本文關(guān)鍵詞：永生化食管上皮惡變細(xì)胞中核干細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞增殖的影響

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【摘要】：背景中國(guó)的食管癌發(fā)病率和死亡率均遠(yuǎn)高于世界平均水平,細(xì)胞增殖異常與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。核干細(xì)胞因子(nucleostemin,NS)是一個(gè)重要的細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)因子,可維持干細(xì)胞和癌細(xì)胞的增殖,并保持細(xì)胞不分化。本項(xiàng)目在前期研究的基礎(chǔ)上,將采用永生化食管上皮細(xì)胞系(SHEE)及其惡變細(xì)胞系(SHEEC),測(cè)定SHEE及SHEEC中NS、細(xì)胞周期蛋白B1(Cyclin B1)和抑癌基因PTEN的m RNA和蛋白的表達(dá)變化,用RNA干擾技術(shù)降低NS表達(dá),觀察對(duì)細(xì)胞惡性變的影響。本項(xiàng)目對(duì)揭示NS在SHEEC食管癌細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞增殖的影響具有重要意義。目的觀察永生化食管上皮惡變細(xì)胞中核干細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞增殖的影響方法1.SHEE和SHEEC細(xì)胞傳代培養(yǎng),應(yīng)用RT-PCR及Western Blot方法分別檢測(cè)SHEE和SHEEC細(xì)胞中NS、細(xì)胞周期蛋白B1(cyclin B1)及人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶(PTEN)的表達(dá)。2.設(shè)計(jì)并合成NS si RNA,轉(zhuǎn)染SHEEC細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為3組,分別為試劑對(duì)照組(Mock)、陰性對(duì)照組(NC)及轉(zhuǎn)染組(NS-1543),應(yīng)用RT-PCR及Western Blot方法分別檢測(cè)各組NS、cyclin B1及PTEN的表達(dá)變化。3.應(yīng)用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性,PI染色和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡變化。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件,統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示,兩組均數(shù)比較用t檢驗(yàn);多組均數(shù)間的比較采用單因素方差分析,多組均數(shù)間的兩兩比較采用LSD方法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果1.SHEEC細(xì)胞中NS、Cyclin B1及PTEN m RNA相對(duì)于SHEE的表達(dá)量分別為2.047±0.507、2.214±0.213及0.668±0.188,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.SHEE及SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN蛋白表達(dá)量分別為(1.142±0.113,3.161±0.108)、(1.585±0.056,2.173±0.058)、(1.894±0.341,1.162±0.524),均為P0.05。3.沉默SHEEC中NS表達(dá)后,Mock組、NC組和NS-1543組Cyclin B1、PTEN m RNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為(1.057±0.054,0.998±0.104,0.621±0.133)、(1.069±0.059,0.999±0.085,2.319±0.148)和(1.913±0.177,1.735±0.275,0.597±0.103)、(0.791±0.382,0.880±0.077,2.409±0.058),均為P0.05。4.下調(diào)SHEEC中NS表達(dá)量后,Mock組、NC、NS-1543組細(xì)胞凋亡率分別為7.233±0.427、9.318±0.703、33.667±2.517,P0.05。細(xì)胞周期G0/G1期細(xì)胞百分比增加,S期和G2/M期細(xì)胞百分比降低,P0.05。5.下調(diào)SHEEC中NS表達(dá),轉(zhuǎn)染24h、36h及48h的NS-1543組細(xì)胞增殖活性分別較Mock組和NC組降低,P0.05,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1.