本文關(guān)鍵詞：XPC蛋白缺失對膀胱癌細(xì)胞自噬影響的初步研究

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【摘要】：背景與目的:著色性干皮病C組基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白是核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair,NER)中最早的損傷識別因子,在DNA的損傷應(yīng)答及維持細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性方面扮演重要角色。自噬是細(xì)胞進(jìn)化過程中高度保守的一個維持穩(wěn)態(tài)的生命過程,具有降解蛋白質(zhì)及清除細(xì)胞器的能力,在生物體正常發(fā)育及應(yīng)對、處理環(huán)境威脅時發(fā)揮極為關(guān)鍵的作用。自噬同樣參與到DNA損傷應(yīng)答過程中,并在DNA損傷應(yīng)答過程中發(fā)揮重要作用。在我們早期研究中發(fā)現(xiàn),作為最早的損傷識別因子,XPC還扮演很多其他角色,但其是否參與自噬,尚未見報道。本研究將針對XPC蛋白缺失對膀胱癌細(xì)胞自噬的影響進(jìn)行初步研究,以期為膀胱癌的臨床治療提供更多線索。方法:我們利用課題組已建好的穩(wěn)定抑制XPC蛋白表達(dá)的膀胱癌T24及HEK293細(xì)胞模型;使用氯喹(chloroquine,CQ)抑制自噬小體的降解,從而更好的觀察自噬小體的積累情況;使用免疫印跡技術(shù)觀察XPC干擾前后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表達(dá)情況;瞬時轉(zhuǎn)染GFP-LC3,使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的熒光聚集情況;CCK-8法觀察細(xì)胞的增殖情況;免疫印跡技術(shù)觀察自噬及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.干擾XPC后,自噬小體聚集減少,GFP-LC3熒光明顯聚集的細(xì)胞比例降低;2.使用順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞自噬發(fā)生,發(fā)現(xiàn)干擾XPC后,自噬小體聚集減少,GFP-LC3熒光明顯聚集的細(xì)胞比例降低;3.使用順鉑持續(xù)刺激HEK293細(xì)胞,干擾XPC后LC3Ⅱ的表達(dá)趨勢發(fā)生改變:HEK293NC細(xì)胞對順鉑反應(yīng)緩慢,為逐漸上升后逐漸下降;而HEK293shXPC細(xì)胞對順鉑反應(yīng)迅速,在迅速達(dá)到高峰后逐漸下降;4.使用順鉑持續(xù)刺激膀胱癌T24細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)干擾XPC后LC3Ⅱ的表達(dá)趨勢發(fā)生改變:膀胱癌T24NC細(xì)胞對順鉑反應(yīng)緩慢,為逐漸上升;而膀胱癌T24sh XPC細(xì)胞對順鉑反應(yīng)迅速,在迅速達(dá)到高峰后逐漸下降。5.干擾XPC后,HEK293細(xì)胞對順鉑敏感性增強(qiáng),DNA損傷應(yīng)答相關(guān)蛋白p-ATM(S1981)、p53表達(dá)均上調(diào);膀胱癌T24細(xì)胞對順鉑敏感性降低,DNA損傷應(yīng)答相關(guān)蛋白p-ATM(S1981)表達(dá)上調(diào)、p53表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:XPC蛋白缺失后,HEK293細(xì)胞及膀胱癌T24細(xì)胞的自噬降低,同時在順鉑誘導(dǎo)的DNA損傷下自噬降低,HEK293細(xì)胞對順鉑的敏感性增強(qiáng),而膀胱癌T24細(xì)胞對順鉑的敏感性降低;探討XPC蛋白缺失導(dǎo)致自噬下降造成兩種細(xì)胞對化療藥物順鉑敏感性結(jié)局差異的分子機(jī)制,發(fā)現(xiàn)p53的誘導(dǎo)狀態(tài)可能在細(xì)胞是否發(fā)生凋亡中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
【關(guān)鍵詞】：自噬 膀胱癌 著色性干皮病C組基因 DNA損傷
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-7
• 中文摘要7-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 XPC蛋白缺失對自噬的影響12-24
• 2.1 材料與方法12-17
• 2.2 結(jié)果17-22
• 2.3 討論22-23
• 2.4 小結(jié)23-24
• 第三章 XPC蛋白缺失對順鉑誘導(dǎo)自噬的影響24-34
• 3.1 材料與方法24-28
• 3.2 結(jié)果28-32
• 3.3 討論32-33
• 3.4 小結(jié)33-34
• 第四章 XPC蛋白缺失后自噬對凋亡的影響及分子機(jī)制34-46
• 4.1 材料與方法34-37
• 4.2 結(jié)果37-43
• 4.3 討論43-45
• 4.4 小結(jié)45-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 文獻(xiàn)綜述 DNA損傷與自噬51-60
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 碩士在讀期間發(fā)表文章60-61
• 致謝61

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