本文關(guān)鍵詞：抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18在乳腺癌中的抗腫瘤作用及其機理

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【摘要】：近年來乳腺癌已經(jīng)成為女性最常見的惡性腫瘤。每年乳腺癌的發(fā)病率都在不斷攀升,其中以包括我國在內(nèi)的發(fā)展中國家最為迅速。乳腺癌的死亡率一直居高不下,特別是ErbB2過表達的乳腺癌患者。ErbB2基因在25%-30%的乳腺癌患者的癌組織中有過度表達,此類ErbB2過表達的乳腺癌生長速度快、侵襲性強,易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。對放、化療不敏感,易復發(fā)。故無病生存期短,預后差。Trastuzumab(商品名赫賽汀,Herceptin)是由羅氏制藥生產(chǎn)的靶向ErbB2受體胞外段結(jié)構(gòu)域IV區(qū)的人源化IgG1型抗體,已于1998年獲得美國FDA批準用于ErbB2高表達轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療。但臨床數(shù)據(jù)顯示約70%的ErbB2過表達的乳腺癌患者對Trastuzumab治療不產(chǎn)生反應(yīng),且大部分對Trastuzumab發(fā)生反應(yīng)的患者也會在治療開始1年內(nèi)產(chǎn)生耐藥。Pertuzumab,帕妥珠單抗(商品名Perjeta)是由羅氏制藥生產(chǎn)的另一株靶向ErbB2受體胞外結(jié)構(gòu)域II區(qū)的人源化單克隆抗體。由于Trastuzumab抑制ErbB2同源二聚體和配體非依賴的異源二聚體,而Pertuzumab抑制配體依賴的ErbB2異源二聚體,兩者聯(lián)合用藥具有互補的抗腫瘤作用機理。盡管臨床試驗證實Trastuzumab和Pertuzumab二者聯(lián)用在Trastuzumab耐藥的患者中體現(xiàn)出一定的抗腫瘤活性,但其客觀反應(yīng)率僅為25%,而完全反應(yīng)率低于8%。為了進一步提高ErbB2靶向抗體的療效,我們通過篩選全人源噬菌體抗體庫獲得了一株靶向ErbB2受體胞外結(jié)構(gòu)域II區(qū)的全人源單克隆抗體——H2-18,并且驚奇地發(fā)現(xiàn)其能夠強有力地誘導ErbB2過表達乳腺癌細胞發(fā)生程序性細胞死亡(Programmed cell death,PCD)。本文中將深入研究H2-18在ErbB2過表達乳腺癌細胞,特別是Trastuzumab耐藥乳腺癌細胞中的抗腫瘤作用,并闡述其誘導程序性細胞死亡的作用機制。通過MTS檢測的細胞活力實驗數(shù)據(jù)表明,雖然在Trastuzumab敏感細胞BT474和SKBR-3中,H2-18的作用效果遜色于Trastuzumab+Pertuzumab聯(lián)用組及Trastuzumab單藥組,但在Trastuzumab耐藥細胞HCC1954及HCC1419中的作用效果卻是最強的。并且其活力抑制率與其在敏感細胞中的相似,并未受耐藥機制影響,暗示H2-18的作用機制不同于Trastuzumab。流式Annexin V及PI雙染法結(jié)果顯示在Trastuzumab敏感及耐藥細胞中,H2-18皆能明顯誘導其死亡,死亡細胞主要位于右上雙陽性區(qū)。而其他抗體組不能產(chǎn)生這種作用。在體內(nèi)實驗中,我們構(gòu)建了Trastuzumab耐藥乳腺癌荷瘤裸鼠模型,通過對腫瘤大小及生長速度的觀察,評價出H2-18組較其他抗體組具有明顯優(yōu)勢。在對H2-18誘導程序性細胞死亡的機制研究中,我們確定這不是自噬,是一種caspase非依賴的,Bcl-2家族沒有進行調(diào)節(jié)的死亡。利用TEM觀察細胞形態(tài),發(fā)現(xiàn)其不具有凋亡的特征,卻與壞死更相似。進一步的研究發(fā)現(xiàn),此死亡通路由激活RIP1而觸發(fā),導致ROS產(chǎn)生。升高的ROS激活JNK通路,JNK被磷酸化激活后轉(zhuǎn)位入核,磷酸化底物c-Jun,活化的c-Jun最后通過轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)實現(xiàn)細胞的程序性死亡。H2-18具有獨特的PCD誘導活性,能夠有效抑制Trastuzumab耐藥乳腺癌生長,有望成為新的乳腺癌靶向治療候選藥物。本研究還將為設(shè)計更為有效的ErbB2靶向治療性抗體提供新的思路。
【關(guān)鍵詞】：ErbB2 乳腺癌 全人源單克隆抗體 程序性細胞死亡
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 縮略詞表8-10
• 前言10-13
• 第一部分 抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18抗腫瘤作用研究13-22
• 一、實驗材料13-14
• 二、實驗方法14-16
• 三、實驗結(jié)果16-20
• 四、實驗結(jié)果分析與討論20-22
• 第二部分 抗ErbB2全人源單克隆抗體H2-18抗腫瘤作用機制研究22-45
• 一、實驗材料22-27
• 二、實驗方法27-30
• 三、實驗結(jié)果30-39
• 四、實驗結(jié)果分析與討論39-45
• 全文結(jié)論45-46
• 參考文獻46-51
• 綜述51-60
• 參考文獻56-60
• 在讀期間發(fā)表論文和參加科研工作情況說明60-61
• 致謝61

