本文關(guān)鍵詞：膀胱癌中SNF5基因表達(dá)的分子調(diào)控機(jī)制研究

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【摘要】：背景:膀胱癌具有易耐藥、高復(fù)發(fā)性、高異質(zhì)以及高死亡率的生物學(xué)特性,同時(shí)它的發(fā)生發(fā)展也是一個(gè)多基因多步驟參與的結(jié)果,近年來(lái)發(fā)病率有上升的趨勢(shì),已經(jīng)成為世界五大常見(jiàn)癌癥之一,在我國(guó)膀胱癌已經(jīng)躍居男性泌尿生殖系腫瘤首位。大量研究顯示,膀胱癌的發(fā)生發(fā)展跟機(jī)體的遺傳性和表觀遺傳性異常表現(xiàn)有很大的關(guān)聯(lián),這為膀胱癌的早期預(yù)警及后期治療帶來(lái)了很多的難題。據(jù)報(bào)道內(nèi)外因素促使表觀遺傳發(fā)生改變,從而激活或沉默某些基因,繼而使機(jī)體某些細(xì)胞發(fā)生失控狀態(tài)導(dǎo)致產(chǎn)生腫瘤。染色質(zhì)重塑復(fù)合物(SWI/SNF)是表觀遺傳學(xué)研究的對(duì)象之一,它是利用水解ATP獲得能量來(lái)改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu),DNA修復(fù)、DNA的甲基化、轉(zhuǎn)錄的激活和抑制以及細(xì)胞周期均與此種復(fù)合物及其相關(guān)蛋白有關(guān)。SNF5作為SWI/SNF的一個(gè)核心亞基,已經(jīng)被證實(shí)在許多不同的腫瘤中存在突變或者缺失,比如橫紋肌肉瘤、腦、腎及其他軟組織的惡性腫瘤等。目的:我們課題組前期發(fā)現(xiàn)SNF5在膀胱癌中存在表達(dá)異常現(xiàn)象,查閱文獻(xiàn)未見(jiàn)其相關(guān)作用機(jī)制報(bào)道,所以研究SNF5在膀胱癌中作用機(jī)制,將有助于早期診斷或預(yù)警、獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)的研究奠定重要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。SNF5在膀胱癌中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制不清楚,我們從非編碼RNA和轉(zhuǎn)錄調(diào)控兩個(gè)方面入手進(jìn)行初步研究,方法與結(jié)果:一、非編碼RNA1、鑒定SNF5是miR-206新型靶基因:基于前期生物信息分析,運(yùn)用Luciferace報(bào)告基因系統(tǒng)、miR-206模擬物及其抑制物鑒定“SNF5是miR-206的新型靶基因”。2、利用Real-time PCR,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)臨床膀胱癌組織中miR-206、SNF5在表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)miR-206在癌組織中低表達(dá)(30/38),而SNF5的mRNA及蛋白水平均高表達(dá)(28/38),二者呈負(fù)相關(guān),結(jié)合臨床病理資料分析發(fā)現(xiàn),SNF5的表達(dá)與膀胱癌臨床病理分級(jí)不相關(guān)。二、轉(zhuǎn)錄調(diào)控1、證實(shí)“HSF1對(duì)SNF5關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用”:前期生物信息學(xué)分析在人SNF5基因5’調(diào)控區(qū)存在著HSF1的可能結(jié)合位點(diǎn);登陸網(wǎng)站http://www.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html,對(duì)SNF5基因的5′側(cè)翼區(qū)約3000bp的序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其有與HSF1的結(jié)合位點(diǎn),選擇膀胱癌細(xì)胞株5637細(xì)胞,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染高表達(dá)HSF1質(zhì)粒后,western blot檢測(cè)HSF1能明顯促進(jìn)SNF5蛋白表達(dá);采用體內(nèi)Ch IP實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)HSF1可與SNF5啟動(dòng)子-2304--2696區(qū)域結(jié)合,以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)HSF1對(duì)SNF5的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。2、利用Real-time PCR,免疫組織化學(xué)法大樣本量檢測(cè)膀胱癌組織中HSF1、SNF5的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)兩者在癌組織中mRNA及蛋白水平普遍高表達(dá),二者呈正相關(guān)。結(jié)論:綜上所述,本研究從非編碼RNA和轉(zhuǎn)錄調(diào)控兩個(gè)方面研究了SNF5表達(dá)調(diào)控情況,首先利用生物信息學(xué)分析并驗(yàn)證了SNF5是miR-206新的靶基因以及HSF1是SNF5的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,并通過(guò)膀胱癌臨床組織樣本進(jìn)一步驗(yàn)證了miR-206對(duì)SNF5負(fù)向調(diào)控,而HSF1則提高SNF5的表達(dá)。本研究首次從非編碼RNA和轉(zhuǎn)錄調(diào)控兩個(gè)方面探討了膀胱癌腫瘤中SNF5的分子機(jī)制,進(jìn)一步為以SNF5基因作為膀胱癌臨床早期預(yù)警、診斷或預(yù)后指標(biāo)提供了新的選擇,并為進(jìn)一步研究奠定重要的前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 SNF5基因 miR-206 HSF1 轉(zhuǎn)錄調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 分析并鑒定“miR-206-SNF5”通路14-38
• 2.1 材料與方法14-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-35
• 2.3 討論35-37
• 2.4 小結(jié)37-38
• 第三章 HSF1對(duì)SNF5關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用38-48
• 3.1 材料與方法38-40
• 3.2 方法40-41
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-47
• 3.4 討論47
• 3.5 小結(jié)47-48
• 全文總結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 文獻(xiàn)綜述 SWI/SNF核心亞基SNF5與腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用53-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文62-63
• 致謝63

【相似文獻(xiàn)】

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1 青云;英國(guó)科學(xué)家辨別出與膀胱癌有關(guān)的基因[J];中國(guó)處方藥;2004年08期

2 ;特殊激素可導(dǎo)致男性患膀胱癌幾率升高[J];中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(綜合版);2007年11期

3 肖建利;張麗芳;劉巧莉;;白花蛇舌草治療膀胱癌1例[J];臨床合理用藥雜志;2009年08期

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5 張曉峰;劉訓(xùn)勤;;一種新型膀胱癌快速診斷裝置[J];醫(yī)療衛(wèi)生裝備;2013年10期

6 孫宏志,凡杰,唐孝達(dá);自穩(wěn)定反義IGF1R基因片段對(duì)膀胱癌細(xì)胞的影響[J];中華泌尿外科雜志;2000年05期

7 章小平,楊紅枚,魯功成;膀胱癌穩(wěn)定表達(dá)多藥耐受相關(guān)蛋白亞克隆的生物學(xué)特征[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2000年03期

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10 楊莉,汪少娟,楊業(yè)金,陳忠,吳燕麗;抗腫瘤藥對(duì)膀胱癌細(xì)胞產(chǎn)生的免疫抑制因子作用的影響[J];藥物流行病學(xué)雜志;2000年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張永春;谷江;孫發(fā);石家齊;;傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)在膀胱癌治療中的意義[A];2010年貴州省泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小瑩;王e，

本文編號(hào)：734978