本文關(guān)鍵詞：生長抑制因子4對大腸癌細(xì)胞生長和侵襲的作用及其機(jī)制

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【摘要】：目的:探索生長抑制因子4(ING4)對大腸癌細(xì)胞生長和侵襲的作用及其機(jī)制。方法:運(yùn)用q RT-PCR方法檢測人高轉(zhuǎn)移大腸癌(CRC)細(xì)胞系Lo Vo和SW620、低轉(zhuǎn)移CRC細(xì)胞系LS174T和SW480以及正常大腸粘膜上皮細(xì)胞FHC中ING4m RNA的表達(dá)水平。以攜帶人源化ING4編碼序列的p Ad Track-CMV/ING4質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增ING4片段,在Nhe I、Sgs I酶切位點(diǎn)間插入至p Lenti6.3/IRES/GFP慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建p Lenti6.3/ING4/IRES/GFP。然后p Lenti6.3/ING4/IRES/GFP、對照p Lenti6.3//IRES/GFP分別與輔助包裝質(zhì)粒p LP1、p LP2、VSVG用脂質(zhì)體Lipofectamine2000共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞制備ING4重組慢病毒(LV-ING4)、對照空病毒(LV)并滴度測定。LV-ING4、LV以10 MOI劑量感染高轉(zhuǎn)移Lo Vo CRC細(xì)胞,通過殺稻瘟菌素(BSD)篩選后獲得Lo Vo-LV-ING4(簡寫為Lo Vo-ING4)、Lo Vo-LV(簡寫為Lo Vo-Mock),并在熒光顯微鏡下觀察GFP分析轉(zhuǎn)基因效率,RT-PCR、Western blot檢測ING4的表達(dá)。利用MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測ING4對Lo Vo CRC細(xì)胞體外生長、細(xì)胞周期、侵襲的影響。建立裸鼠皮下移植瘤模型,監(jiān)測腫瘤體積、重量,分析ING4對Lo Vo CRC細(xì)胞裸鼠體內(nèi)生長的作用。采用Western blot檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白P21、Cyclin E、CDK2和上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Snail1、Snail2、ZEB1、Twist的表達(dá)。免疫組化檢測裸鼠皮下移植瘤CD31的表達(dá)和微血管密度(MVD)。ELISA檢測Lo Vo CRC細(xì)胞上清中IL-6、IL-8、VEGF的分泌水平。結(jié)果:1)ING4在CRC細(xì)胞中表達(dá)顯著下調(diào);2)慢病毒介導(dǎo)ING4過表達(dá)抑制Lo Vo CRC細(xì)胞體外和裸鼠體內(nèi)生長;3)ING4通過上調(diào)P21、下調(diào)Cyclin E誘導(dǎo)Lo Vo CRC細(xì)胞周期G1期阻滯;4)ING4通過下調(diào)IL-6、IL-8、VEGF促血管生成因子的表達(dá)抑制腫瘤血管生成;5)ING4通過下調(diào)Snail1EMT誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子(EMT-TF)、N-Cadherin和Vimentin間充質(zhì)標(biāo)志物及上調(diào)E-Cadherin上皮標(biāo)志物,進(jìn)而抑制Lo Vo CRC的侵襲。結(jié)論:ING4能夠通過調(diào)控Lo Vo CRC細(xì)胞G1期檢查點(diǎn)關(guān)鍵分子的表達(dá)誘導(dǎo)G1期阻滯,及減少促血管生成因子的分泌參與抑制腫瘤血管生成,進(jìn)而抑制Lo Vo CRC細(xì)胞的生長。ING4還能夠通過下調(diào)EMT-TF Snail1、逆轉(zhuǎn)EMT抑制Lo Vo CRC細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-10
• 材料10-13
• 方法13-23
• 結(jié)果23-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文50-51
• 中英文對照縮略詞表51-52
• 致謝52-53

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本文編號：743442