沉默NS表達(dá)可阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期,抑制SHEEC細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且伴隨Cyclin B1表達(dá)的降低和PTEN表達(dá)的增加。2.NS可以促進(jìn)SHEEC細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：永生化食管上皮細(xì)胞 永生化食管上皮惡變細(xì)胞 核干細(xì)胞因子 細(xì)胞周期蛋白B1 人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-13
• 中英文縮略詞表13-15
• 1 前言15-18
• 2 材料與方法18-36
• 2.1 材料18-22
• 2.1.1 細(xì)胞來源18
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑18-19
• 2.1.3 主要儀器19-20
• 2.1.4 主要試劑配置20-22
• 2.2 方法22-36
• 2.2.1 方法流程圖22-23
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)23-24
• 2.2.3 RT-PCR檢測(cè)永生化食管上皮細(xì)胞系SHEE及其惡變細(xì)胞系SHEEC中核干細(xì)胞因子NS、Cyclin B1、PTEN m RNA的表達(dá)24-28
• 2.2.4 Western blot檢測(cè)各組中目的基因的蛋白表達(dá)情況28-31
• 2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染31-34
• 2.2.6 PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期34
• 2.2.7 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)NS沉默前后對(duì)SHEEC細(xì)胞凋亡率的影響 .34-35
• 2.2.8 MTT法檢測(cè)NS沉默前后細(xì)胞增殖活性35
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)分析35-36
• 3 結(jié)果36-50
• 3.1 RT-PCR檢測(cè)SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的m RNA表達(dá)變化36-40
• 3.1.1 RNA純度和完整性檢測(cè)結(jié)果36
• 3.1.2 Real-Time PCR結(jié)果36-40
• 3.2 Western blot檢測(cè)SHEE、SHEEC中NS、Cyclin B1及PTEN的蛋白表達(dá)變化40-42
• 3.2.1 BCA蛋白濃度測(cè)定40-41
• 3.2.2 SHEE及SHEEC中NS、Cyclin B1、PTEN蛋白表達(dá)水平41-42
• 3.3 NS基因抑制結(jié)果42-50
• 3.3.1 SHEEC細(xì)胞的轉(zhuǎn)染條件42-43
• 3.3.2 最佳干擾鏈的篩選43-44
• 3.3.3 抑制SHEEC細(xì)胞NS表達(dá)對(duì)增殖相關(guān)指標(biāo)Cyclin B1和PTEN m RNA的影響44-45
• 3.3.4 SHEEC細(xì)胞NS低表達(dá)對(duì)NS、Cyclin B1和PTEN蛋白的影響45-46
• 3.3.5 細(xì)胞凋亡率檢測(cè)46-47
• 3.3.6 抑制NS表達(dá)對(duì)細(xì)胞周期的影響47-48
• 3.3.7 MTT法檢測(cè)抑制SHEEC中NC表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖的影響48-50
• 4 討論50-56
• 4.1 NS、Cyclin B1及PTEN在SHEE、SHEEC及基因沉默SHEEC細(xì)胞中的表達(dá)50-52
• 4.1.1 NS在SHEEC細(xì)胞中高表達(dá)50-51
• 4.1.2 Cyclin B1在SHEEC細(xì)胞中高表達(dá)51
• 4.1.3 PTEN在SHEEC細(xì)胞中低表達(dá)51-52
• 4.2 設(shè)計(jì)合成針對(duì)NS的si RNA及其干擾效果52-53
• 4.3 NS（核干細(xì)胞因子）是細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)因子53-54
• 4.4 NS表達(dá)下調(diào)對(duì)細(xì)胞凋亡及周期的影響54-55
• 4.5 NS si RNA干擾的臨床應(yīng)用前景55-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-62
• 綜述62-74
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74-75
• 致謝75