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 顏麗萍;朱佳;李德全;楊華偉;牟偉綱;鄒虹;;聯(lián)合使用曲妥珠單抗和帕妥珠單抗在乳腺癌患者中心臟毒性的Meta分析[J];廣西醫(yī)科大學學報;2014年05期

2 胡雅彬;孫麗敏;陳泓宇;于鳴;胡美茹;施明;;Erbin表達缺失誘導MDA-453人乳腺癌細胞對曲妥珠單抗耐藥[J];軍事醫(yī)學;2013年11期

3 李偉;劉梓良;王軍;劉可佳;李勝;;帕妥珠單抗治療癌癥的皮疹發(fā)生率及其發(fā)生風險的Meta分析[J];華南國防醫(yī)學雜志;2014年12期

4 劉凡;沈浮;;赫賽汀聯(lián)合多西紫杉醇治療Her-2陽性晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌的臨床觀察[J];交通醫(yī)學;2015年04期

5 朱嘯林;程楓;錢關(guān)祥;;基于互補決定區(qū)移植的單抗人源化進展[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2007年11期

6 汪維佳;華育暉;陸楊;;靶向HER-2受體二聚化的新藥——帕妥珠單抗研究進展[J];實用腫瘤雜志;2013年06期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 查昭;抗ErbB2抗體chA21的抗腫瘤活性與作用機理研究[D];中國科學技術(shù)大學;2013年

2 劉丹;Erbin對Her2陽性乳腺腺癌細胞的遷移能力及赫賽汀耐藥的影響及相關(guān)機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2013年

3 黃圓;氟維斯群（ICI 182、780）逆轉(zhuǎn)P-gp介導乳腺癌多藥耐藥的體內(nèi)外研究[D];浙江大學;2013年

4 崔演;胃泌素、曲妥珠單抗通過上調(diào)CCKBR表達協(xié)同抑制胃癌細胞增殖機制的研究[D];延邊大學;2014年

5 張彥;卵巢癌相關(guān)分子標志物的初步鑒定及新型靶向抗體的制備[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2014年

6 曹小年;p55PIK在結(jié)直腸癌細胞增殖中的作用及其轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制的研究[D];華中科技大學;2014年

7 顧錫冬;miRNA在乳腺癌診斷及預后中的作用初探[D];浙江中醫(yī)藥大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 田偉華;高劑量維生素C殺死腎癌細胞相關(guān)機理研究[D];中國科學技術(shù)大學;2011年

2 劉曉東;GDC-0941誘導人食管癌EC9706細胞凋亡及相關(guān)機制的研究[D];鄭州大學;2013年

3 孟艷春;靶向ErbB2分子不同表位的雙特異性抗體的抗腫瘤作用及其機理[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

4 曾會會;晚期乳腺癌的維持治療[D];蚌埠醫(yī)學院;2014年

5 曲澤睿;191例中早期胃癌Her-2表達與臨床病理特征及預后相關(guān)性分析[D];山西醫(yī)科大學;2014年

6 張龍宵;胃癌胃鏡及手術(shù)標本中HER2蛋白檢測的對比研究[D];青島大學;2014年

7 李祺;TIP30、EGFR在HER-2陽性乳腺癌中的表達及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學;2014年

8 余峰;BKM120聯(lián)合多西紫杉醇、曲妥珠單抗對乳腺癌細胞和干細胞作用研究[D];天津醫(yī)科大學;2014年

9 續(xù)云潔;NVP-BEZ235通過抑制胰腺癌血管生成和促進細胞凋亡雙重作用抑制腫瘤[D];延邊大學;2014年

10 張敏;大環(huán)雙內(nèi)酯化合物FW-04-806對HER2陽性胃癌細胞的抗腫瘤作用及其機制研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

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本文編號：702783