本文關(guān)鍵詞：Epha2的表達沉默對PC3細胞生物學行為及血管生成擬態(tài)的影響

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【摘要】：目的:應(yīng)用siRNA干擾人前列腺癌PC3細胞EphA2的表達,探討EphA2基因沉默后對前列腺癌PC3細胞包括生長增殖、遷移力、凋亡等細胞生物學行為及對血管生成擬態(tài)形成的影響,從而為前列腺癌的基因靶向治療提供實驗依據(jù)。方法:培養(yǎng)人前列腺癌PC3細胞株(高表達EGFR,對EGFR-TK1吉非替尼敏感),根據(jù)條件轉(zhuǎn)染或不轉(zhuǎn)染siRNA,24h后分別在RNA水平與蛋白水平觀察Epha2的下調(diào)效果,篩選出對Epha2基因表達具有有效下調(diào)作用的siRNA序列,并利用篩選得到的有效siRNA轉(zhuǎn)染PC3細胞;實驗分為PC3組、PC3+NC siRNA組和PC3+EphA2siRNA組;轉(zhuǎn)染細胞后,加入吉非替尼共培養(yǎng)48小時后,使用流式細胞儀檢測細胞凋亡;MTT方法檢測細胞增殖;Transwell法觀察三組細胞侵襲力的變化;同時,觀察轉(zhuǎn)染后對三維培養(yǎng)條件下PC3血管生成擬態(tài)的影響。結(jié)果:(1)篩選有效的siRNA序列:Realtime PCR結(jié)果顯示,與空白組相比,陰性對照組無顯著差異;轉(zhuǎn)染siRNA-444、siRNA-733、siRNA-1533、siRNA-2191組EphA2表達水平分別下調(diào)54.60%(P0.0001)、52.01%(P0.0001)、93.50%(P0.0001)、74.23%(P0.0001),說明這些siRNA序列能有效沉默EphA2基因。WesternBlot結(jié)果顯示,與空白組相比,陰性對照組無顯著差異,轉(zhuǎn)染sirna-444、sirna-733、sirna-1533、sirna-2191組蛋白表達水平分別下調(diào)46.76%(p0.001)、45.02%(p0.001)、80.02%(p0.001)、64.30%(p0.001),說明這些sirna序列能有效抑制epha2基因表達,其中sirna-1533的下調(diào)作用最明顯。(2).mtt法檢測轉(zhuǎn)染后0h、24h、48h、72h三組細胞增殖水平,根據(jù)測得的od值比較各組細胞的生存情況,發(fā)現(xiàn)在48h、72h時pc3+epha2sirna組細胞存活數(shù)較兩對組差異均具有統(tǒng)計學意義(p0.05),但72h時epha2干擾作用最明顯(f=51.23,p0.01);(3).transwell法測轉(zhuǎn)染后三組細胞侵襲力,結(jié)果顯示:pc3+epha2sirna組穿過matrigel膠的細胞數(shù)明顯少于pc3組和pc3+ncsirna組(f=29.00,p0.01),而pc3組和pc3+ncsirna組之間無明顯差別(p0.05);(4).流式細胞儀技術(shù)測轉(zhuǎn)染后48h三組細胞凋亡率,結(jié)果顯示:pc3+epha2sirna組細胞的平均凋亡率為(17.56±1.21)%,pc3組平均凋亡率為(3.98±0.24)%,pc3+ncsirna組細胞平均凋亡率為(4.02±0.28)%,pc3+epha2sirna組較pc3組和pc3+ncsirna組細胞凋亡率顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(f=148.14,p0.01),而pc3組和pc3+ncsirna組細胞凋亡率差異無統(tǒng)計學意義(p0.05);(5).轉(zhuǎn)染48h后將三組細胞行體外三維培養(yǎng),24h后終止培養(yǎng),觀察各組細胞的管狀結(jié)構(gòu)排列情況和完整程度。結(jié)果顯示:pc3+epha2sirna組管狀結(jié)構(gòu)數(shù)目為8.5±2.3,pc3組和pc3+ncsirna組細胞管狀結(jié)構(gòu)數(shù)目分別為和15.4±3.6和14.2±1.8,pc3+epha2sirna組較pc3組和pc3+ncsirna組管狀結(jié)構(gòu)數(shù)目明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(f=58,p0.01),而PC3組和PC3+NC siRNA組管狀結(jié)構(gòu)數(shù)目無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:(1).沉默EphA2基因能抑制前列腺癌PC3細胞的生長及血管生成擬態(tài)的形成、降低其侵襲力、誘導細胞凋亡;(2).針對EphA2的基因干擾技術(shù)能夠為前列腺癌的治療提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：前列腺癌 PC3細胞 EphA2 RNA干擾 生物學性狀 血管生成擬態(tài)
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 引言11-14
• 實驗流程14-15
• 材料與方法15-18
• 實驗方法18-30
• 結(jié)果30-43
• 討論43-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-54
• 綜述54-60
• 參考文獻58-60
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文60-61
• 致謝61

【參考文獻】

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本文編號：719909