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1 陶德明;食管上皮增生與癌變關(guān)系的流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];腫瘤防治雜志;2001年02期

2 王麗,張莽,王敏彥,趙玉珍,叢慶文,雷建章;人正常食管上皮細(xì)胞的電鏡觀察[J];電子顯微學(xué)報(bào);2003年06期

3 張軍;李維琪;吾爾尼沙;;人正常食管上皮的電子顯微鏡觀察(摘要)[J];新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1981年01期

4 張軍;李維琪;吾爾尼沙;;人正常食管上皮的電子顯微鏡觀察[J];解剖學(xué)報(bào);1981年04期

5 劉桂亭,王君英;實(shí)驗(yàn)性大鼠食管上皮增生與腫瘤發(fā)生關(guān)系的研究[J];河南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1984年01期

6 李才英;張中興;趙恒忠;韓風(fēng)生;王用生;曹世國(guó);郭彥釵;;731例食管上皮增生自然轉(zhuǎn)歸隨訪分析[J];腫瘤防治研究;1992年02期

7 沈忠英,蔡維佳,沈健,陳志堅(jiān),李德銳;γ-射線誘導(dǎo)人食管上皮細(xì)胞死亡的模式及其劑量-時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系的研究[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年S1期

8 王雯,李兆申,許國(guó)銘,鄒多武,宛新建,劉婧;不同反流狀態(tài)下大鼠食管上皮細(xì)胞增殖狀態(tài)的變化[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2001年10期

9 李健,齊義軍,王立東;食管上皮永生化細(xì)胞系研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2005年11期

10 王淑君;王蔚虹;滕貴根;戴蕓;褚云香;李江;;幽門螺桿菌感染對(duì)食管上皮細(xì)胞的影響[J];世界華人消化雜志;2012年36期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 王麗;張莽;王敏彥;趙玉珍;叢慶文;雷建章;;人正常食管上皮細(xì)胞的電鏡觀察[A];第三屆全國(guó)掃描電子顯微學(xué)會(huì)議論文集[C];2003年

2 張國(guó)紅;蘇敏;田東萍;;慢性炎癥介導(dǎo)的基底膜改變?cè)谑彻苌掀ぐ┳冎械淖饔肹A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

3 李佩文;;六味地黃丸防止食管上皮重度增生癌變效果的觀察附211例報(bào)告[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

4 李月紅;孫巍;嚴(yán)霞;王娟;王俊靈;姚志剛;張祥宏;;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)成人食管上皮細(xì)胞TAP-1、LMP-2表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

5 唐競(jìng);;黑棗葉茶抑制小鼠前胃及食管上皮增生發(fā)生癌變的研究[A];食物功效成分與健康——達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心第九次學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議論文集[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 北京中醫(yī)醫(yī)院副院長(zhǎng) 王笑民;誰(shuí)與癌癥近在咫尺(下)[N];保健時(shí)報(bào);2010年

2 陳長(zhǎng)懷;食道癌的防治[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2003年

3 唐珍;老人多鼓腮有助消化[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 邢國(guó)蘭;胎兒食管上皮成熟分化與食管上皮癌變過程形態(tài)學(xué)變化特征比較研究[D];鄭州大學(xué);2007年

2 郭永軍;亞硝胺對(duì)人食管上皮癌基因的作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1992年

3 莊則豪;食管上皮細(xì)胞的COX-2表達(dá)、調(diào)控與細(xì)胞永生化及絲裂霉素C抗性[D];鄭州大學(xué);2003年

4 張林西;環(huán)氧化酶在食管上皮癌變中的表達(dá)及NSAIDs對(duì)食管癌細(xì)胞作用研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2003年

5 許欣;細(xì)胞凋亡調(diào)控因子在食管上皮癌變中的表達(dá)及其在去甲斑蝥素抗食管癌作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

6 李麗;細(xì)胞周期調(diào)控因子在食管上皮癌變中的表達(dá)及人參皂甙Rh2對(duì)Eca-109細(xì)胞作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

7 王娟;雜色曲霉素對(duì)永生化和原代培養(yǎng)人食管上皮細(xì)胞DNA損傷作用及細(xì)胞周期影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王娟;永生化食管上皮惡變細(xì)胞中核干細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞增殖的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

2 劉洋;p75~(NTR)與食管上皮細(xì)胞發(fā)育之間的關(guān)系[D];石河子大學(xué);2015年

3 郭軍輝;食管上皮癌變與胎兒食管上皮發(fā)育過程中形態(tài)、分子學(xué)研究[D];鄭州大學(xué);2009年

4 何曉琳;脫氧雪腐鐮刀菌烯醇影響人正常食管上皮細(xì)胞抗原提呈相關(guān)分子表達(dá)的時(shí)間效應(yīng)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

5 劉紅敏;胎兒食管上皮發(fā)育的形態(tài)及分子變化—與食管癌變多階段演進(jìn)對(duì)比研究[D];鄭州大學(xué);2008年

6 張國(guó)紅;基底膜改變?cè)谑彻苌掀ぐ┳冎凶饔玫某醪窖芯縖D];汕頭大學(xué);2005年

7 李曉昀;人胚食管上皮細(xì)胞永生化及其惡性轉(zhuǎn)化過程中的染色體異常研究[D];汕頭大學(xué);2001年

8 張穎;端粒在食管上皮癌變中的作用及生物學(xué)意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

9 黃思語(yǔ);甲基硝基亞硝基胍致哈薩克族正常食管上皮細(xì)胞表觀遺傳改變的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2014年

10 王曉菊;食管上皮癌變過程中多種細(xì)胞周期調(diào)控因子的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

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