本文關(guān)鍵詞：伊沙匹隆聯(lián)合水飛薊賓對人卵巢癌SKOV3細胞株血管生成作用的影響

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【摘要】：背景:卵巢癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一,死亡率高居婦科癌癥首位,對女性健康及生命造成極大危害.手術(shù)是治療卵巢癌的首要方法,但由于診斷卵巢癌的特異性及敏感性都不高,卵巢癌患者得到診斷時往往處于晚期,失去最佳手術(shù)時機,因此化療在卵巢癌的治療中發(fā)揮著舉足輕重的作用。卵巢癌的一線化療方案為PT(紫杉醇+鉑類)化療,由于最終腫瘤耐藥及復(fù)發(fā),晚期卵巢癌患者術(shù)后化療的5年生存率小于30%。人們迫切尋找新的化療藥,并對化療藥耐藥的機制進行探索。隨著研究的深入,人們對紫杉醇耐藥機制得到初步結(jié)果,最主要是由于腫瘤微管蛋白的改變及P-糖蛋白的過量表達等。天然細胞毒藥物埃博霉素是一類作用于微管蛋白與微管的大環(huán)內(nèi)酯類藥物,是針對紫杉醇耐藥問題而研發(fā)的新藥。該類藥物與紫杉烷類藥物抗腫瘤機制相似,且抗各種腫瘤細胞系比紫杉烷類作用更強。由百時美施貴寶公司研發(fā),于2007年10月經(jīng)美國食品藥品管理局(FDA)批準上市的伊沙匹隆成為首個代表埃博霉素類抗腫瘤藥物的藥品,當伊沙匹隆與微管蛋白結(jié)合時,促進微管蛋白聚合成微管并抑制其進行解聚,抑制細胞有絲分裂的進行,最終導(dǎo)致細胞凋亡。研究表明伊沙匹隆與紫杉醇作用機制相似且作用靶點相同,但對于由于微管蛋白改變導(dǎo)致的紫杉醇耐藥卻效果顯著,且伊沙匹隆并非通過ATP依賴性跨膜轉(zhuǎn)運泵P-糖蛋白(P-gp)進入細胞膜的,與紫杉醇耐藥性形成互補;該藥物在歐美上市后表現(xiàn)出強效抗癌活性,讓人們在克服癌癥的道路上再次看到希望。PI3K/AKT/m TOR信號通路在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中具有重大的作用,而其下游通路中的HIF-1α和VEGF在腫瘤的血管的生成、癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。實驗證明低濃度紫杉醇具有抗血管生成的作用,而伊沙匹隆在卵巢癌方面的凋亡及抗血管等作用鮮有報道。目的:伊沙匹隆及水飛薊賓對卵巢癌細胞凋亡作用及對PI3K/AKT/m TOR通路及其下游HIF-1α、VEGF因子的影響。方法:1.體外培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細胞株,模擬低氧環(huán)境,通過cck-8實驗研究不同濃度的伊沙匹隆(1umol/L,5umol/L,10umol/L,20umol/L,50umol/L)及水飛薊賓(100umol/L,200umol/L,400umol/L,600umol/L,800umol/L)單獨及聯(lián)合用藥后對SKOV3細胞增殖的影響。2.體外培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細胞株,模擬低氧環(huán)境,通過流式細胞技術(shù)檢測伊沙匹隆和水飛薊賓單獨及聯(lián)合用藥后對卵巢癌細胞的凋亡作用。3.通過酶聯(lián)免疫(ELISA)實驗和RT-PCR實驗檢測伊沙匹隆和水飛薊賓單獨及聯(lián)合用藥后對胞外分泌因子VEGF的影響。4.通過蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)實驗,與PI3K、m TOR的抑制劑進行對比,檢測伊沙匹隆和水飛薊對PI3K/AKT/m TOR通路及HIF-1α因子的作用。結(jié)果:1.模擬低氧環(huán)境,用不同濃度的伊沙匹隆作用于對數(shù)期的SKOV3細胞24h后,應(yīng)用CCK-8試劑處理檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)伊沙匹隆能夠抑制SKOV3細胞的增殖,隨著藥物濃度的加大,抑制率明顯提高,其IC50為9.84umol/L,水飛薊賓在相對較高濃度范圍內(nèi)也可以抑制SKOV3細胞的增殖,其IC50為365.23umol/L,水飛薊賓與伊沙匹隆聯(lián)合作用后明顯抑制細胞增殖作用。