本文關(guān)鍵詞：HIF-1及AhR信號通路在A549細胞中相互作用的研究

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【摘要】：目的:研究缺氧條件下,HIF-1與AhR信號通路在A549細胞中的相互作用。方法:(1)采用實時熒光定量PCR法篩選CoCl2作用A549細胞的最佳濃度及時間;(2)采用MTT法篩選B(a)P作用A549細胞的最適濃度范圍及時間;(3)A549細胞按1×106個/瓶接種培養(yǎng)瓶中,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h(細胞基本貼壁)后,加CoCl2及B(a)P溶液,培養(yǎng)一定時間后收集細胞。采用實時熒光定量PCR、Western bolt法檢測細胞VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA及蛋白的表達情況,采用免疫沉淀法檢測HIF-1α、AhR與HIF-1β/ARNT的結(jié)合能力。結(jié)果:(1)通過實時熒光定量PCR法檢測HIF-1αmRNA的表達情況,篩選出CoCl2作用A549細胞的最佳濃度及時間為300μM作用24h;(2)通過MTT法檢測B(a)P對A549細胞增值作用的影響,篩選出B(a)P作用A549細胞的最適濃度范圍為0~8μM及時間為24h;(3)300μM CoCl2處理A549細胞后,加入不同濃度B(a)P作用24h,VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA的表達量與對照組相比明顯增加,當B(a)P濃度為8μM時,各基因mRNA的表達量約為對照組的5、7、7、12倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1蛋白的表達量與對照組相比明顯增加,當B(a)P濃度為8μM時,各基因蛋白的表達量約為對照組的4、5、11、8倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);AhR蛋白與HIF-1β/ARNT的結(jié)合能力與對照組相比明顯降低,當B(a)P濃度為8μM時,AhR蛋白的結(jié)合量約為對照組的32%,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),而HIF-1α蛋白與HIF-1β/ARNT的結(jié)合能力與對照組相比明顯增加,當B(a)P濃度為8μM時,HIF-1α蛋白的結(jié)合量約為對照組的3倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結(jié)論:缺氧條件下,B(a)P能上調(diào)HIF-1信號通路下游基因VEGF、CAⅨmRNA及蛋白的表達,增強HIF-1α蛋白與HIF-1β/ARNT的結(jié)合能力,并呈劑量依賴性;B(a)P能上調(diào)AhR信號通路下游基因CYP1A1、CYP1B1 mRNA及蛋白的表達,但AhR蛋白與HIF-1β/ARNT的結(jié)合能力受HIF-1α信號通路的抑制,并呈劑量依賴性。
【關(guān)鍵詞】：缺氧誘導因子-1 芳香烴受體 AhR核易位體蛋白 苯并(a)芘 A549細胞
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-9
• 1 實驗材料9-13
• 1.1 實驗細胞9
• 1.2 主要儀器9
• 1.3 主要試劑9-10
• 1.4 主要溶液及其配制10-13
• 2 實驗方法13-18
• 2.1 A549細胞的培養(yǎng)及傳代13
• 2.2 細胞乏氧微環(huán)境的建立13-15
• 2.3 實驗用B(a)P濃度的選擇15
• 2.4 藥物處理A549細胞15
• 2.5 實時熒光定量PCR法檢測VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA表達15
• 2.6 Western blot法檢測VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1的蛋白表達15-17
• 2.7 免疫沉淀法檢測HIF-1 與AhR信號通路的相互作用17-18
• 2.8 統(tǒng)計學處理18
• 3 實驗結(jié)果18-25
• 3.1 細胞乏氧微環(huán)境的建立18-20
• 3.2 實驗用B(a)P濃度的選擇20
• 3.3 實時熒光定量PCR法檢測VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1 mRNA表達20-22
• 3.4 Western blot法檢測VEGF、CAⅨ、CYP1A1和CYP1B1的蛋白表達22-24
• 3.5 免疫沉淀法檢測HIF-1 與AhR信號通路的相互作用24-25
• 4 討論25-27
• 5 結(jié)論27-28
• 參考文獻28-31
• 文獻綜述31-47
• 參考文獻41-47
• 縮略語表47-49
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況49-50
• 個人簡歷50-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號：732212