本文關(guān)鍵詞：抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18在乳腺癌中的抗腫瘤作用及其機(jī)理

  更多相關(guān)文章： ErbB2 乳腺癌 全人源單克隆抗體 程序性細(xì)胞死亡

【摘要】：近年來乳腺癌已經(jīng)成為女性最常見的惡性腫瘤。每年乳腺癌的發(fā)病率都在不斷攀升,其中以包括我國在內(nèi)的發(fā)展中國家最為迅速。乳腺癌的死亡率一直居高不下,特別是ErbB2過表達(dá)的乳腺癌患者。ErbB2基因在25%-30%的乳腺癌患者的癌組織中有過度表達(dá),此類ErbB2過表達(dá)的乳腺癌生長速度快、侵襲性強(qiáng),易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感,易復(fù)發(fā)。故無病生存期短,預(yù)后差。Trastuzumab(商品名赫賽汀,Herceptin)是由羅氏制藥生產(chǎn)的靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構(gòu)域IV區(qū)的人源化IgG1型抗體,已于1998年獲得美國FDA批準(zhǔn)用于ErbB2高表達(dá)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療。但臨床數(shù)據(jù)顯示約70%的ErbB2過表達(dá)的乳腺癌患者對Trastuzumab治療不產(chǎn)生反應(yīng),且大部分對Trastuzumab發(fā)生反應(yīng)的患者也會在治療開始1年內(nèi)產(chǎn)生耐藥。Pertuzumab,帕妥珠單抗(商品名Perjeta)是由羅氏制藥生產(chǎn)的另一株靶向ErbB2受體胞外結(jié)構(gòu)域II區(qū)的人源化單克隆抗體。由于Trastuzumab抑制ErbB2同源二聚體和配體非依賴的異源二聚體,而Pertuzumab抑制配體依賴的ErbB2異源二聚體,兩者聯(lián)合用藥具有互補(bǔ)的抗腫瘤作用機(jī)理。盡管臨床試驗證實Trastuzumab和Pertuzumab二者聯(lián)用在Trastuzumab耐藥的患者中體現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性,但其客觀反應(yīng)率僅為25%,而完全反應(yīng)率低于8%。為了進(jìn)一步提高ErbB2靶向抗體的療效,我們通過篩選全人源噬菌體抗體庫獲得了一株靶向ErbB2受體胞外結(jié)構(gòu)域II區(qū)的全人源單克隆抗體——H2-18,并且驚奇地發(fā)現(xiàn)其能夠強(qiáng)有力地誘導(dǎo)ErbB2過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生程序性細(xì)胞死亡(Programmed cell death,PCD)。本文中將深入研究H2-18在ErbB2過表達(dá)乳腺癌細(xì)胞,特別是Trastuzumab耐藥乳腺癌細(xì)胞中的抗腫瘤作用,并闡述其誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的作用機(jī)制。通過MTS檢測的細(xì)胞活力實驗數(shù)據(jù)表明,雖然在Trastuzumab敏感細(xì)胞BT474和SKBR-3中,H2-18的作用效果遜色于Trastuzumab+Pertuzumab聯(lián)用組及Trastuzumab單藥組,但在Trastuzumab耐藥細(xì)胞HCC1954及HCC1419中的作用效果卻是最強(qiáng)的。并且其活力抑制率與其在敏感細(xì)胞中的相似,并未受耐藥機(jī)制影響,暗示H2-18的作用機(jī)制不同于Trastuzumab。流式Annexin V及PI雙染法結(jié)果顯示在Trastuzumab敏感及耐藥細(xì)胞中,H2-18皆能明顯誘導(dǎo)其死亡,死亡細(xì)胞主要位于右上雙陽性區(qū)。而其他抗體組不能產(chǎn)生這種作用。在體內(nèi)實驗中,我們構(gòu)建了Trastuzumab耐藥乳腺癌荷瘤裸鼠模型,通過對腫瘤大小及生長速度的觀察,評價出H2-18組較其他抗體組具有明顯優(yōu)勢。在對H2-18誘導(dǎo)程序性細(xì)胞死亡的機(jī)制研究中,我們確定這不是自噬,是一種caspase非依賴的,Bcl-2家族沒有進(jìn)行調(diào)節(jié)的死亡。利用TEM觀察細(xì)胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)其不具有凋亡的特征,卻與壞死更相似。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),此死亡通路由激活RIP1而觸發(fā),導(dǎo)致ROS產(chǎn)生。升高的ROS激活JNK通路,JNK被磷酸化激活后轉(zhuǎn)位入核,磷酸化底物c-Jun,活化的c-Jun最后通過轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)實現(xiàn)細(xì)胞的程序性死亡。H2-18具有獨特的PCD誘導(dǎo)活性,能夠有效抑制Trastuzumab耐藥乳腺癌生長,有望成為新的乳腺癌靶向治療候選藥物。本研究還將為設(shè)計更為有效的ErbB2靶向治療性抗體提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：ErbB2 乳腺癌 全人源單克隆抗體 程序性細(xì)胞死亡
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-10
• 前言10-13
• 第一部分 抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18抗腫瘤作用研究13-22
• 一、實驗材料13-14
• 二、實驗方法14-16
• 三、實驗結(jié)果16-20
• 四、實驗結(jié)果分析與討論20-22
• 第二部分 抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18抗腫瘤作用機(jī)制研究22-45
• 一、實驗材料22-27
• 二、實驗方法27-30
• 三、實驗結(jié)果30-39
• 四、實驗結(jié)果分析與討論39-45
• 全文結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 綜述51-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況說明60-61
• 致謝61

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：702783