2.模擬低氧環(huán)境,用不同濃度的伊沙匹隆作用于對數(shù)期的SKOV3細胞24h后,運用流式細胞技術(shù)檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)伊沙匹隆及水飛薊賓對SKOV3細胞的凋亡作用明顯,水飛薊賓與伊沙匹隆聯(lián)合作用后對細胞凋亡抑制作用明顯提升。3.模擬低氧環(huán)境,運用酶聯(lián)免疫(ELISA)實驗和RT-PCR實驗檢測發(fā)現(xiàn)不同濃度伊沙匹隆及水飛薊賓抑制SKOV3細胞分泌的血管生長因子VEGF,兩者聯(lián)合作用后抑制了VEGF的生成及分泌。4.模擬低氧環(huán)境,不同濃度的伊沙匹隆和水飛薊賓單獨或聯(lián)合作用于對數(shù)期的SKOV3細胞24h后,通過蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)實驗,與PI3K、m TOR的抑制劑進行對比,檢測發(fā)現(xiàn)伊沙匹隆和水飛薊賓對PI3K/AKT/m TOR通路及HIF-1α因子有抑制作用,且聯(lián)合作用后效果顯著。結(jié)論:1.在模擬低氧環(huán)境下,于一定濃度范圍內(nèi),伊沙匹隆和水飛薊賓可有效提高對SKOV3細胞的抑制率,并且隨濃度的提升,抑制細胞增殖、促進凋亡的能力越強。同時,當伊沙匹隆與水飛薊賓聯(lián)合作用后,其抑制增殖及促進凋亡的作用效果明顯增強。2.在模擬低氧環(huán)境下,伊沙匹隆和水飛薊賓在一定濃度范圍內(nèi)能夠使SKOV3細胞內(nèi)PI3K/AKT/m TOR通路及其下游的HIF-1α、VEGF蛋白因子水平降低,并且二者聯(lián)合作用后效果增強。表明伊沙匹隆除了具有殺傷癌細胞的作用,對血管生成過程的重要生長因子也有抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 伊沙匹隆 水飛薊賓 凋亡 抗血管
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 前言4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-14
• 英文縮略詞14-15
• 第1章 緒論15-22
• 1.1 卵巢癌的發(fā)病情況15-16
• 1.2 卵巢癌的診斷與治療16-18
• 1.3 紫杉醇耐藥機制18-19
• 1.4 伊沙匹隆的發(fā)現(xiàn)及作用機制19-20
• 1.5 水飛薊賓的輔助作用20-21
• 1.6 PI3K/AKT/MTOR通路及其下游的HIF-1Α、VEGF因子21-22
• 第2章 實驗22-41
• 2.1 材料與方法22-34
• 2.1.1 材料22-25
• 2.1.2 實驗操作方法25-34
• 2.2 實驗結(jié)果34-38
• 2.2.1 SKOV3細胞增殖能力的改變34-36
• 2.2.2 SKOV3細胞凋亡率的改變36-37
• 2.2.3 和 2.2.4 SKOV3細胞分泌VEGF因子及VEGF基因的改變37-38
• 2.2.5 SKOV3細胞中PI3K/AKT/m TOR/HIF-1α蛋白表達的改變38
• 2.3 結(jié)果討論38-41
• 第3章 結(jié)論41-42
• 3.1 伊沙匹隆和水飛薊賓隨濃度的提升，對SKOV3細胞的抑制率、促進凋亡的能力越強，聯(lián)合作用后效果增強。41
• 3.2 伊沙匹隆和水飛薊賓通過PI3K/AKT/MTOR通路降低下游的HIF-1Α、VEGF表達水平，，聯(lián)合作用后效果增強。41-42
• 參考文獻42-50
• 作者簡介及在學(xué)期間的學(xué)術(shù)成果50-51
• 致謝51

【參考文獻】

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7 周t

本文編號：706113