本文關(guān)鍵詞：乳腺癌髓源性抑制細胞（MDSC）對B細胞功能影響的研究

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【摘要】：目的:探索小鼠乳腺癌模型中髓源性抑制細胞MDSCs對B細胞功能的影響,闡明MDSCs對B細胞功能調(diào)控的具體機制。方法:建立4T1-BALB/C小鼠乳腺癌模型,檢測荷瘤小鼠隨著時間的延長,小鼠脾臟的變化;用CD19作為B細胞的特異性表型,Gr-1和CD11b作為MDSCs的特異性表型,通過流式細胞技術(shù)檢測荷瘤小鼠脾中MDSCs和B細胞比例的變化,同樣通過流式細胞技術(shù)檢測荷瘤小鼠和正常小鼠脾和血中B細胞相關(guān)表型分子4-1BBL、CD80、CD86、MHCⅡ、CCR6、CD62L、PD-1和PD-L1的表達情況。通過磁珠分選技術(shù),從荷瘤小鼠脾臟細胞中分選出MDSCs,非荷瘤對照組小鼠脾臟中分選出B細胞,將MDSCs和B細胞按照3:1和5:1的比例共孵育,同時設置單獨B細胞組做對照。運用流式細胞技術(shù)檢測MDSCs與B細胞共培養(yǎng)后對B細胞表型4-1BBL、CD80、CD86、MHCⅡ、CCR6、CD62L、PD-1和PD-L1的影響。運用Brdu技術(shù)標記共培養(yǎng)的B細胞,檢測B細胞的增殖情況。同時收集共培養(yǎng)的上清,運用ELISA技術(shù)檢測培養(yǎng)上清中B細胞抗體Ig A、Ig M和Ig G的分泌情況。結(jié)果:4T1-BALB/C小鼠乳腺癌模型中,小鼠脾臟的大小,重量和細胞數(shù)都隨著荷瘤時間延長而增加,并且小鼠脾臟中MDSCs的比例隨著荷瘤時間延長出現(xiàn)了明顯升高的趨勢,B細胞的比例則出現(xiàn)明顯下降趨勢,荷瘤21天達到最低。流式結(jié)果顯示,與非荷瘤小鼠相比,荷瘤小鼠脾臟中B細胞的表型CD86、MHCⅡ、CCR6、CD62L、PD-1和PD-L1都出現(xiàn)了明顯下降趨勢,且B細胞表型分子4-1BBL、CD62L、PD-L1和MHCⅡ在荷瘤鼠外周血中表達也明顯下降。體外MDSCs和B細胞的共孵實驗中,B細胞的表型變化與荷瘤體系中B細胞變化基本一致,說明MDSCs影響B(tài)細胞表面分子的表達。MDSCs和B細胞共孵育體系中5:1組與對照組相比,B細胞的增殖明顯降低。ELISA結(jié)果顯示,與MDSCs共培養(yǎng)后,B細胞體系中Ig M分泌濃度出現(xiàn)下降趨勢,Ig A和Ig G的濃度則呈升高趨勢。結(jié)論:腫瘤中的MDSCs可能抑制B細胞的正常免疫功能,誘導B細胞高分泌Ig A和Ig G,低分泌Ig M。
【關(guān)鍵詞】：髓源性抑制細胞(MDSCs) B淋巴細胞 免疫球蛋白
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 縮略語/符號說明9-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 1 對象和方法14-23
• 1.1 材料與儀器14-15
• 1.1.1 細胞系14
• 1.1.2 研究對象14
• 1.1.3 研究試劑14-15
• 1.1.4 研究儀器15
• 1.2 試劑配制15-16
• 1.2.1 細胞培養(yǎng)液的配制15-16
• 1.2.2 細胞凍存液的配制16
• 1.2.3 0.5%BSA溶液的配制16
• 1.3 研究方法16-22
• 1.3.1 細胞培養(yǎng)16-18
• 1.3.2 脾細胞提取18-19
• 1.3.3 磁珠分選腫瘤相關(guān)MDSCs和B細胞19-20
• 1.3.4 脾細胞表面流式抗體標記20-21
• 1.3.5 腫瘤相關(guān)MDSCs與B細胞共孵育21
• 1.3.6 Brdu實驗檢測B細胞的增殖情況21-22
• 1.3.7 ELISA檢測22
• 1.4 統(tǒng)計學方法22-23
• 2 結(jié)果23-32
• 2.1 4T1-BALB/C小鼠乳腺癌模型脾中MDSCs和B細胞比例的變化及B細胞表型變化23-28
• 2.1.1 4T1乳腺癌荷瘤小鼠脾臟隨時間的變化情況23
• 2.1.2 4T1乳腺癌小鼠脾臟中MDSCs和B細胞的比例隨時間的變化情況23-24
• 2.1.3 4T1乳腺癌荷瘤小鼠21天脾臟中MDSCs和B細胞的具體變化情況24-25
• 2.1.4 4T1乳腺癌荷瘤小鼠脾臟中B細胞表型的變化情況25-26
• 2.1.5 4T1乳腺癌荷瘤小鼠外周血中B細胞表型的變化情況26-27
• 2.1.6 4T1乳腺癌荷瘤小鼠外周血中CD19+CD62L-B細胞比例變化情況27-28
• 2.2 腫瘤相關(guān)MDSCs與B細胞共孵后B細胞表型及功能出現(xiàn)變化28-32
• 2.2.1 腫瘤相關(guān)MDSCs與B細胞共孵后，，B細胞表型變化28-29
• 2.2.2 腫瘤相關(guān)MDSCs與B細胞共孵后，B細胞增殖變化29-30
• 2.2.3 腫瘤相關(guān)MDSCs與B細胞共孵體系中B細胞抗體分泌情況30-32
• 3 討論32-39
• 3.1 4T1-BALB/C動物模型32-33
• 3.2 B細胞的表面分子及功能特點33-36
• 3.3 Breg細胞的表面分子及功能特點36
• 3.4 在免疫系統(tǒng)中MDSCs對B細胞功能的影響36-37
• 3.5 在腫瘤中MDSCs對B細胞功能的影響37-38
• 3.6 結(jié)語38-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-48
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明48-49
• 綜述 腫瘤中MDSCs在免疫抑制機制方面的研究進展49-64
• 綜述參考文獻56-64
• 致謝64-65
• 個人簡歷65

本文編號：739276