并種植于裸鼠皮下成瘤,兩種細(xì)胞株均使用DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-AZA-CdR)和/或組蛋白脫乙酰酶抑制劑(MS-275)進(jìn)行治療治療,即分為四組:對(duì)照組、5-AZA-CdR單獨(dú)治療組、MS-275單獨(dú)治療組及聯(lián)合治療組。表觀治療結(jié)束后,收集細(xì)胞,分別提取總DAN、蛋白及RNA。DNMT1及腫瘤抑癌基因(RASSF1A,ASC,APC,MGMT,CDH13,DAPK,ECAD,P16,GATA4等)蛋白水平的表達(dá)用Western blotting進(jìn)行檢測(cè);DNMT1及腫瘤抑癌基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)用RT-qPCR進(jìn)行檢測(cè);腫瘤抑癌基因(RASSF1A,ASC,APC,MGMT,CDH13,DAPK,ECAD,P16,GATA4等)啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)利用甲基化特異性PCR(MSP)進(jìn)行檢測(cè);細(xì)胞的生長(zhǎng)使用CCK-8進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:第一部分1.經(jīng)5-AZA-CdR和MS-275的表觀治療后非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞DNMT1基因m RNA的表達(dá)降低。2.在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中5-AZA-CdR和MS-275的表觀遺傳學(xué)治療可抑制DNMT1蛋白水平的表達(dá)。3.在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表觀遺傳治療可導(dǎo)致抑癌基因發(fā)生去甲基化,從而使相關(guān)抑癌基因恢復(fù)表達(dá)。4.在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表觀遺傳治療可抑制其增殖。第二部分:1.在裸鼠體內(nèi),5-AZA-CdR及MS-275的表觀遺傳治療可明顯抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)。2.在裸鼠體內(nèi),5-AZA-Cd及MS-275的表觀遺傳治療可使抑癌基因RASSF1A、ASC及APC發(fā)生去甲基化,從而恢復(fù)其表達(dá)。結(jié)論:經(jīng)DNA甲基化治療后隨著DNMT1表達(dá)的降低,腫瘤抑癌基因的甲基化狀態(tài)受DNMT1基因的調(diào)控。在裸鼠,腫瘤抑癌基因(APC,ASC,RASSF1A)的去甲基化抑制腫瘤組織的生長(zhǎng)。本研究的結(jié)果支持在非小細(xì)胞肺癌中DNA甲基化可作為一種潛在的表觀遺傳臨床預(yù)后或治療反應(yīng)的生物學(xué)標(biāo)志,并且DNMT1可作為一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：DNA甲基化 DNMT1 表觀遺傳 非小細(xì)胞肺癌 抑癌基因
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英漢縮略詞對(duì)照表8-10
• 前言10-14
• 第一部分 表觀治療對(duì)NSCLC細(xì)胞株抑癌基因甲基化狀態(tài)及DNMT1表達(dá)的影響14-32
• 1 材料與方法14-24
• 3 結(jié)果24-29
• 4 討論29-31
• 5 結(jié)論31-32
• 第二部分 人NSCLC細(xì)胞株在體生長(zhǎng)條件下對(duì)裸鼠成瘤、抑癌基因甲基化及表達(dá)的影響32-39
• 1 材料與方法32-35
• 2 結(jié)果35-38
• 3 討論38-39
• 4 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 綜述44-53
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄53-54
• 致謝54-55

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